楊白玉,苗艷萍，范曉青

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117)

清心片是以丹參、槐花、川芎、三七、紅花、降香、赤芍等中藥加工而成的片劑。其主藥為丹參，丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖。主產(chǎn)于四川、山東、江蘇、安徽等省。味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)。有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消痛。用于胸痹心痛，脘腹脅痛， 瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛等功效[1-2]。丹參素是清心片中發(fā)揮藥理活性的主要成分，因此，清心片中丹參素含量是評(píng)價(jià)清心片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要指標(biāo)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

島津高效液相色譜儀，LC-10ATvp 溶劑輸送泵，SPD-10Avp 紫外—可見(jiàn)檢測(cè)器。PV ODS(150×4.6) 色譜柱。島津紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)：UV-1601(PC)S 型。甲醇：美國(guó)新澤西Fisher化學(xué)藥品，高效液相色譜純。水：超純水。冰乙酸：北京化工廠產(chǎn)品，優(yōu)級(jí)純(G.R)；丹參素鈉對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所， 供含量測(cè)定用，批號(hào)：110855-200506。

2 方法與結(jié)果

采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜法，對(duì)制劑中的丹參素進(jìn)行含量測(cè)定[3-4]。

2.1 定性鑒別

2.1.1 取本品3 g，加甲醇30 mL，超聲處理5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取槐花對(duì)照藥材1 g，加水50 mL，煎煮30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0 mL，超聲處理5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μL，對(duì)照藥材溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一以0.6%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜的相應(yīng)位置上，顯一相同顏色的斑點(diǎn)。

2.1.2 取本品鑒別(2.1.1)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材1 g,加水50 mL，水煎1 h，濾過(guò)，濾液濃縮，蒸干，殘?jiān)右颐?0 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，藥渣揮去乙醚，自“加甲醇20 mL起”依法制成對(duì)照藥材溶液，再取芍藥苷對(duì)照品,加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一以0.6%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

定性鑒別合格后，采用高效液相色譜法，以丹參素為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行含量測(cè)定。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 在清心片原標(biāo)準(zhǔn)中(《中國(guó)藥典》2010年版一部)測(cè)定丹參素的含量時(shí)，以283 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。我們對(duì)仿制的清心片含量測(cè)定進(jìn)行方法學(xué)考察時(shí)，首先進(jìn)行了測(cè)定波長(zhǎng)的選擇試驗(yàn)，具體方法是：精密稱取丹參素鈉對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含48 μg的溶液，加入紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)吸收池內(nèi)，在波長(zhǎng)190～600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在波長(zhǎng)283 nm有最大吸收。

2.3 系統(tǒng)適用性 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰乙酸(2∶95∶2∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm。理論板數(shù)按丹參素峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

2.4 供試品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備[5-8]對(duì)照品溶液的制備：取丹參素鈉對(duì)照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成每1 mL含50 μg(相當(dāng)于每1 mL含丹參素45 μg)的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取清心片10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸溶液(1→50)50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用上述鹽酸溶液補(bǔ)足減失重量，加氯化鈉5 g，搖勻，離心，精密量取上清液25 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取4次(50、30、20、20 mL)，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[7-9]以丹參素鈉為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，精密吸取丹參素鈉對(duì)照品溶液(濃度0.048 mg/mL，相當(dāng)于丹參素0.0432 mg/mL)分別進(jìn)樣5、10、15、20、25 μL，測(cè)量相對(duì)應(yīng)的峰面積，結(jié)果：A=276 101.873 1C+10 133.53 781，r=0.999 1。進(jìn)樣量在0.216～1.08 μg的范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積之間呈直線函數(shù)關(guān)系。

2.6 清心片中丹參素含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，得峰面積，通過(guò)方程A=276 101.873 1C+101 33.537 81和溶液配制過(guò)程計(jì)算丹參素含量。

2.7 方法學(xué)考察[9-11]

2.7.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取丹參素鈉對(duì)照品溶液10 μL，于第1、第2、第3、第4、第5天分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)量峰面積，結(jié)果X=131 415.720，RSD=1.02%。

2.7.2 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)量峰面積，結(jié)果x=130 017.320，RSD=1.22%。

2.7.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取清心片樣品一批，每片重0.6 g,批號(hào)為20120601，依法獨(dú)立測(cè)定5次。對(duì)照品丹參素鈉的濃度為48 μg/mL(相當(dāng)于丹參素的濃度為43.2 μg/mL)，進(jìn)樣量10 μL，峰面積131 245.406。根據(jù)對(duì)照品峰面積與供試品峰面積計(jì)算樣品含量，結(jié)果平均含量為1.37 mg/片。RSD=2.09%。

2.7.4 回收率測(cè)定 取清心片樣品一批：批號(hào)為20120601，除去薄膜衣后的平均片重為0.5 719 g/片，含量為1.37 mg/片；取樣品5分，分別加對(duì)照品適量，依法獨(dú)立測(cè)定，結(jié)果對(duì)照品溶液中丹參素濃度為43.2 μg/mL，進(jìn)樣量為10 μL。

2.8 10批樣品含量測(cè)定 取中試樣品10批，按照正文含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果表明原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 “每片含丹參以丹參素計(jì)，不得少于0.80 mg ”。經(jīng)測(cè)定樣品結(jié)果，均能達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn),因此仍規(guī)定“本品每片含丹參以丹參素(C9H10O5)計(jì)，不得少于0.80 mg”。

3 結(jié)論

清心片屬中藥復(fù)方制劑，丹參為其主藥，丹參素是其主要有效成分，在心腦血管疾病的防治中發(fā)揮重要作用，因此，控制其中丹參素的含量是必要的。本文報(bào)道的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便， 結(jié)果穩(wěn)定, 適合作為清心片生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥科技出版社,2010:70.

[2]王喜軍.中藥鑒定學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2008:138.

[3]鄭廣東.高效液相色譜法測(cè)定烏雞白鳳丸(濃縮丸)中丹參素及芍藥苷含量[J].海峽藥學(xué),2006,18(3):59-60.

[4]袁紅英,楊雪萍,張志國(guó),等.利腦心膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)研究[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2010,27(6):519-520.

[5]黃敬群,張秀巧,郭軍,等.高效液相色譜法測(cè)定5種不同產(chǎn)地丹參中丹參素和原兒茶醛含量[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,24(1):37-40.

[6]李桃,王春娥.高效液相色譜法測(cè)定丹參藥材中丹參素的含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(9):832-833.

[7]雷艷青.高效液相色譜法測(cè)定丹參藥材中丹參素含量研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2005,11(4):59-61.

[8]魏惠珍,王躍生,吳有根,等.HPLC同時(shí)測(cè)定冠心丹參膠囊中丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B和丹參酮ⅡA的含量[J].中成藥,2009,31(1):64-68.

[9]潘見(jiàn),周蓓蓓,開(kāi)桂青,等.丹參中丹參素的含量測(cè)定[J].食品科學(xué),2007,28(8):348-350.

[10]朱蔚瑋,倪龍,魯靜.HPLC法測(cè)定明目顆粒中丹參素的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2002,27(11):848-849.

[11]徐德然,王康才,王崢濤,等.丹參中丹參素、原兒茶醛來(lái)源的初步研究[J].中國(guó)天然藥物,2005,3(3):148-150.