孔喜良，劉洪珍

（1.曲阜師范大學(xué)體育科學(xué)學(xué)院，山東 曲阜273165）

過(guò)量運(yùn)動(dòng)中，機(jī)體能量需求急劇增加促使心肌的收縮能力和能量代謝加快，導(dǎo)致心肌供血、供氧相對(duì)不足，心肌內(nèi)酶活性發(fā)生改變，自由基增加，脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng)，生物膜完整性受到損傷或喪失［1］。在中醫(yī)基礎(chǔ)理論中，運(yùn)動(dòng)性疲勞屬于“虛勞”范疇，“勞則氣耗”，“心主血脈，在液為汗”，心與運(yùn)動(dòng)有密切的聯(lián)系?，F(xiàn)代研究證明，多種中藥成分有良好的清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用，本研究對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下的大鼠灌服壯陽(yáng)復(fù)方中藥制劑，觀察其抗疲勞和提高運(yùn)動(dòng)能力的作用，并通過(guò)心肌自由基代謝、抗氧化酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及磷脂酶A2等指標(biāo)的測(cè)定，探討中藥對(duì)心肌的影響與提高運(yùn)動(dòng)能力的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組

選取8周齡雄性Wistar大鼠72只，體重180～220 g，分籠飼養(yǎng)，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物干燥飼料喂養(yǎng)，自由飲水。大鼠適應(yīng)性訓(xùn)練一周后，按大鼠體重生藥30 g／kg標(biāo)準(zhǔn)灌服壯陽(yáng)復(fù)方中藥煎劑，1次／天，對(duì)照組灌服等量純凈水。隨機(jī)分組（n＝36）：對(duì)照組（純凈水灌胃）、服藥組（壯陽(yáng)復(fù)方中藥煎劑灌胃）。壯陽(yáng)復(fù)方由黃芪、仙茅、仙靈脾、肉桂、人參等十一味中藥組成。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 運(yùn)動(dòng)方案 采用國(guó)產(chǎn)電動(dòng)大鼠跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練一周（跑速 5～10m／min，時(shí)間10min），全部大鼠正式訓(xùn)練 8周（表1）。訓(xùn)練過(guò)程中觀察并記錄大鼠體重、精神狀態(tài)及飲食情況。運(yùn)動(dòng)中使用聲光刺激或毛刷刺激大鼠尾部，以保證運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。

1.2.2 動(dòng)物取材 訓(xùn)練8周后，每組大鼠隨機(jī)分為安靜狀態(tài)、力竭后即刻、力竭后恢復(fù)12 h 3個(gè)亞組（n＝12），（力竭的標(biāo)準(zhǔn)：大鼠不能保持持續(xù)運(yùn)動(dòng)，腹部貼近跑臺(tái)，四肢不能支撐軀體，取下不能完成翻正反射，精神呆滯，反應(yīng)遲鈍）斷頭處死，取心臟在冰生理鹽水中洗凈，置液氮內(nèi)保存。

Tab.1Rat trainingmodel

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定 樣品解凍，電子天平稱重0.6 g，1∶9加入生理鹽水，冰浴條件下勻漿，離心取上清（4℃冷藏）。使用儀器主要有國(guó)產(chǎn)電動(dòng)鼠類跑臺(tái)、BP-800酶標(biāo)儀、752型紫外分光光度儀、GL-20－Ⅱ型高速冷凍離心機(jī)等。PLA2測(cè)定采用美國(guó) R＆D Systems，Inc的 PLA2酶免試劑盒。GSH、MDA（TBA法）、SOD、GOT（賴氏法）和蛋白含量（考馬斯亮蘭法）的測(cè)試采用南京建成生物公司試劑盒。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，采用單因素方差分析（ANOVA）和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠運(yùn)動(dòng)至力竭的時(shí)間

8周試驗(yàn)后，對(duì)照組平均力竭時(shí)間為（2.30±0.56）h，服藥組平均力竭時(shí)間為（3.04±0.52）h，服藥組大鼠力竭時(shí)間較對(duì)照組有顯著性延長(zhǎng)（P＜0.01）。

2.2 安靜狀態(tài)下大鼠心肌各指標(biāo)的變化

安靜狀態(tài)下服藥組谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），服藥組超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.01，表2）。

2.3 力竭運(yùn)動(dòng)后即刻大鼠心肌各指標(biāo)的變化

大鼠力竭后即刻丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量、SOD活性、磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）活性與對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.01），GSH含量明顯增加（P＜0.05，表3）。

2.4 力竭運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)12 h大鼠心肌各指標(biāo)的變化

大鼠力竭運(yùn)動(dòng)恢復(fù)12 h后MDA含量、GSH含量、PLA2活性與對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.01，圖4），GOT活性明顯增加（P＜0.05，表 4）。

Tab.2 Comparison of rest state index（±s，n＝12）

Tab.2 Comparison of rest state index（±s，n＝12）

MDA：Malonaldehyde；GSH：Glutathione；SOD：Superoxide dismutase；PLA2：Phospholipase A2；GOT：Glutamic-oxalacetic transaminase*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group

Group MDA（nmol／mg pro）GSH（mg／g pro）SOD（U／mg pro）PLA2（U／g pro）GOT（U／mg pro ）Control 4.38±0.53 24.32±5.18 82.56±6.06 68.27±3.70 392.2±33.6 Medication 3.45±0.60 29.16±1.86* 101.10±10.54**68.70±10.37 449.8±22.9

Tab.3 Comparison of exhaustive index（±s，n＝12）

Tab.3 Comparison of exhaustive index（±s，n＝12）

MDA：Malonaldehyde；GSH：Glutathione；SOD：Superoxide dismutase；PLA2：Phospholipase A2；GOT：Glutamic-oxalacetic transaminase*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group

Group MDA（nmol／mg pro）GSH（mg／g pro）SOD（U／mg pro）PLA2（U／g pro）GOT（U／mg pro ）Control 5.83±0.52 16.18±3.02 110.53±3.93 95.28±7.66 317.1±34.9 Medication 4.76±0.95** 19.12±2.71* 137.41±7.39** 82.02±5.23**330.9±19.2

Tab.4 Comparison of exhaustive index after 12 hours（±s，n＝12）

Tab.4 Comparison of exhaustive index after 12 hours（±s，n＝12）

MDA：Malonaldehyde；GSH：Glutathione；SOD：Superoxide dismutase；PLA2：Phospholipase A2；GOT：Glutamic-oxalacetic transaminase*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group

Group MDA （nmol／mg pro）GSH（mg／g pro）SOD（U／mg pro）PLA2（U／g pro）GOT（U／mg pro ）Control 4.86±0.47 20.98±2.48 108.19±4.51 84.05±3.55 352.1±19.9 Medication 3.67±0.95** 26.59±2.66** 102.50±7.67 72.82±5.65** 415.6±38.2*

3 討論

MDA和SOD、GSH是反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)變化的重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在安靜狀態(tài)下，心肌內(nèi) GSH含量低于對(duì)照組，SOD活性顯著高于對(duì)照組，而對(duì)MDA影響不大。說(shuō)明壯陽(yáng)復(fù)方中藥對(duì)心肌有良好的作用，能夠提高心肌內(nèi)抗氧化酶的活性，增加心肌內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的儲(chǔ)備。力竭運(yùn)動(dòng)后，心肌內(nèi)MDA急速上升，抗氧化酶SOD的活性隨著MDA的升高而升高，而作為心肌內(nèi)還原劑的GSH的含量下降，說(shuō)明經(jīng)過(guò)力竭運(yùn)動(dòng)后，大鼠心肌損傷加重，各種抗氧化劑由于自由基的刺激活性增高，積極清除自由基，但由于力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致產(chǎn)生的自由基太多，不能盡快清除，使心肌損傷加重。而經(jīng)過(guò)補(bǔ)充壯陽(yáng)復(fù)方中藥后，由于抗氧化活性的增高，即便產(chǎn)生自由基的數(shù)量較多，也能及時(shí)消除，維持了心肌功能，減輕了心肌損傷。力竭運(yùn)動(dòng)對(duì)抗氧化酶活性影響的研究尚存爭(zhēng)論。多數(shù)研究認(rèn)為［2，3］，力竭運(yùn)動(dòng)會(huì)使組織中抗氧化酶過(guò)度消耗，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)后即刻抗氧化酶活性下降。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在運(yùn)動(dòng)后抗氧化酶活性是升高的，產(chǎn)生這種差異的原因有可能是機(jī)體各組織內(nèi)抗氧化酶活性在訓(xùn)練后變化各異，也可能與實(shí)驗(yàn)所采用的運(yùn)動(dòng)方式、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度和運(yùn)動(dòng)時(shí)間的不同有關(guān)，這些因素可能是影響抗氧化酶活性變化的重要因素，是決定自由基反應(yīng)過(guò)程的重要機(jī)制。

PLA2是一類具有廣泛生理、病理效應(yīng)的生物酶［4］，大鼠力竭游泳時(shí)，活性氧生成增多，蛋白巰基氧化、交聯(lián)增加、PLA2活性增加及GSH的含量下降，這均引起線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)通道打開(kāi)的可能性增加，鈣釋放增加、游離鈣下降。Ca2＋還可激活PLA2，PLA2活性增加又反過(guò)來(lái)影響 Ca2＋的轉(zhuǎn)運(yùn)，這種相互作用可能是造成心肌損傷的重要原因。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推斷出，壯陽(yáng)復(fù)方中藥能顯著地拮抗心肌組織中鈣的積聚，通過(guò)抑制心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載而維持心肌細(xì)胞膜和線粒體的正常結(jié)構(gòu)和功能，具體表現(xiàn)為灌服中藥組大鼠心肌內(nèi)的抗氧化酶、GOT活性上升，PLA2活性、自由基含量相對(duì)下降。GOT是作為心肌缺血損傷范圍和程度的重要指標(biāo)，力竭運(yùn)動(dòng)恢復(fù)12 h后，大鼠心肌內(nèi)GOT活性逐漸恢復(fù)，而壯陽(yáng)復(fù)方中藥灌服使心肌內(nèi)的GOT活性明顯恢復(fù)加快，這和相關(guān)研究結(jié)果［5］一致。

綜上所述，壯陽(yáng)復(fù)方中藥能夠有效抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，提高機(jī)體在不同功能狀態(tài)下的抗氧化能力；提高力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌內(nèi)GOT活性，改善心肌機(jī)能，提高心肌在不同功能狀態(tài)下的有氧供能能力；能抑制磷脂酶A2活性的激活，減輕心肌損傷，加速心肌損傷的恢復(fù)，從而使大鼠產(chǎn)生了良好的運(yùn)動(dòng)適應(yīng)，延長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)時(shí)間，推遲運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生。

［1］ 劉鐵民，許豪文.過(guò)度訓(xùn)練對(duì)大鼠心肌組織損害的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)體育科技，2003，39（2）：31-34.

［2］ 袁海平，史仍飛，劉 學(xué)，等.補(bǔ)充銀杏制劑對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響［J］.中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2004，23（5）：503-506.

［3］ 劉小杰，何國(guó)慶，熊正英.沙棘油對(duì)小鼠心肌自由基代謝和超微結(jié)構(gòu)的影響［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2002，24（2）：126-129.

［4］ Balboa M A，Shirai，Gaietta G，et al.Localization of groupⅤphospolipaser A2in caveolin-enriched granules in activated P388DImacrophagelike cells［J］.J Biol Chem，2003，278（48）：48059-48065.

［5］ 戚世媛，熊正英.女貞子提取物對(duì)大鼠心肌的保護(hù)作用及對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的影響［J］.山東體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，27（1）：53-57.