方禮祿，王朝軍，徐 利，沈 君，虞桂平，嚴彩虹，楊 光

（1.北京市SPF豬育種管理中心，北京 100194；2.北京市養(yǎng)豬育種中心，北京 100194）

ELISA可測定抗原，也可測定抗體。固相的抗體（抗原）、酶標記的抗體（抗原）和酶作用的底物，這3種試劑缺一不可。按照試劑的來源、標本的性狀及檢測的條件，可將ELISA技術(shù)分為間接法測抗體、雙位點一步法、雙抗體夾心法、捕獲法、競爭法、應用親和素和生物素的ELISA[1]。

1 ELISA的原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗體（抗原）的固相化及抗體（抗原）的酶標記，基本原理為抗體（抗原）吸附在固相載體的外表面，且要維持抗體（抗原）的免疫活性；抗體（抗原）能通過共價鍵來與酶連接而形成酶復合物，這種酶復合物的免疫學和酶學活性都沒有發(fā)生改變；酶復合物與對應的抗體（抗原）結(jié)合后，可依據(jù)加入底物后的顏色變化來判定是否有免疫反應，并且顏色變化的深淺與試驗中相應抗體（抗原）的量成正相關(guān)，因此可以依據(jù)底物顯色的深淺程度來判定試驗結(jié)果。ELISA是一種敏感度極高且特異極強的試驗方法，與傳統(tǒng)分析方法相比，敏感度更高、特異性更強、準確度更高、操作更簡單方便、更經(jīng)濟實惠。

2 ELISA技術(shù)在豬病檢測中的應用

豬病給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失，直接打擊養(yǎng)殖戶的積極性，致使我國養(yǎng)豬業(yè)不能健康快速發(fā)展。只有對豬疾病做到正確診斷，才能給養(yǎng)豬業(yè)減少經(jīng)濟損失，從而促進養(yǎng)豬行業(yè)的發(fā)展。目前ELISA已被廣泛應用于畜牧業(yè)的動物飼料農(nóng)藥殘留測定、動物疾病診斷、畜產(chǎn)品安全檢測、環(huán)境污染控制等領(lǐng)域。

2.1 豬病毒性傳染病的診斷

2.1.1 豬繁殖與呼吸障礙綜合征

建立檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）抗體的間接ELISA所用的包被抗原有PRRSV的N重組蛋白、GST-GP5-M重組融合蛋白、ORF5重組蛋白、GP5重組膜蛋白及PRRSV[2-5]。PRRSV的N重組蛋白ELISA與IDEXX公司ELISA試劑盒的檢測結(jié)果符合率是91%，與IDEXX-ELISA的檢測陽性符合率為92.7%；PRRSV的GST-GP5-M重組融合蛋白ELISA與IDEXX-ELISA的檢測結(jié)果符合率為94.1%；PRRSV的ORF5重組蛋白ELISA與海博萊試劑盒的檢測結(jié)果符合率為100%；以膜蛋白為包被抗原的ELISA陽性率的降幅度顯著高于以核衣殼蛋白為包被抗原的ELISA[2-5]。孫淑芳等采用抗PRRS N蛋白單克隆抗體建立檢測PRRSV抗體競爭性ELISA，其敏感性高、特異性好，與IDEXX的PRRSV ELISA的檢測結(jié)果符合率＞90%[6]。

2.1.2 豬偽狂犬病毒

建立檢測豬偽狂犬病毒（PRV）抗體的間接ELISA所用的包被抗原包括PRV、PRV的gE630重組蛋白及gB重組蛋白[7-9]。祁小樂等建立了一套具有特異性強、敏感性高、方便可靠和簡單快捷的檢測PRV的單克隆抗體雙夾心ELISA，為PRV的快速診斷奠定了基礎(chǔ)[10]。汪招雄等把PRV Ea株特異性單克隆抗體576株作為捕獲抗體、把已純化的抗PRV IgG作為檢測抗體，成功建立了一種可廣泛應用于動物組織中PRV檢測的雙抗體夾心ELISA，比PCR檢測方法敏感[11]。其中PRV ELISA與美國ELISA陰、陽性的檢測結(jié)果完全符合，PRV gE630重組蛋白ELI?SA與進口診斷試劑盒的檢測符合率高達96.3%，PRV重組gB蛋白ELISA與IDEXX PRV gB ELISA試劑盒的檢測結(jié)果符合率為79%[8-9]。

2.1.3 豬瘟

馮朝興成功建立了一種能聯(lián)合檢測豬瘟（CSF）、豬鏈球菌和豬巴氏桿菌抗體的Dot-PPAELISA[12]。楊利峰等利用生物素標記的探針在鏈親和素包被的微量板孔中雜交捕獲地高辛標記的PCR產(chǎn)物并進行免疫顯色的原理建立了一種檢測CSF的RT-PCR ELISA[13]。魏巍等以CSF病毒囊膜糖重組蛋白E2為包被抗原建立的一種檢測CSF抗體的間接ELISA，其與法國LSI公司試劑盒的檢測符合率為83.6%，且敏感度不低于進口Idexx試劑盒[14]。

2.1.4 豬戊型肝炎病毒

建立的檢測豬戊型肝炎病毒（HEV）抗體的ELI?SA所用的包被抗原有HEV重組蛋白AG02、DQ1重組蛋白、ORF3重組蛋白、ORF2-C重組蛋白、ORF2-N重組蛋白及ORF3的一段序列合成肽swHEV11[15-17]。其中ORF2重組蛋白ELISA和swHEV11 ELISA與北京萬泰ELISA試劑盒的陽性符合率分別為91.5%和73.4%，ORF2-C ELISA的檢測效率顯著高于ORF2-N[18-19]。

2.1.5 口蹄疫病毒

朱彩珠等以口蹄疫病毒（FMDV）非結(jié)構(gòu)重組蛋白3AB（FMDV-3AB）多肽為抗原建立的檢測FMD血清抗體的間接ELISA，其比VIAA-AGID法檢出率高，特異性也高于3ABC-I-ELISA[20]。王光華等以FMDV VP1重組結(jié)構(gòu)蛋白為抗原建立的檢測豬FMD抗體的間接ELISA，其與液相阻斷ELISA的檢測結(jié)果符合率為96.25%，與HA的檢測結(jié)果符合率高達96.2%，與上海優(yōu)耐特FMDV VP1 ELISA檢測結(jié)果符合率為87.27%[21]。

2.1.6 豬日本乙型腦炎病毒

建立檢測豬日本乙型腦炎病毒（JEV）抗體的間接ELISA所用的包被抗原包括JEV、JEV囊膜E重組蛋白及JEV非結(jié)構(gòu)重組蛋白NS1[22-24]。其中JEV囊膜重組E蛋白ELISA與康柏德豬乙腦ELISA的符合率為82%，JEV非結(jié)構(gòu)重組蛋白NS1 ELISA與商品化試劑盒檢測結(jié)果的符合率為96.0%[22-24]。

2.1.7 其他

建立檢測豬2型圓環(huán)病毒（PCV2）抗體的ELISA所用的包被抗原有PCV2 ORF2重組蛋白及PCV2 Cap重組蛋白[25-27]。PCV2 Cap重組蛋白ELISA與國產(chǎn)商品化試劑盒檢測結(jié)果符合率為95.6%[26]。以豬傳染性胃腸炎病毒N重組蛋白為包被抗原建立的檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測的間接ELISA，與Svanova TGEV/PRCV antibody diagnosis Kit的檢測結(jié)果符合率為87.0%[28]。建立檢測豬流感病毒抗體的間接ELISA所用的包被抗原有豬流感病毒、HI亞型豬流感HA1重組蛋白、HI亞型豬流感HA重組蛋白[29-31]。

2.2 豬細菌性傳染病的診斷

2.2.1 豬鏈球菌

歐瑜等以提取的豬鏈球菌2型分離株HA9801溶菌酶釋放蛋白（MRP）的抗體和胞外因子（EF）的抗體，分別建立了檢測豬鏈球菌的Dot-ELISA和間接ELISA[32]。建立檢測豬鏈球菌2型MRP抗體的間接ELISA所用的包被抗原包括豬鏈球菌2型重組MRP蛋白、豬鏈球菌2型分泌核酸酶基因（SsnA）重組蛋白、Sez與Ss2的全菌（WAC）、超聲波抗原（UA）及英膜多糖（CPS）作為抗原方法。其中CPSELISA方法具有較好的特異性、靈敏性、穩(wěn)定性及應用推廣價值[33-34]。

2.2.2 副豬嗜血桿菌

建立檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA所用的包被抗原包括：副豬嗜血桿菌、副豬嗜血桿菌的莢膜多糖（CPS）、副豬嗜血桿菌重組外膜蛋白P5及副豬嗜血桿菌重組外膜蛋白P2[35-38]。其中CPSELISA與間接血凝試驗（IHA）的符合率為65.3%，且敏感性比IHA-ELISA高500%～1 000%[36]。

2.2.3 豬源支氣管敗血波氏桿菌

趙戰(zhàn)勤等以豬源支氣管敗血波氏桿菌（Bb）的重組蛋白百日咳桿菌黏附素（PRN）為包被抗原，建立了一種檢測天然PRN抗體的間接ELISA[39]。何華等以豬源支氣管敗血波氏桿菌的菌毛fimD重組蛋白為包被抗原，建立了檢測豬源支氣管敗血波氏桿菌抗體的間接ELISA（fimD-ELISA）[40]。譚春萍以豬支氣管敗血波氏桿菌皮膚壞死毒素（DNTN）重組蛋白為抗原，建立了檢測DNT抗體的間接ELISA[41]。

2.2.4 豬胸膜肺炎放線桿菌

劉建杰等以純化的豬胸膜肺炎放線桿菌（APP）毒素Ⅰ重組蛋白為包被抗原，建立了一種檢測毒素Ⅰ血清抗體的ELISA方法[42]。賈凡以純化的豬胸膜肺炎放線桿菌毒素ApxⅡ重組蛋白和毒素ApxIV重組蛋白為包被抗原，分別建立了兩種檢測豬胸膜肺炎放線桿菌血清中毒素ApxⅡ及ApxIV抗體的ELISA，其中pxIV-ELISA具有較高的特異性和敏感性，與CHEKIT-APP-APXIV試劑盒檢測結(jié)果的符合率為91.37%[43]。張志妮以豬胸膜肺炎放線桿菌毒素重組蛋白ApxⅣ疫BALB/c小鼠，取其脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/O進行融合，以重組蛋白ApxⅣ和表達宿主菌的菌體蛋白為檢測抗原，篩選出兩株分泌穩(wěn)定、為IgG且有不同的抗原結(jié)合表位的雜交瘤細胞：587、5C11，建立了一種檢測ApxⅣ毒素的雙抗體夾心ELISA[44]。杜軍等用胸膜肺炎放線桿菌血清2型（1536）菌液與弗氏不完全佐劑等體積混合乳化后免疫大白兔，制備兔高免血清，再提純抗體，建立了一種檢測豬傳染性胸膜肺炎血清2型抗體的雙夾心ELISA[45]。

2.2.5 豬水腫毒素

趙戰(zhàn)勤等建立的一種檢測豬水腫毒素抗體的ELISA，是以純化的豬水腫毒素A亞基重組蛋白為包被抗原[46]。張建民等以豬水腫毒素A亞基重組蛋白作抗原免疫BALB/c小鼠制備單抗，并利用表達蛋白和豬水腫毒素A亞基單抗酶結(jié)合物，建立了一種檢測豬水腫毒素抗體的競爭性ELISA[47]。

2.2.5 豬附紅細胞體

韓惠瑛等用純化的豬附紅細胞體抗原免疫兔制備超免疫血清，以辣根過氧化物酶標記葡萄球菌A蛋白作為二抗，建立了一種檢測豬附紅細胞體的PPA-ELISA[48]。張守發(fā)等以純化的豬附紅細胞體抗原作為包被抗原，建立了一種檢測豬附紅細胞體抗體的Dot-ELISA[49]。

2.3 豬支原體性傳染病的診斷

逯曉敏等、陳杰、沈青春等、張長瑩等建立了檢測豬支原體的間接ELISA，所用的包被抗原包括豬肺炎支原體黏附因子P97R1重組蛋白、豬肺炎支原體膜蛋白、豬肺炎支原體重組P46膜蛋白及豬支原體MSG1重組蛋白質(zhì)[50-53]。張長瑩等以豬嗜血支原體重組MSG1蛋白和辣根過氧化酶標記的MSG1蛋白單抗建立了一種檢測豬嗜血支原體的阻斷ELISA[54]。劉星等用豬鼻支原體CVCC361免疫BALB/c小鼠，通過雜交瘤技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選出抗該病原體的單克隆抗體，并篩選出配對抗體，建立了一種檢測抗豬鼻支原體的雙抗體夾心ELISA[55]。陳杰等建立的檢測豬肺炎霉形體抗體的間接ELISA是以純化的豬肺炎霉形體ATCC25095株膜蛋白包被抗原的[56]。

2.4 豬衣原體性傳染病的診斷

梅仕林以純化的流產(chǎn)嗜性衣原體CP/12株種不同片段大小多型性的重組外膜蛋白90為包被抗原，建立了檢測流產(chǎn)嗜性衣原體抗體的間接ELISA[57]。

2.5 豬寄生蟲疾病的診斷

何光志等建立的檢測豬旋毛蟲抗體的間接ELI?SA所用的包被抗原是豬旋毛蟲重組Ts88蛋白[58]。江濤等建立的檢測豬弓形蟲抗體的間接ELISA是以弓形蟲重組微線體蛋白3（rMIC3）為包被抗原的[59]。王秋霞等建立的快速檢測豬囊尾蚴病的間接ELISA所用的包被抗原是豬囊尾蚴重組蛋白M13h[60]。

3 小結(jié)

豬病的發(fā)生和流行是影響和制約我國養(yǎng)豬行業(yè)發(fā)展的重要因素，由于畜產(chǎn)品國際間交流的日益頻繁，一些豬傳染病流入我國，導致某些新侵入的傳染病快速傳播，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大危害[62]。這就需要簡單方便、快速、準確、經(jīng)濟實用等優(yōu)點的方法檢測豬疾病。目前用于檢測我國豬病的國產(chǎn)ELISA主要是間接ELISA，相信隨著技術(shù)發(fā)展，我國ELISA技術(shù)的敏感性、特異性會更強，準確性會更高，操作會更簡單、快速和經(jīng)濟更實惠，種類會更多。

[1] 武文君,張映,方禮祿,等.ELISA技術(shù)在畜牧業(yè)中的應用進展[J].飼料博覽,2012（5）:14-17.

[2] 夏平安,尹彥濤,李素平,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒重組N蛋白的高效表達及間接ELISA方法的建立[J].中國獸醫(yī)學報,2009,29（5）:537-541.

[3] 江云波,方六榮,肖少波,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）GP5-M在大腸桿菌中的融合表達及其ELISA診斷方法的建立[J].生物工程學報,2005,21（2）:259-264.

[4] 蔡汝健.PRRSV的RdRp、ORF3和ORF5基因的原核表達及間接ELISA方法的建立[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學,2009.

[5] 吳雪軍,周彩琴,趙靈燕,等.檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒抗體的兩種ELISA方法的比較及其應用[J].中國獸醫(yī)雜志,2012,48（4）:27-29.

[6] 孫淑芳,包振民,郭福生,等.競爭ELlSA檢測豬呼吸與繁殖綜合征病毒抗體研究[J].中國動物檢疫,2006,23（8）:19-22.

[7] 曹斌,謝獻勝.間接ELISA快速檢測豬PRV抗體方法的建立[J].畜牧與獸,2007,39（2）:46-47.

[8] 樊淑華,吳鳳筍,李文剛,等.豬偽狂犬重組抗原間接ELISA診斷方法的建立[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43（5）:3-5.

[9] 羅飛.豬偽狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白gB和gD主要抗原區(qū)的原核表達以及豬血清PRV gB抗體間接ELISA檢測方法的建立[D].揚州:揚州大學,2010.

[10] 祁小樂,崔保安,牛春玲,等.豬偽狂犬病病毒單抗雙夾心ELI?SA的構(gòu)建[J].河南農(nóng)業(yè)大學學報,2004,38（4）:387-393.

[11] 汪招雄,何啟蓋,劉麗娜,等.檢測偽狂犬病病毒雙抗體夾心間接ELISA方法的建立與應用[J].中國預防獸醫(yī)學報,2006,28（2）:220-225.

[12]馮朝興.Dot-PPA-ELISA聯(lián)合檢測豬瘟、豬鏈球菌和豬巴氏桿菌抗體方法的建立[D].雅安:四川農(nóng)業(yè)大學,2004.

[13] 楊利峰,楊建民,周向梅,等.豬瘟RT-PCR ELISA斷方法的建立[J].中國獸醫(yī)學報,2007,27（3）:292-295.

[14] 魏巍,劉璇,黃小國,等.豬瘟病毒囊膜糖蛋白E2的原核表達及重組蛋白ELISA應用[J].畜牧與獸醫(yī),2008,40（6）:70-72.

[15] 王琴,徐璐,范學政,等.豬瘟抗體間接ELISA檢測試劑盒的研制[C].成都:中國畜牧獸醫(yī)學會2011學術(shù)年會論文集,2010.

[16] 張可心,趙敏,郭巍,等.豬戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表達及間接ELISA方法的初步建立[J].中國生物工程雜志,2006,26（8）:37-41.

[17] 趙宇軍,許冬梅,朱遠茂,等.豬戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白片段的表達及其在ELISA中的初步應用[J].畜牧獸醫(yī)學報,2006,37（11）:1 198-1 201.

[18] 聞曉波,王密,冉旭華,等.豬戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位區(qū)間接ELISA方法的初步建立[J].中國畜牧獸醫(yī),2010,37（5）:99-102.

[19] 劉啟文,李震,趙凱,等.豬戊型肝炎ELISA診斷試劑盒的研制及應用[J].畜牧獸醫(yī)學報,2010,41（11）:1 435-1 441.

[20] 祝秀梅,盧曾軍,胡永浩,等.檢測豬血清口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3AB抗體ELISA方法的建立[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學學報,2008,43（1）:33-37.

[21] 王光華,獨軍政,叢國正,等.豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體間接ELISA方法的建立[J].生物工程學報,2007,23（5）:961-966.

[22] 沈婷,周斌,陳溥言.檢測豬乙型腦炎病毒抗體間接ELISA方法的建立與應用[J].畜牧與獸醫(yī),2010,42（4）:1-7.

[23] 張寧,金洪濤,丁壯,等.豬乙型腦炎病毒囊膜E蛋白間接ELI?SA診斷方法的建立與初步應用[J].中國畜牧獸醫(yī),2010,37（7）:170-175.

[24] 吳鵬,曹瑞斌,周斌,等.乙腦病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的原核表達及重組蛋白間接ELISA方法的初步建立[J].畜牧與獸醫(yī),2010,42（3）:5-8.

[25] 劉雨豐,馬攀攀,陳陸,等.豬圓環(huán)病毒2型特異性lgA間接ELISA檢測方法的建立與初步應用[J].中國預防獸醫(yī)學報,2012,34（4）:301-304.

[26] 林彥星,孫彥偉,劉鎮(zhèn)明,等.應用原核表達的豬圓環(huán)病毒Ⅱ型Cap蛋白建立一種間接ELISA診斷方法[J].中國預防獸醫(yī)學報,2007,29（3）:217-221.

[27] 趙玲,朱玲,郭萬柱,等.豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的表達及在ELISA中的初步應用[J].畜牧獸醫(yī)學報,2011,42（6）:808-814.

[28] 孫東波,馮力,時洪艷,等.豬傳染性胃腸炎病毒重組N蛋白抗原間接ELISA抗體檢測方法的建立[J].中國預防獸醫(yī)學報,2006,28（5）:572-576,580.

[29] 陳艷,辛曉光,楊煥良,等.豬流感抗體間接ELISA檢測方法的建立[J].中國預防獸醫(yī)學報,2007,29（4）:308-311.

[30] 高蕾,劉思當,肖一紅,等.H1亞型豬流感病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立及其應用[J].生物工程學報,2011,27（5）:805-811.

[31] 萬春和,劉明,劉春國,等.H1亞型豬流感病毒血凝素基因在昆蟲細胞中的表達及其間接ELISA方法的初步建立[J].微生物學報,2008,8（2）:220-225.

[32] 歐瑜,陸承平.檢測豬鏈球菌2型毒力相關(guān)蛋白的ELISA法的建立[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報,2001,24（2）:94-97.

[33] 周俊明,何孔旺,倪艷秀,等.豬鏈球菌2型溶菌酶釋放蛋白部分片段的原核表達及其抗體間接ELISA檢測方法的建立[J].江蘇農(nóng)業(yè)學報,2012,28（1）:80-85.

[34] 李明,何孔旺,陸承平.檢測兩種豬源鏈球菌抗體間接ELISA方法的篩選與應用[J].中國人獸共患病雜志,2005,21（10）:867-870,866.

[35] 馮小明,儲岳峰,賀英,等.副豬嗜血桿菌抗體間接ELISA檢測方法的建立與應用[J].中國獸醫(yī)科學,2009,39（7）:597-601.

[37] 王艷,夏萬田,柏坤桃,等.副豬嗜血桿菌血清5型間接血凝試驗和間接ELISA抗體檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫(yī),2006,38（3）:5-7.

[37] 陳善真,李春玲,賈愛卿,等.副豬嗜血桿菌OMP5基因的克隆、表達及間接ELISA檢測方法的建立[J].中國農(nóng)業(yè)科學,2011,44（14）:3 036-3 044.

[38] 李淼,李春玲,葉嚴鋒,等.基于重組外膜蛋白P2的副豬嗜血桿菌抗體間接ELISA方法的建立[J].華北農(nóng)學報,2011,26（4）:61-66.

[39] 趙戰(zhàn)勤,薛云,吳斌,等.豬源支氣管敗血波氏桿菌百日咳桿菌黏附素基因的原核表達及其抗體檢測ELISA方法[J].微生物學報,2008,48（3）:330-336.

[40] 何華,裴潔,吳斌,等.豬支氣管敗血波氏桿菌菌毛fimD基因的克隆表達及間接ELISA檢測方法的建立[J].畜牧獸醫(yī)學報,2009,40（1）:98-102.

[41]譚春萍.豬支氣管敗血波氏桿菌皮膚壞死毒素基因的原核表達及間接ELISA檢測方法的初步建立[D].南寧:廣西大學,2010.

[42] 劉建杰,何啟蓋,陳煥春,等.豬胸膜肺炎放線桿菌毒素Ⅰ基因的克隆、表達及其ELISA檢測方法的建立[J].中國農(nóng)業(yè)科學,2004,37（1）:148-151.

[43]賈凡.胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及ELISA試劑盒的研制與應用[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學,2007.

[44] 張志妮.豬胸膜肺炎放線桿菌感染特異性診斷方法的建立:PCR和夾心ELISA[D].揚州:揚州大學,2009.

[45] 杜軍,張強,李樹清,等.雙夾心ELISA檢測豬傳染性胸膜肺炎血清2型抗體方法的建立[J].新疆農(nóng)業(yè)大學學報,2009,32（6）:46-50.

[46] 趙戰(zhàn)勤,盧順,吳斌,等.豬水腫毒素A亞基基因表達產(chǎn)物的生物學特性及抗體檢測ELISA方法的建立[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報,2007,15（3）:378-382.

[47] 張建民,吳斌,趙戰(zhàn)勤,等.豬水腫毒素單抗競爭ELISA試劑盒的研制及應用[J].畜牧獸醫(yī)學報,2009,40（7）:1 054-1 058.

[48] 韓惠瑛,孟日增,賈鴻蓮,等.豬附紅細胞體PPA-ELISA檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科技,2005,35（1）:51-53.

[49] 張守發(fā),張國宏.豬附紅細胞體Dot-ELISA檢測方法的建立[J].中國預防獸醫(yī)學報,2006,28（1）:96-98.

[50] 逯曉敏,馮志新,劉茂軍,等.抗豬肺炎支原體IgA間接ELISA檢測方法的建立[J].畜牧獸醫(yī)學報,2009,40（10）:1 569-1 574.

[51] 陳杰.豬肺炎支原體膜蛋白免疫親和層析及ELISA檢測方法的建立[D].雅安:四川農(nóng)業(yè)大學,2008.

[52] 沈青春,王芳,韓明遠,等.豬肺炎支原體重組P46基因的原核表達與間接ELISA方法的建立[J].畜牧獸醫(yī)學報,2012,43（3）:431-437.

[53] 張長瑩,李玉峰,華榮蓉,等.豬支原體重組MSG1蛋白間接ELISA檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫(yī),2011,43（2）:12-18.

[54] 張長瑩,李玉峰,姜平.豬嗜血支原體酶標單抗阻斷ELISA檢測方法的建立[J].畜牧獸醫(yī)學報,2011,42（11）:1 591-1 597.

[55] 劉星,張麗芳,楊玉萍,等.抗豬鼻支原體單克隆抗體的研制及雙抗體夾心ELISA檢測法的建立[J].中國比較醫(yī)學雜志,2008,18（3）:55-58.

[56] 陳杰,熊焰,石謙,等.豬肺炎霉形體膜蛋白抗體間接ELISA檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學,2008,38（12）:1 020-1 024.

[57] 梅仕林.豬流產(chǎn)嗜性衣原體病間接ELISA抗體檢測方法的建立[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學,2009.

[58] 何光志,田維毅,王平,等.應用間接ELISA檢測豬旋毛蟲抗體[J].中國動物檢疫,2010,27（1）:47-48.

[59] 江濤,姚寶安,趙俊龍.重組抗原rMIC3-ELISA檢測豬弓形蟲抗體的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2009,37（34）:17 286-17 287.

[60] 王秋霞,馬景周,寧長申,等.基于豬囊尾蚴M13h蛋白的ELI?SA方法的優(yōu)化[J].華北農(nóng)學報,2011,26（4）:72-76.

[61] 宣長河,馬春全,陳志寶,等.豬病學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2010.