張慧慧，熊國(guó)亮

(江西省胸科醫(yī)院，江西南昌330006)

評(píng)價(jià)血清中結(jié)核桿菌特異性蛋白抗體對(duì)診斷肺結(jié)核的應(yīng)用價(jià)值

張慧慧，熊國(guó)亮

(江西省胸科醫(yī)院，江西南昌330006)

目的評(píng)價(jià)結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核診斷的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)370例活動(dòng)性肺結(jié)核患者、42例非結(jié)核性肺部疾病患者和30例健康獻(xiàn)血員進(jìn)行血清結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測(cè)，同時(shí)對(duì)全部肺結(jié)核和非結(jié)核性肺部疾病患者進(jìn)行痰抗酸桿菌涂片和培養(yǎng)。結(jié)果370例臨床診斷的活動(dòng)性肺結(jié)核患者，結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測(cè)陽(yáng)性284例，陽(yáng)性率76.8%；42例非結(jié)核性肺部疾病患者，假陽(yáng)性4例，假陽(yáng)性率9.5%；30例健康獻(xiàn)血員對(duì)照組，假陽(yáng)性1例，假陽(yáng)性率3.3%。檢測(cè)菌陽(yáng)肺結(jié)核的敏感性為81.4%，,菌陰肺結(jié)核的敏感性為72.9%；陽(yáng)性檢出率76.8%遠(yuǎn)高于細(xì)菌學(xué)的陽(yáng)性檢出率45.1%，χ2=77.72，P＜0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷具有較好的敏感性和特異性。

結(jié)核分枝桿菌；抗體；診斷

結(jié)核病是一種嚴(yán)重危害健康的慢性傳染病。對(duì)肺結(jié)核做出快速準(zhǔn)確的診斷一直是臨床工作中的一個(gè)難點(diǎn)。雖然細(xì)菌學(xué)診斷是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但存在痰涂片抗酸染色檢測(cè)陽(yáng)性率低，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)。因此尋找快速準(zhǔn)確而簡(jiǎn)便的診斷方法具有積極意義[1]。本文采用一種特異的結(jié)核分枝桿菌分泌性酸性磷酸酶(TB secreted acid phosphatase,TB-SA)蛋白[2]作為抗原對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核和非結(jié)核性肺部疾病患者血清標(biāo)本抗體進(jìn)行了檢測(cè)，并評(píng)價(jià)其對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核臨床診斷的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料370例活動(dòng)性肺結(jié)核病人均是2012年6月至2013年5月在我院結(jié)核內(nèi)科住院的患者，其中男240例、女130例平均年齡44.7歲。42例非結(jié)核性肺部疾病病人均是2012年6月至2013年5月在我院呼吸科、腫瘤科住院患者(16例COPD、13例急性支氣管炎患者、3例哮喘、10例肺癌患者)其中男28例、女14例，平均年齡66.8歲。30例健康獻(xiàn)血員由江西省血液中心提供。全部病例的診斷依據(jù)為細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)、胸部X線、生化等指標(biāo)來(lái)確診。入選病例均留取晨痰和血清為檢測(cè)標(biāo)本；健康獻(xiàn)血員只留取血清標(biāo)本。

1.2 主要儀器和試劑(1)Exl800酶標(biāo)儀由美國(guó)寶特公司提供。(2)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)TB-SA抗體試劑由成都永安制藥有限公司提供，批號(hào)：20120502,20130104。

1.3 血清TB-SA抗體檢測(cè)(1)樣本稀釋：取樣本稀釋應(yīng)用液450μl加待檢血清50μl，充分混勻。(2)加樣：將所需數(shù)量的板條固定于板架，各孔分別加入100μl待測(cè)稀釋樣本，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照、陰性對(duì)照、臨界對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，分別加入樣本稀釋應(yīng)用液、陰性、臨界、陽(yáng)性對(duì)照各50μl，震蕩，封板，37℃溫育10min，棄去孔內(nèi)液體，將稀釋后的洗液注滿各孔，洗板5次，拍干。(3)加酶：每孔加入酶標(biāo)記液50μl，震蕩，封板，37℃溫育10min，棄去孔內(nèi)液體，將稀釋后的洗液注滿各孔，洗板5次，拍干。(4)顯色讀值：每孔加入顯色劑A、B液各50μl，混勻，封板，置37℃避光顯色10min，每孔加終止液50μl，混勻，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值。(5)結(jié)果判斷：陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為(樣本OD值) /(臨界對(duì)照品OD值)≥1.2，陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)為(樣本OD值)/(臨界對(duì)照品OD值)≤0.8，灰區(qū)樣本重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告陰性。

1.4 痰抗酸桿菌涂片染色、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及分枝桿菌菌種鑒定操作方法參見(jiàn)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)規(guī)程》[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)按χ2進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 370例活動(dòng)性肺結(jié)核病患者中菌陽(yáng)(涂陽(yáng)或培陽(yáng))167例，菌陰203例。血清TB-SA抗體檢測(cè)菌陽(yáng)肺結(jié)核的敏感性為81.4%(136/167)；菌陰肺結(jié)核的敏感性為72.9%(148/203)；診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的總敏感性為76.8%(284/370)；特異性為93.1%(67/72)。見(jiàn)表1。

表1 血清TB-SA抗體檢測(cè)結(jié)果分析

2.2 TB-SA抗體檢測(cè)與細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較在370例肺結(jié)核患者中，TB-SA抗體檢測(cè)陽(yáng)性檢出率為76.8%(284/370)，遠(yuǎn)高于細(xì)菌學(xué)陽(yáng)性檢出率45.1%(167/370)，χ2=77.72，P＜0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表2。

表2 370例活動(dòng)性肺結(jié)核患者TB-SA抗體檢測(cè)與細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者把尋找特異性高的結(jié)核分枝桿抗原作為免疫診斷研究的基礎(chǔ)，結(jié)核分枝桿菌主要分泌蛋白所具有的特異免疫原性，使其成為結(jié)核病血清學(xué)診斷的重中之重。研究最多的包括分泌蛋白38KD、ESAT-6、CFP10、MPT63、MPT64和MPT53等[4，5]。但這些蛋白存在靈敏度低或者特異性不高的缺點(diǎn)，導(dǎo)致結(jié)核抗體的檢測(cè)在臨床上存在較高的假陰性或假陽(yáng)性現(xiàn)象。本文采用TBSA作為抗原，由于TB-SA蛋白僅存在于致病性結(jié)核分枝桿菌中，在其他微生物(包括非致病的分枝桿菌)中均不存在，TB-SA是一種特異性分泌性蛋白，容易被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別而產(chǎn)生特異性抗體[2]，因此，檢測(cè)TB-SA血清特異性抗體敏感性、特異性可以得到很好的保證。

本實(shí)驗(yàn)活動(dòng)性肺結(jié)核TB-SA抗體檢測(cè)的敏感性為76.8%，特異性為93.1%均高于畢愛(ài)笑等人[6]的報(bào)道。對(duì)菌陰肺結(jié)核患者TB-SA抗體檢測(cè)敏感性為72.9%，具有較高的診斷價(jià)值。

42例非結(jié)核呼吸疾病患者TB-SA檢測(cè)的陽(yáng)性率為9.5%，在30例健康獻(xiàn)血員TB-SA檢測(cè)的陽(yáng)性率為3.3%，全國(guó)有近半的人口感染了結(jié)核菌，不排除受試者感染結(jié)核桿菌引起血液中結(jié)核抗體存在的可能，也可能由于非結(jié)核呼吸系統(tǒng)患者機(jī)體免疫應(yīng)答紊亂。

總之，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)結(jié)核TB-SA抗體操作簡(jiǎn)便，快速，價(jià)格低廉，靈敏，適合各級(jí)醫(yī)院，可以作為一種快速準(zhǔn)確診斷肺結(jié)核的方法，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

[1]Furin JJ,Johnson JL.Recent advances in the diagnosis and management of tuberculosis[J].Curr Opin Pulm Med,2005,11(3):189-194.

[2]Saleh MT,Belisle JT.Secretion of an acid phosphatase(SapM)by mycobacterium tuberculosis that is similar to eukaryotic acid phosplatase[J].JBacteriol,2000,182(23):6850-6853.

[3]中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì).結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程[M].北京:中國(guó)教育文化出版社,2006.

[4]kulshrestha A,Gupta A,Verma N,et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for app lication in serodiagnosis[J].Protein Expr Purif,2005,44(1):75-85.

[5]Hoff ST,Abebe M,Ravn P,et al.Evaluation of Mycobacterium tuberculosis-specific antibody responses in populations with different levels of exposure from Tanzania,Ethiopia,Brazil,and Dermark[J]. Clin Infect Dis,2007,45(5):575-582.

[6]畢愛(ài)笑,金文國(guó),丁元生,等.TB-SA結(jié)核抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2008,29(2):86-88.

Clinical significance of serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis

ZHANG Huihui,XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo evaluate the significance of detecting serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.M ethodsTB-SA antibody in the serum samp les from 370 cases of active pulmonary tuberculosis,42 caseswith non-tuberculosis pulmonary disease and 30 healthy volunteerswere detected using enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA).ResultsTwo hundred and eighty-four outof 370 active pulmonary tuberculosis patients had positive results of TB-SA antibody tested by using ELISA,the positive rate was 76.8%,4 of 42 patientswith other pulmonary diseases and 1 of 30 healthy people had false positive results,the false postive rateswere 9.5%and 3.3%,respectively.The sensitivity of TB-SA antibody in diagnosis of bacteriological positive and negative pulmonary tuberculosis patients were 81.4%and 72.9%,respectively. With a total sensitivity of 76.8%,the positive rate of TB-SA detection in the diagnosis of tuberculosis was 76.8%,which was far higher than thatof 45.1%by using bacteriological examination.The difference between twomethods had statistical significance(P＜0.05).ConclusionDetection of Mycobacterium tuberculosis specific antibody has better sensitivity and specificity in diagnosis of tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis;Antibodies;Diagnosis

R446.62,R521,R378.91+

A

1674-1129(2013)05-0419-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.005

江西省衛(wèi)生廳科技資助項(xiàng)目(編號(hào)：20053180)

張慧慧，女，1965年生，本科，副高。

熊國(guó)亮，男，1964年生，主任技師，主要從事結(jié)核病細(xì)菌學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)工作。