譚文波，袁德培，楊付明

（湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北恩施445000）

富硒板黨酒是以優(yōu)質(zhì)白酒和全國地理標(biāo)志產(chǎn)品-富硒板黨為主料，輔以枸杞、肉桂、蜂蜜、一級冰糖精制而成，具有補(bǔ)中益氣、強(qiáng)身壯體、健心養(yǎng)顏、滋陰壯陽，促進(jìn)人體新陳代謝，增強(qiáng)肌體免疫力，防癌抗癌之功能?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明板黨具有明確的抗氧化抗衰老作用［1］，而硒有促進(jìn)男性生殖和延年益壽之功效［2］。目前有關(guān)富硒板黨酒抗衰老與促生殖的研究尚無報(bào)道，為此，本文通過觀察富硒板黨酒對衰老大鼠睪丸結(jié)構(gòu)和機(jī)能代謝的影響，來探討其保健養(yǎng)生功能。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

富硒板黨酒（恩施本草藥業(yè)有限公司），大鼠睪酮、SOD、GSH-Px、MDA ELISA試劑盒（上海豐翔生物科技有限公司）。

1.2 主要儀器

UV-2450分光光度儀，GL-20GII型高速低溫離心機(jī)，Multikan MK3酶標(biāo)儀，DW40-120低溫冰箱，Neusoft-770SS顯微鏡，BS224S電子分析天平，HFJ-10內(nèi)切式勻漿機(jī)。

1.3 動(dòng)物分組及給藥

5月齡健康清潔級Wistar雄性大鼠30只，體重280～320 g（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心）。隨機(jī)分為3組（n＝10）：對照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組。模型組和實(shí)驗(yàn)組按0.025 ml／g頸背皮下注射5%D-半乳糖生理鹽水溶液，對照組頸背皮下注射等量生理鹽水，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組按5 ml／kg灌服富硒板黨酒，對照組和模型組灌服等量生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥42 d。

1.4 血清睪酮及睪丸指數(shù)的檢測

末次給藥2 h后，將各組大鼠稱重，摘眼球取血約1 ml，高速低溫離心機(jī)以3 200 r／min離心4 min，取血清按試劑盒說明書檢測血清睪酮（testosterone，T）的含量。采血后脫頸椎處死，取雙側(cè)睪丸稱重，計(jì)算睪丸指數(shù)，即睪丸指數(shù)（mg／g）＝睪丸質(zhì)量（mg）／鼠體質(zhì)量（g）。

1.5 睪丸組織SOD、GSH-Px、MDA含量的檢測

取右側(cè)睪丸置于冰冷的生理鹽水中漂洗，去血，拭干，稱重，放人勻漿器中，加入9倍于其重量的冷生理鹽水進(jìn)行勻漿（勻漿時(shí)間每次 10 s，間隙30 s，連續(xù)5～6次，均在冰水中進(jìn)行）。將制備好的10%的組織勻漿以3 000 r／min離心10～15min，取適量離心好的勻漿上清液按試劑盒說明測定睪丸組織超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。

1.6 睪丸組織學(xué)觀察

取左側(cè)睪丸置10%中性甲醛溶液中固定24 h后，梯度酒精脫水，石蠟包埋，冠狀切面制備5μm厚的石蠟切片，HE染色，光鏡觀察。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 富硒板黨酒對各組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量的影響

與對照組比，模型組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量顯著下降（P＜0.01）；與模型組比，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量明顯增加 （P＜0.01，表 1）。

Tab.1 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testis index and the content of T in serum of each group rats（±s，n＝10）

Tab.1 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testis index and the content of T in serum of each group rats（±s，n＝10）

T：Testosterone**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model group

Group Testis index（mg／g） T（ng／L）Control 7.64±0.51 0.50±0.08 Model 4.36±0.48** 0.30±0.06**Test 6.14±0.57＃＃ 0.47±0.07＃＃

2.2 富硒板黨酒對各組大鼠睪丸組織SOD、GSH-Px、MDA含量的影響

與對照組比，模型組大鼠睪丸組織SOD和GSH-Px含量顯著下降，MDA含量明顯增加（P＜0.01）；與模型組比，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸組織SOD、GSH-Px含量明顯增加，MDA含量明顯下降 （P＜0.01，表 2）。

Tab.2 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on the content of SOD，GSH-Px and MDA in each group rats testicular tissue（±s，n＝10）

Tab.2 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on the content of SOD，GSH-Px and MDA in each group rats testicular tissue（±s，n＝10）

SOD：Superoxide dismutase；GSH-Px：Glutathione peroxidase；MDA：Malondialdehyde**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model group

Group SOD（U／g） GSH-Px（nmol／g） MDA（nmol／g ）Control 196.23±6.07 170.58±7.24 6.74±1.26 Model 127.95±4.86**129.87±7.15**11.39±1.87**Test 170.72±5.61＃＃159.52±8.48＃＃ 7.85±1.72＃＃

2.3 富硒板黨酒對各組大鼠睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

對照組大鼠睪丸生精小管圓而飽滿，管壁各級生精細(xì)胞及支持細(xì)胞分層排列有序，管腔中無脫落細(xì)胞，可見大量成熟精子，間質(zhì)細(xì)胞成群排列在生精小管間隙（圖1A）；模型組大鼠睪丸生精小管管徑大小不一，管壁細(xì)胞層數(shù)減少排列紊亂，部分管腔阻塞或塌陷，可見脫落細(xì)胞，成熟精子數(shù)量明顯減少，間質(zhì)細(xì)胞輪廓不清（圖1B）；實(shí)驗(yàn)組生精小管基膜基本完整，管壁增厚變圓，可見各個(gè)發(fā)育階段的生精細(xì)胞和支持細(xì)胞，管腔中無脫落細(xì)胞，有較多成熟精子，間質(zhì)細(xì)胞成群分布于生精小管之間的疏松結(jié)締組織內(nèi)（圖1C）。

Fig.1 Effects of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testicular tissuemorphological change of each group（HE×400）

3 討論

神經(jīng)內(nèi)分泌衰老學(xué)說認(rèn)為：下丘腦-腺垂體-性腺軸功能衰退是人類衰老的主要環(huán)節(jié)，人類的衰老與性腺結(jié)構(gòu)和功能的退化密切相關(guān)。男性從50歲開始，睪丸組織生精細(xì)胞、支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞就開始出現(xiàn)退行性變，引起這一改變的主要原因是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)［3］。艾明仙等研究證明，富硒板黨能提高血漿和組織抗氧化酶系的活性，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)終產(chǎn)物MAD的產(chǎn)生［4］。藥物化學(xué)研究證實(shí)富硒板黨含硒量高達(dá)0.28 mg／kg，硒作為谷胱甘肽過氧化酶的基本組成部分，有促進(jìn)體內(nèi)過氧化物分解，維持細(xì)胞正常形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的作用［5］。

本研究發(fā)現(xiàn)，D-半乳糖導(dǎo)致大鼠睪丸組織抗氧化酶SOD和GSH-Px含量顯著下降，細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，MDA含量明顯增加，使生物大分子交聯(lián)聚合，引起生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞數(shù)量減少，結(jié)構(gòu)破壞，排列紊亂，產(chǎn)生精子和分泌睪酮能力下降，最終睪丸出現(xiàn)萎縮 ，睪丸指數(shù)明顯下降。而富硒板黨酒顯著改善衰老大鼠睪丸組織SOD和GSH-Px的活性，減少自由基對細(xì)胞膜及生物大分子的攻擊，使MDA產(chǎn)生減少，細(xì)胞毒性作用減弱，從而維護(hù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，延緩睪丸的萎縮。因此，富硒板黨酒能延緩睪丸退變，維持生殖功能，提高生活質(zhì)量。

［1］ 黃麗亞，張 宏，余 潔.板黨對岡田酸致大鼠阿爾茨海默病抗氧化作用［J］.中國公共衛(wèi)生，2008，24（9）：1105-1106.

［2］ 尉俊仁，馮 佩，章子貴.硒對氟致大鼠睪丸與附睪中某些酶活性變化的影響［J］.毒理學(xué)雜志，2012，26（1）：4-8.

［3］ 黃和賢，曹文富，彭 爽，等.延衰合劑對D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠睪丸及血清睪酮的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2011，31（12）：2239-2241.

［4］ 艾明仙，黃麗亞.富硒板黨對大鼠學(xué)習(xí)記憶及抗氧化酶影響［J］.中國公共衛(wèi)生，2007，23（6）：736-737.

［5］ 郭貴華，楊 麗，沈振華，等.硒對砷染毒致雄性大鼠生殖損害的拮抗作用［J］.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，22（6）：461-464.