李雅嬌

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110021

人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性心肌梗死的研究

李雅嬌

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110021

目的：研究經(jīng)冠狀動脈內(nèi)注射人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 （MSCs）治療急性心肌梗死 （AMI）的療效。方法：制備臍血間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）懸液，在AMI患者行PCI術(shù)同時經(jīng)心導(dǎo)管冠脈內(nèi)注射MSCs懸液，為MSCs實(shí)驗(yàn)組。同時設(shè)僅行PCI術(shù)的AMI患者為PCI對照組。兩組在術(shù)后7日及90日行心肌核素顯像檢查及心臟超聲心動圖檢查，分別測定存活心肌和心室功能。結(jié)果：MSCs組術(shù)后90日左心室射血分?jǐn)?shù)持續(xù)改善，與術(shù)后7日及PCI對照組間差異顯著。MSCs組術(shù)后90日SPECT測定的心肌灌注缺損面積顯著低于PCI對照組。結(jié)論：經(jīng)冠狀動脈臍血間充質(zhì)干細(xì)胞心肌內(nèi)移植可以顯著改善急性心肌梗死患者的心室功能，心肌核素顯像存活心肌明顯增加。

臍血間充質(zhì)干細(xì)胞；急性心肌梗死；細(xì)胞移植

干細(xì)胞是具有多項(xiàng)分化潛能的原始細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)選擇人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞為種子細(xì)胞，經(jīng)冠狀動脈內(nèi)注射后，在急性心肌梗死患者體內(nèi)分化為心血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞，有效抑制心室肌病理性重構(gòu)，減少梗死面積，改善心梗后心臟功能。

1 資料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象 2010年11月至2012年11月，急性心肌梗死患者在12小時內(nèi)行急診PCI治療，且愿意同時接受臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療的患者39例，為MSCs實(shí)驗(yàn)組。同一時間段內(nèi)，急性心肌梗死患者在12小時內(nèi)僅行PCI治療，不接受臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療的患者39例，為PCI對照組。

1.2 實(shí)驗(yàn)資料 足月正常分娩的胎盤取自市婦嬰醫(yī)院婦產(chǎn)科 （經(jīng)產(chǎn)婦同意）。

1.3 方法

1.3.1 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞懸液的制備 在無菌條件下，將新鮮胎盤組織小葉用含肝素的PBS反復(fù)沖洗，充分去除血液。將胎盤小葉的絨毛膜層組織剪碎，加入含0.1%膠原酶的低糖DMEM，消化30min。200目濾網(wǎng)過濾，過濾后的細(xì)胞懸液用PBS洗2次。接種細(xì)胞于培養(yǎng)瓶中，加入10%胎牛血清的L－DMEM培養(yǎng)。貼壁48h后，換液去除懸浮細(xì)胞。每3～4天換液1次。待細(xì)胞80%～90%融合后，用0.05%胰酶消化，按1：2或1：3傳代，將傳至3代以上的細(xì)胞凍存于液氮中備用。移植術(shù)前2小時制備臍血間充質(zhì)干細(xì)胞懸液，用無菌生理鹽水反復(fù)洗刷細(xì)胞3～4次，過濾去除細(xì)胞團(tuán)塊后以肝素鹽水混勻備用，制備干細(xì)胞懸液共計6ml。

1.3.2 細(xì)胞移植方法 經(jīng)冠狀動脈內(nèi)注射間臍血間充質(zhì)干細(xì)胞：按照標(biāo)準(zhǔn)PCI的方法將直徑適宜的OTW球囊送到梗死相關(guān)動脈的閉塞近端，定位的方法以急診PCI時植入的支架為參考依據(jù)，以10atm持續(xù)膨脹球囊完全阻斷前向血流后經(jīng)球囊的中央腔注射干細(xì)胞懸液，球囊膨的時間為每次2分鐘，間隔30秒重新膨脹球囊，直至細(xì)胞懸液完全注射完畢。注射的速度以體外預(yù)備注射時的壓力為依據(jù)，使得細(xì)胞懸液離開球囊的中央腔后可以迅速沉積到血管壁，調(diào)整注射壓力使得細(xì)胞懸液能夠充填整個病變血管段。

1.3.3 存活心肌測定及心室功能測定 術(shù)后7日及術(shù)后90日，兩組所有患者均接受18－FDG－SPECT及超聲心動圖檢查，分別測定存活心肌和心室功能。收縮功能指數(shù)為左心室收縮期壓力除以收縮末期直徑，灌注缺損面積的測定采用bull’s－eye法。采用Sheehan’s方法將運(yùn)動異常區(qū)域垂直分為5個節(jié)段分別測定每個節(jié)段的長度平均差異。

1.3.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所有計量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）表示，當(dāng)P＜0.05時為統(tǒng)計學(xué)差異存在顯著性；計數(shù)資料和率檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。組內(nèi)研究后的連續(xù)性計量資料采用配對t檢驗(yàn)，組間非參數(shù)比較采用Wilcoxon和Mann－Whitney檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計學(xué)資料在SPSS軟件包（version10.1）下自動計算。

2 結(jié)果

MSCs組術(shù)后90日時超聲心動圖見心室運(yùn)動異常（運(yùn)動減弱，無運(yùn)動及反常運(yùn)動）比例顯著降低（13±5vs32±11%），同時顯著低于PCI對照組術(shù)后90日時的測定值（13±5vs28±10%）。MSCs組左心室梗死區(qū)域室壁運(yùn)動速度顯著增加（2.17±1.3vs±2.5cm／s），而PCI對照組幾無改善（2.19±1.5vs2.7±1.7cm／s）。MSCs組術(shù)后90日左心室射血分?jǐn)?shù)持續(xù)改善，與術(shù)后7日及PCI對照組之間差異顯著（67±11%vs49±9%和53±8%），但是術(shù)后7日兩組之間相比較差異無顯著性。MSCs組術(shù)后90日SPECT測定的心肌灌注缺損面積顯著低于術(shù)后7日及PCI對照組。

3 討論

急性心肌梗死后心室重構(gòu)及最終出現(xiàn)心力衰竭與壞死心肌范圍大小呈正相關(guān)，近年來心肌水平再生治療技術(shù)的研究最終使以干細(xì)胞心肌內(nèi)移植的方法成為該治療技術(shù)的核心，并也成為爭議最大的領(lǐng)域。但是無論心肌再生治療技術(shù)還存在如何缺陷，可以肯定的是心肌和血管組織再生的概念使以往的治療急性心肌壞死的方法和思路都發(fā)生了根本性的改變。

經(jīng)冠狀動脈內(nèi)注射干細(xì)胞是相對最為簡便的方法，從理論上說，MSC是具有貼壁生長和穿透血管壁進(jìn)入心肌內(nèi)的特性，因此即使在球囊退縮和恢復(fù)前向血流以后，間充質(zhì)干細(xì)胞也不會被血流沖刷到血管的遠(yuǎn)端去。動物實(shí)驗(yàn)也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)冠狀動脈內(nèi)的前向血流可以將骨髓單核細(xì)胞沖刷到血管的遠(yuǎn)端，而只能在遠(yuǎn)端局部區(qū)域形成心肌再生，卻不能在梗死區(qū)域形成心肌再生。

4 結(jié)論

MSCs組術(shù)后90日時超聲心動圖見心室運(yùn)動異常（運(yùn)動減弱，無運(yùn)動及反常運(yùn)動）比例顯著降低，同時顯著低于PCI對照組術(shù)后90日時的測定值。MSCs組左心室梗死區(qū)域室壁運(yùn)動速度顯著增加，而PCI對照組幾無改善。MSCs組術(shù)后90日左心室射血分?jǐn)?shù)持續(xù)改善，與術(shù)后7日及PCI對照組之間差異顯著，但是術(shù)后7日兩組之間相比較差異無顯著性。MSCs組術(shù)后90日時SPECT測定的灌注缺損面積顯著低于術(shù)后7日及PCI對照組，同時左心室舒張末期容積及收縮末期容積也顯著降低，左心室收縮末期壓力與容積的比值（Psyst／ESV）降低顯著。綜上所述，經(jīng)冠狀動脈臍血間充質(zhì)干細(xì)胞心肌內(nèi)移植可以顯著改善急性心肌梗死患者的心室功能，心肌核素顯像存活心肌明顯增加。

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1007－8517（2013）11－0106－02

2013.03.25）