占海燕，陳麗華，余斌，胡茂榮，姜淑珍

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌330006)

鹽酸特比萘芬乳膏含量測(cè)定的方法研究

占海燕1，陳麗華2，余斌1，胡茂榮1，姜淑珍1

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌330006)

目的建立HPLC法測(cè)定鹽酸特比萘芬乳膏含量的方法。方法采用Hypersil ODS2 C18柱；以甲醇-pH為7.5醋酸三乙胺溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫進(jìn)行液相色譜分離，流速為1.0m l/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；柱溫40℃。結(jié)果鹽酸特比萘芬在8.4～168.0μg/m l與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998)；平均回收率為99.13%，RSD為1.6%。結(jié)論本HPLC法簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確，可作為鹽酸特比萘芬乳膏的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法;鹽酸特比萘芬;乳膏;質(zhì)量檢測(cè)

鹽酸特比萘芬(terbinafine hydrochloride)是丙烯胺類(lèi)廣譜抗真菌藥，對(duì)皮膚癬菌，酵母菌、霉菌和一些雙相真菌均有顯著的殺菌活性，通常制成1%的乳膏，可以皮膚給藥達(dá)到局部治療目的[1]。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[2]和美國(guó)藥典第32版[3]均對(duì)鹽酸特比萘芬乳膏的含量進(jìn)行了控制。本文通過(guò)進(jìn)一步完善，采用反相高效液相色譜法梯度洗脫對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器BP211D Sartorius電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；Agilent 1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；PHS-3C型pH計(jì)(上海雷磁儀器廠)；超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥甲醇色譜純(Tedia，US)；鹽酸特比萘酚(純度99.6%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100563-200301)；鹽酸特比萘酚乳膏(自制，批號(hào)：100301，100302，100303)；雙蒸水(自動(dòng)雙重純水蒸餾器制得)；異丙醇(上海國(guó)藥集團(tuán)試劑有限公司)；冰醋酸(上海國(guó)藥集團(tuán)試劑有限公司)；三乙胺(上海金山亭新化工試劑廠)；無(wú)水乙醇(上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；氯化鈉(上海國(guó)藥集團(tuán)試劑有限公司)；磷酸二氫鉀(廣東汕頭隴西化工廠)；磷酸氫二鉀(廣東汕頭隴西化工廠)；氫氧化鈉(天津市福晨化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱(250mm×4.6mm，5μm大連依利特有限公司)；以甲醇-pH為7.5醋酸三乙胺溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，0～4min，90%甲醇溶液；4～11 min，甲醇溶液比例從90%降至85%；11～14 min，甲醇溶液比例從85%升至95%；流速為1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；柱溫40℃；進(jìn)樣量為20μl。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 線性關(guān)系考察

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取鹽酸特比萘芬對(duì)照品適量，至100m l容量瓶中，流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，使其為84μg/m l。

圖1 鹽酸特比萘芬HPLC色譜圖

2.2.2 供試品溶液的制備取鹽酸特比萘芬乳膏約1.0 g，精密穩(wěn)定，置50 m l的量瓶中，加流動(dòng)相40 m l，超聲處理使乳膏溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻，取出，迅速過(guò)濾，放至室溫，作為供試品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系考察精密量取上述對(duì)照品溶液0.5，1，2，4，8，10m l置于10 m l容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，使其濃度為4.2，8.4，16.8，33.6，67.2，84.0μg/m l的對(duì)照品溶液，分別吸取20μl，注入液相色譜儀。以對(duì)照品濃度C (μg/m l)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=0.234C+0.3409，r=0.9998，表明鹽酸特比萘芬的濃度在8.4～168.0μg/m l，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3 最低檢測(cè)限考察[4]按照2010版藥典規(guī)定方法進(jìn)行最低檢測(cè)限的測(cè)定，以得到信噪比為3的濃度作為檢測(cè)限，結(jié)果顯示鹽酸特比萘芬的最低檢測(cè)限為0.042μg/ml。

2.4 精密度考察取濃度為67.2μg/m l的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，峰面積RSD值為1.80%。結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性考察精密稱(chēng)取鹽酸特比萘芬乳膏約1.0g，置50 m l的容量瓶中，加流動(dòng)相40 ml，超聲處理使鹽酸特比萘芬乳膏溶解，放至室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液。取20μl分別于0，2，4，6，8，10，12 h后注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察鹽酸特比萘芬乳膏樣品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果峰面積RSD為0.89%，表明鹽酸特比萘芬在12 h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品液。分別精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察鹽酸特比萘芬乳膏樣品溶液含量，6次測(cè)定值的RSD為3.5%，表明本法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)取鹽酸特比萘芬原料藥約0.8，1.0，1.2 g，精密稱(chēng)定，按鹽酸特比萘芬乳膏的處方和制法制成三個(gè)不同濃度的樣品各三個(gè)，每個(gè)樣品共制100g。取上述樣品9個(gè)樣品各1.0g，精密稱(chēng)定，分別精密加入對(duì)照品溶液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以平均峰面積計(jì)算含量并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.13%，RSD為1.6%(n=9)，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.8 樣品的測(cè)定取3批鹽酸特比萘芬乳膏，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl進(jìn)樣，注入液相色譜儀，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算供試品中鹽酸特比萘芬的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 三批樣品中鹽酸特比萘芬含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

根據(jù)美國(guó)藥典USP32-NF27建立色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，鹽酸特比萘芬的出峰時(shí)間為23min，時(shí)間較長(zhǎng)，經(jīng)優(yōu)化比例，得到檢測(cè)鹽酸特比萘芬的色譜條件，其出峰時(shí)間大大縮短為7.5 min。本方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、快速，可用于其質(zhì)量控制。

參考國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)，預(yù)試驗(yàn)分別采用異丙醇與流動(dòng)相做提取溶劑，對(duì)提取溶劑進(jìn)行考察，未發(fā)現(xiàn)明顯差異。

[1]李慎秋,陳映玲,陳春梅,等.特比萘芬軟膏治療淺部真菌病的臨床觀察[J].同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1997,26(6):494.

[2]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].WS1-(X-115)-2004Z.

[3]美國(guó)藥典委員會(huì).美國(guó)藥典[S].USP32-NF27，2012:3677.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版物,2010:194.

Study on determ ination of terbinafine hydrochloride in crem or by high performance liquid chromatography

ZHAN Haiyan,CHEN Lihua,YU Bin,etal.JiangxiMental Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo develop an effective HPLCmethod for determining the content of terbinafine hydrochloride in cremor.M ethodsThe separation was achieved by using a Hypersil ODS2 C18 column and a gradient elution with themobile phase ofmethanol and acetic acid-triethylamine(pH7.5).The flow rate was 1.0 m l/m in and the column temperature was 40℃.The detection wave length was at 280 nm.The content was quantified by an external standard method.ResultsThe terbinafine hydrochloride in the range of 8.4～168.0μg/m l has a good linear relationship with the peak area(r=0.9998).The average recovery rate was 99.13%,and the RSD was 1.6%.ConclusionThe HPLC method is simp le,rapid and accurate.It can be used as the quality controlmethod for detection of the contentof terbinafine hydrochloride in cremor.

HPLC;Terbinafine hydrochloride;Cremor;Quality examination

R927.2,R978.5,R379,R756

A

1674-1129(2013)05-0465-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.023

占海燕，女，1972年9月出生，畢業(yè)于江西中醫(yī)藥大學(xué)，副主任中藥師，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)。

陳麗華，女，1972年3月出生，博士，碩導(dǎo)，教授，江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，研究方向?yàn)橹兴幮聞┬团c新技術(shù)。