蔣明哲，程向煒，褚建新

（1.杭州第四中學，浙江杭州 310018；2.浙江警察學院，浙江杭州 310053；3.浙江省人民檢察院，浙江杭州 310012）

氯化琥珀膽堿分析測定的研究進展

蔣明哲1，程向煒2，褚建新3

（1.杭州第四中學，浙江杭州 310018；2.浙江警察學院，浙江杭州 310053；3.浙江省人民檢察院，浙江杭州 310012）

氯化琥珀膽堿（suxamethonium chloride）是一種去極化類肌肉松弛藥，臨床用作全身麻醉時的肌肉松弛劑，使用過量可引起心動過緩、心律失常、心搏驟停、甚至死亡等不良反應。本文綜述了利用紅外光譜法、化學顯色反應法、滴定法、酶電極法以及色譜和質譜法等方法對氯化琥珀膽堿進行分析測定的研究進展。

法醫(yī)毒理學；氯化琥珀膽堿；綜述[文獻類型]

氯化琥珀膽堿（suxamethonium chloride）又稱司可林、氯琥珀膽堿、氯化琥珀酰膽堿，化學名為二氯化2，2’-［（1，4-二氧-1，4-亞丁基）雙（氧）］雙［N，N，N-三甲基乙胺］二水合物，分子式為C14H30Cl2N2O4· 2H2O。其屬于去極化類肌肉松弛藥，臨床用作全身麻醉時的肌肉松弛劑，可引起心動過緩、心律失常、心搏驟停等不良反應[1]，若超量注射該藥或不配合使用呼吸機的話，可致人支氣管痙攣或過敏性休克死亡，屬于B級有機劇毒品。因氯化琥珀膽堿使用不當而致人、畜死亡的案例屢見報道，特別是近年來該藥物被不法分子用于制作毒鏢盜狗，引發(fā)的他殺、誤傷事件時有發(fā)生[2-3]，從而成為當今司法實踐中的一個新問題。本文綜述了利用紅外光譜法、化學顯色反應法、滴定法、酶電極法以及色譜和質譜等方法對氯化琥珀膽堿進行分析測定的研究進展，以期為此類案件的鑒定和處理提供幫助。

1 紅外光譜法

《中國藥典》2010版[4]、《英國藥典》（British Pharmacopoeia，BP）2013版[5]、《歐洲藥典》（Europe Phar-macopoeia，EUP）7.0版[6]等藥典規(guī)定，用紅外光譜法對氯化琥珀膽堿進行測定，以KBr壓片法制備試樣，此法較適用于對純品的檢驗和確證，方法簡單易行。

2 化學顯色反應法

化學顯色反應法盡管有其局限性，但也是常用的傳統(tǒng)檢驗方法之一。對氯化琥珀膽堿進行測定的化學顯色反應主要有硫氰酸鉻銨沉淀法和氯化鈷/亞鐵氰化鉀顯色法。硫氰酸鉻銨沉淀法取本品約0.1g，用10mL水溶解后，加稀硫酸10mL與硫氰酸鉻銨試液30mL，生成淡紅色沉淀。氯化鈷/亞鐵氰化鉀顯色法取本品約20mg，用1mL水溶解后，再加1%氯化鈷溶液與亞鐵氰化鉀試液各0.1 mL，即顯持久的翠綠色。兩方法反應明顯，靈敏度視檢材的潔凈度和檢材量有關，需針對案件的具體情況選擇使用。

3 滴定法

滴定法是氯化琥珀膽堿定量的重要方法，在上述藥典[4-6]中，規(guī)定采用非水溶液滴定法測定氯化琥珀膽堿的含量。方法為取本品約0.15g，精密稱定，用冰醋酸20 mL溶解后，加醋酸汞試液5 mL與結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，至溶液顯藍色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1mL的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于18.07mg的琥珀膽堿。

而孟昭仁[7]則采用示波極譜-四苯硼鈉滴定法測定了包括氯化琥珀膽堿在內的季銨鹽類藥物含量。其方法是以四苯硼鈉為沉淀劑、四乙基氯化銨為滴定劑，采用示波極譜滴定法測定氯化琥珀膽堿、溴化新斯的明、碘解磷定三種氫鹵酸季銨鹽類藥物制劑的含量。樣品在pH=5.0的醋酸鈉-醋酸緩沖液中加入過量的四苯硼鈉，使試樣沉淀完全，過濾后濾液在堿性條件下用四乙基氯化銨標準溶液進行反滴定。該法具有簡便、準確、快速的優(yōu)點，是司法鑒定機構檢驗氯化琥珀膽堿的常用方法。

4 酶電極法

孫士青等[8]則采用酶電極法對氯化琥珀膽堿注射液氯化膽堿及氯化琥珀膽堿含量進行測定。由于氯化膽堿與氯化琥珀膽堿結構的相似性，使得化學分析法難以避免兩者的相互干擾。而該方法以固定化膽堿氧化酶（EC5896）結合H2O2電極構成電流型酶電極生物傳感器，能避免兩者之間的相互干擾。酶電極法測定氯化琥珀膽堿注射液中的氯化琥珀膽堿和氯化膽堿含量，樣品無需分離、操作簡便、分析速度快、精密度高。

5 色譜和質譜法

5.1 離子色譜法

鄭洪國等[9]采用抑制型離子色譜法對氯化琥珀膽堿注射液中氯化膽堿的含量進行了檢測。運用強親水性的IonPac CS17陽離子交換色譜柱分離，甲烷磺酸淋洗液梯度洗脫，抑制電導檢測氯化膽堿的含量。雖然氯化琥珀膽堿在酸性條件下能以二價陽離子形式存在，但因其碳鏈較長，結構較對稱，與陽離子交換色譜柱固定相之間作用較強，很難將其洗脫。由于IonPac CS17色譜柱具有較強的親水性，經過實驗發(fā)現(xiàn)，無需加入有機改進劑，使用淋洗液30 mmol/L甲基磺酸等度淋洗，約20 min即可將氯化琥珀膽堿進行洗脫。結果表明該方法操作簡單，選擇性好，靈敏度高，結果可靠。

陳祥國等[10]采用抑制性陽離子交換色譜法對生物檢材中的氯化琥珀膽堿進行了分析。運用離子交換色譜使離子在分析柱中達到分離，采用電導檢測器檢測。結果表明該方法操作簡便，結果準確。

5.2 高效液相色譜法

Chen等[11]考慮到氯化膽堿和氯化琥珀膽堿在酸性條件下以陽離子形式存在，運用反相高效液相色譜法對氯化琥珀膽堿注射液中的氯化膽堿含量進行了測定。采用C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5 μm），流動相A為正己烷磺酸鈉和乙腈，流動相B為乙腈和水，配合梯度分離，再通過抑制電導的方法檢測氯化琥珀膽堿注射液中的氯化膽堿含量，該方法于1996年被收錄進《美國藥典》（United States Pharmacopeia，USP）——USP29-NF24[12]。

李雙斌等[13]建立了正相硅膠反相洗脫色譜法測定氯化琥珀膽堿原料藥含量的方法。采用正相高效液相色譜法，Hanbon Si柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為緩沖溶液（四甲基氯化銨溶液，用鹽酸調節(jié)至pH=3.0）和甲醇。結果表明在該色譜條件下，氯化琥珀膽堿和各雜質分離度良好，該方法能夠準確地測定氯化琥珀膽堿的含量，操作簡便、靈敏度高。

5.3 液相色譜－質譜聯(lián)用法

氯化琥珀膽堿的定性確證檢驗目前主要依賴于質譜法，因該藥物具有在高溫不夠穩(wěn)定等特性，液相色譜-質譜的定性已作為首選，也成為當前我國司法機關檢案，特別是對生物檢材檢驗的主要方法。

Kuepper等[14]采用高效液相色譜-串聯(lián)質譜法（HPLC-MS/MS）同時測定了血液和尿液中的琥珀酰膽堿和琥珀酰單膽堿。其色譜條件為：Synergi Hydro-RP C18色譜柱（150mm×2mm，4μm），流動相A［V（甲酸銨）∶V（乙腈）=9∶1］，流動相B［V（甲酸銨）∶V（乙腈）= 1∶9］，進行梯度洗脫。質譜條件為：電噴霧電離源正離子模式（ESI），噴霧電壓為5 000 V，離子傳輸毛細管溫度為350℃。

宣宇等[15]采用OasisR WCX固相萃取柱，用甲醇溶液洗脫雜質，并用甲酸-乙腈-水溶液進行淋洗待測樣品。然后運用LC-MS-ESI對血液和尿液中的琥珀膽堿進行了檢測，并對標樣的穩(wěn)定性進行評價。其色譜條件為：色譜柱為Atlantis HILIC Silica色譜柱（2.1mm×150mm），流動相A為5mmol/L甲酸銨0.1%甲酸緩沖液；流動相B為甲醇，梯度洗脫。LC-MSESI檢測其母離子為145.1，并選擇115.5作為其定量離子。

Ho等[16]運用LC-MS-MS法，采用將極性基團嵌入的C18色譜柱，以3.10mmol/L的甲酸銨水溶液和乙腈為流動相，成功地對馬尿中的38種單電荷和雙電荷季銨鹽藥物進行了分離，其中也包括了氯化琥珀膽堿。

6 展望

目前對于氯化琥珀膽堿原藥分析檢測的報道大多數(shù)局限于對標準品的分析，而且檢測效果容易受樣品干擾，而對復雜環(huán)境下氯化琥珀膽堿的分離富集少有涉及。國內司法機構在對該藥物做理化鑒定，特別是對其在生物檢材中的檢驗，主要采用液相色譜－質譜聯(lián)用法，該方法提取簡單，實驗條件比較成熟，可以定性、定量測定氯化琥珀膽堿。在今后的司法鑒定領域中，對該藥物在生物檢材和體內代謝分析等方面，仍需做進一步研究。

[1]楊衛(wèi)紅，聞大翔，杭燕南.琥珀膽堿作用機制和臨床應用進展[J].上海醫(yī)學，2009，32（2）：158-162.

[2]暢守鵬，張宏，董曉麗.氯化琥珀膽堿急性中毒死亡1例[J].中國法醫(yī)學雜志，2012，27（3）：247.

[3]張劍，鄒樹良，張忠，等.氯化琥珀膽堿中毒1例[J].法醫(yī)學雜志，2011，27（5）：394.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1015

[5]Office of British Pharmacoeia Commision.BP2013[S]. 2013：0248.

[6]Office of Europe Pharmacoeia Commision.EUP7.0[S]. 2010：3028-3029.

[7]孟昭仁.測定季銨鹽類藥物含量的示波極譜——四苯硼鈉滴定法[J].分析測試學報，1999，18（5）：52-54.

[8]孫士青，王寧，葛淑蘭.酶電極法測定氯化琥珀膽堿注射液氯化膽堿及氯化琥珀膽堿含量[J].中國藥學雜志，1997，32（10）：609-611.

[9]鄭洪國，寧張磊，梁立娜，等.離子色譜法檢測氯化琥珀膽堿注射液中的氯化膽堿的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2147-2149.

[10]陳祥國，王淑真，呂紀忠，等.離子色譜法分析生物檢材中的氯化琥珀膽堿[J].刑事技術，2010，（6）：17-18.

[11]Chen S，Soneji V，Webster J.Determination of choline in pharmaceutical formulations by reversed-phase highperformance liquid chromatography and postcolumn suppression conductivity detection[J].J Chromatogr A，1996，739（1-2）：351-357.

[12]The United States Pharmacopeial Convention.USPM onographs：Succinylcholine Chloride.USP29-NF24[S]. 2006：4692-4694.

[13]李雙斌，梁永民，蔣琦，等.正相硅膠反相洗脫色譜法測定氯化琥珀膽堿的含量[C]//2009年藥物分析會議論文匯總，2009：49-57.

[14]Kuepper U，Musshoff F，Madea B.A fully validated isotope dilution HPLC-MS/MS method for the simultaneous determination of succinylcholine and succinylmonocholine in serum and urine samples[J].J Mass Spectrom，2008，43（10）：1344-1352.

[15]宣宇，孫楠，傅得鋒，等.液相色譜質譜聯(lián)用檢測血液和尿液中的琥珀膽堿及對標樣的穩(wěn)定性評價[J].分析試驗室，2011，30（8）：112-114.

[16]Ho EN，Kwok WH，Wong AS，et al.Detection of singly-anddoubly-chargedquaternaryammonium drugs in equine urine by liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J].Anal Chim Acta，2012，710：94-101.

（本文編輯：卓先義）

書訊

由程亦斌主編的《法醫(yī)鑒定文書制作理論與實踐》，已由科學出版社正式出版發(fā)行。

全書分上、下兩篇。其中，上篇8章、下篇5章，同時附錄了司法部2007年最新頒布并執(zhí)行的《司法鑒定文書規(guī)范》。上篇主要從理論的角度入手，對法醫(yī)司法鑒定文書的概念、結構、分類、制作指導思想及要求、邏輯用語、質量控制及質證審查等各個方面進行了系統(tǒng)的闡述和說明；下篇則收錄了法醫(yī)學各專業(yè)的司法鑒定文書，并針對每一份鑒定書，進行簡要點評與分析。

該書旨在為國內從事法醫(yī)司法鑒定的同仁提供一本制作法醫(yī)鑒定書的參考書籍，同時也可供法官、律師及司法鑒定管理人員參考使用，對規(guī)范司法鑒定秩序、提高鑒定人素質有著特殊的意義和價值，可作為法醫(yī)學鑒定人繼續(xù)教育培訓教材使用。該書定價70元，包裝郵寄費10元，共計80元。有意購書者請與本編輯部聯(lián)系。

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Progress on Suxamethonium Chloride Analysis

JIANG Ming-zhe1,CHENG Xiang-wei2,CHU Jian-xin3
（1.Hangzhou No.4 High School,Hangzhou 310018,China;2.Zhejiang Police College,Hangzhou 310053, China;3.The People’s Procuratorate of Zhejiang,Hangzhou 310012,China）

Suxamethonium chloride is a depolarizing muscle relaxant used in general anesthesia.In overdose,it causes adverse reactions such as bradycardia,arrhythmia,cardiac arrest,and death.The article reviews the progress on testing methods of suxamethonium chloride such as infrared spectroscopy,chemical color reaction,chemical titration,enzyme electrode,chromatography and mass spectrometry.

forensic toxicology;suxamethonium chloride;review[publication type]

DF795.1

10.3969/j.issn.1004-5619.2013.06.013

1004-5619（2013）06-0451-03

2013-09-02）

蔣明哲（1995—），男，浙江杭州人；E-mail：836520133@ qq.com

褚建新，男，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)毒物和微量物證檢驗鑒定和研究；E-mail：chujianxin@163.com