金兆磊 ， 趙 超 ， 陳華國 ， 周 欣 *， 楊世林

（1.貴州師范大學 天然藥物質量控制研究中心，貴州 貴陽 550001；2.貴州省山地環(huán)境信息系統與生態(tài)環(huán)境保護重點實驗室，貴州 貴陽 550001）

藥用吉祥草為百合科吉祥草屬植物吉祥草（Reineckia carnea（Andr.）Kunth）的干燥全草，史載于隋唐時期陳藏器《本草拾遺》，在《本草綱目》《中藥大辭典》等中均有記載。吉祥草又名觀音草、小葉萬年青、瑞草等，具有清肺止咳、解毒利咽、涼血止血、止痛散瘀等功效。其主要分布在我國華東、中南、西南各省，它是我國苗族地區(qū)常用的傳統草藥之一[1]。

國內外關于吉祥草藥材藥理的研究報道不多，關于吉祥草藥材的抗炎活性、止咳活性研究更是少見。張元[2]等人研究發(fā)現，吉祥草總皂苷灌胃給藥能夠抑制氨水引起的小鼠咳嗽，總皂苷皮下注射給藥具有較好的抗炎作用；Nan Han[3]等人利用水溶劑回流提取吉祥草藥材，得到母液部分，另外將母液通過柱層析（D-101大孔樹脂）梯度洗脫，得到不同部位。分別為:水、體積分數30%乙醇、體積分數60%乙醇及體積分數90%乙醇洗脫部分。通過藥理實驗，發(fā)現體積分數60%、體積分數90%乙醇洗脫部位具有明顯的止咳、化痰效果。因此，為進一步發(fā)現吉祥草藥材抗炎、止咳活性部位，本實驗中利用不同極性溶劑提取藥材，通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹和小鼠氨水引咳經典實驗方法篩選，初步確定吉祥草材抗炎、止咳有效活性部位。

1 材料與方法

1.1 動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體質量18～22 g，由長沙東創(chuàng)實驗動物科技服務部提供（SPF級），許可證號:SCXK（湘）2009-0012。

1.2 藥物

吉祥草藥材，采于貴州貴陽小河區(qū)，原植物經貴州師范大學天然藥物質量控制中心陳華國副研究員鑒定為百合科吉祥草（Reineckia carnea（Andr）Kunth.）。

1.3 藥物制備

取上述3份吉祥草干藥材粗粉各50 g，精密稱定，分別加入10倍量蒸餾水、食用酒精及石油醚，加熱回流提取2次，每次2 h，合并2次濾液，減壓濃縮至干，精密稱定，計算各溶劑提取物得膏率:石油醚提取得率1.5%，食用酒精提取得率23.2%，水提取得率43.3%。

阿司匹林，規(guī)格:25 mg×100片，神威藥業(yè)有限公司產品，批號:1103052；磷酸可待因口服液Ⅲ，規(guī)格:每5 mL含磷酸可待因4 mg、鹽酸麻黃堿5 mg、馬來酸氯苯那敏2.5 mg、遠志流浸膏20.5 μL、海蔥流浸膏 9.0 μL、克斯蘭納流浸膏 4.5 μL，香港萬輝藥業(yè)有限公司產品，批號:110401。

1.4 儀器與試劑

Agilent 1260型高效液相色譜儀，1260 Infintiy蒸發(fā)光散射檢測器 （G4218A），AL 204萬分之一電子分析天平，購自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；402 AI型超聲霧化器，江蘇魚躍醫(yī)療設備股份有限公司產品；DFY-200型高速萬能粉碎機，溫嶺市林大機械有限公司產品；氨水、二甲苯，均為分析純試劑，重慶川東化工（集團）有限公司化學試劑廠產品。

2 方法

2.1 抗炎活性部位的研究

二甲苯致小鼠耳廓腫脹[4]。取小鼠110只，雌雄各半，隨機分成11組:生理鹽水對照組（空白組），石油醚提取物高、中、低劑量組，食用酒精提取物高、中、低劑量組，水提取物高、中、低劑量組（生藥量 7.50、3.25、1.63 g/kg），阿司匹林陽性對照組。 陽性藥按300 mg/kg藥量給藥，其余給藥組按相應劑量給藥，每日1次，給藥體積按20 mL/kg，連續(xù)給藥7 d。末次給藥45 min后，于小鼠右耳均勻涂二甲苯40 μL致炎，左耳不涂為正常耳。15 min后脫頸處死，將左、右兩耳片切下，以8 mm打孔器取下左、右耳片，立即用天平稱質量（mg），計算左右耳腫脹度及抑制率，比較各組之間的抗炎活性差異。

2.2 止咳活性部位研究

氨水引咳法[4]。取小鼠80只，雌雄各半，隨機分成8組:生理鹽水對照組（空白組），石油醚提取物高、低劑量組，食用酒精提取物高、低劑量組，水提取物高、低劑量組（生藥量 7.50、1.63 g/kg），磷酸可待因口服液陽性對照組。陽性藥按15 mL/kg藥量給藥，其余給藥組按相應劑量給藥，每日1次，給藥體積按20 mL/kg，連續(xù)給藥6 d。末次給藥1 h后，按氨水氣霧引咳法，用超聲霧化器霧化氨水（質量分數25%氫氧化銨），使霧化氨水均勻地噴入倒扣的500 mL容積密閉玻璃鐘罩內，然后迅速將小鼠放入充滿氨水霧氣的鐘罩內，噴霧5 s，以小鼠收縮腹部并張口作為咳嗽指標，記錄咳嗽潛伏期和開始咳嗽后2 min內咳嗽次數。

2.3 統計學處理

2.4 吉祥草不同極性提取物HPLC-ELSD指紋圖譜

液相色譜條件:Diamonsil（R）C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；ELSD 檢測器:漂移管溫度85℃，氮氣壓力350 kPa，增益值為6。流動相為乙腈（B）-水（A）溶液梯度洗脫，具體質量分數如下:0～5 min，10%B；5～8 min，10%～25%B；8～15 min，25%B；15～25 min，25%～27%B；25～27 min，27%～30%B；27～35 min，30%～37%B；35～55 min，37%～42%；55～60 min，42%～65%B；60～70 min，65%～95%B；體積流量 0.8 mL/min，柱溫 25 ℃，進樣量 30 μL。

取吉祥草藥材不同極性提取物（換算成等量生藥材），在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀，記錄80 min色譜圖，見圖1，通過與對照品色譜圖的比較，圖中16號峰為凱提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷，17號峰為1，6-二羥基-8-甲基-口山酮。

3 結果與分析

3.1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響

實驗結果表明，食用酒精提取物3個劑量組、水提物3個劑量組及陽性給藥組對小鼠耳廓腫脹均有明顯的抑制作用，其中食用酒精提取物高劑量組抑制率高達到70%，以上各組與空白對照組比較，差異顯著（P＜0.05），說明具有較好的抗炎作用；石油醚提取物各組均沒有明顯作用，結果見表1。

圖1 不同溶劑提取物HPLC-ELSDFig.1 HPLC-ELSD of different solvent extract

表1 不同給藥組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響Table 1 Effect of different drug groups on xyleneinduced mouse ear swelling ±s，n=10

表1 不同給藥組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響Table 1 Effect of different drug groups on xyleneinduced mouse ear swelling ±s，n=10

注:與空白對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

組別 劑量/(mg/kg)耳廓腫脹度/mg抑制率/%空白對照組 - 5.28±1.66陽性給藥組 300.00 2.22±0.43*** 58石油醚高劑量組 115.20 3.54±0.66 33石油醚中劑量組 57.60 3.56±0.72 33石油醚低劑量組 28.80 3.60±1.08 32食用酒精高劑量組 1737.20 1.57±0.56*** 70食用酒精中劑量組 868.60 2.19±0.50*** 59食用酒精低劑量組 434.30 2.31±0.62*** 56水提高劑量組 3247.80 2.11±0.42** 60水提中劑量組 1623.90 2.84±0.52* 46水提低劑量組 811.95 3.21±0.56* 39

3.2 對氨水氣霧致小鼠咳嗽的影響

實驗結果表明，食用酒精提取物高、低劑量組均能延長小鼠咳嗽潛伏期（P＜0.05），高劑量組還能明顯減少咳嗽次數（P＜0.05），說明食用酒精提取物具有較好的止咳作用；水提物高劑量組能夠延長咳嗽潛伏期（P＜0.05），減少咳嗽次數（P＜0.05），同樣具有止咳作用；石油醚提取物沒有明顯的止咳活性。結果見表 2。

表2 不同給藥組對氨水所致小鼠咳嗽的影響Table 2 Effect of different drug groups on cough of mice induced by ammonia ˉ±s，n=10

表2 不同給藥組對氨水所致小鼠咳嗽的影響Table 2 Effect of different drug groups on cough of mice induced by ammonia ˉ±s，n=10

注:與空白對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

組別 劑量/(mgkg) 咳嗽潛伏期/s 咳嗽次數空白對照組 - 25.65±5.65 9.14±2.34陽性給藥組 - 59.77±7.80*** 3.43±0.57***石油醚高劑量組 115.20 30.15±6.22 7.71±1.70石油醚低劑量組 28.80 19.02±3.06 8.00±1.63食用酒精高劑量組 1737.20 62.56±12.22* 4.20±0.39**食用酒精低劑量組 434.30 54.23±7.93* 5.83±1.72水提高劑量組 3247.80 55.74±7.76*** 5.56±1.33*水提低劑量組 811.95 37.72±7.56 9.00±1.29

4 結語

文獻報道，吉祥草藥材中主要含有甾體類、皂苷類化合物[5]。藥材經不同極性溶劑提取后，其化學成分按極性大小集中，由圖1可知，水提物化學成分集中在Ⅰ部分，醇提取物化學成分主要分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ部分。結合藥理數據，醇提取物具有較好的抗炎、止咳活性。由此可知，具有活性作用的化學成分很有可能集中在Ⅱ、Ⅲ部分。水提物高劑量組同樣具有較好的抗炎、止咳活性，這很有可能是不同類型化學成分具有相同的活性。

通過不同極性提取溶劑篩選吉祥草藥材的抗炎、止咳生物活性部位。結果顯示，醇提物、水提物都具有較好活性，石油醚提取物沒有明顯效果，說明吉祥草藥材中起活性作用的化學成分主要為極性相對較大的化合物。為進一步分析藥材中化學成分，在相同的色譜條件下，對其進行HPLC-ELSD分析，初步將藥理數據與HPLC-ELSD結合，為下一步吉祥草藥材藥效物質基礎研究及其“譜效”關系研究提供理論參考依據，這將有利于吉祥草藥材及其相關藥品更深入的研究與開發(fā)。

[1]邱德文，杜江.中華本草·苗藥卷[S].貴陽:貴州科技出版社，2005:254.

[2]張元，杜江，許建陽，等.吉祥草總皂苷溶血、止咳、化痰、抗炎作用的研究[J].武警醫(yī)學，2006，17（4）:282-284.ZHANG Yuan，Du Jiang，XU Jiang-yang，et al.Pharmacological study of total Saponins from Reineckia carnea on hemolysis，relieving a cough，abolishing phlegm and inflammation[J].Medical Journal the Chinese People’s Armed Police Forces，2006，17（4）:282-284.（in Chinese）

[3]Han N，Chang C L，Wang Y C，et al.The in vivo expectorant and antitussive activity of extract and fractions from Reineckia carnea[J].Journal of Ethnopharmacology，2010，131:220-223.

[4]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:347，626.

[5]周欣，劉海，趙超，等.吉祥草化學成分研究[J].中國中藥雜志，2008，33（23）:2793-2796.ZHOU Xin，LIU Hai，ZHAO Chao，et al.Studies on chemical constituents of herbs of Reineckia carnea[J].China Journal of Chinese Materia Medic，2008，33（23）:2793-2796.（in Chinese）