解冰輝

（河北省畜牧良種工作站，河北石家莊 050061）

種豬精液質(zhì)量的控制與檢測

解冰輝

（河北省畜牧良種工作站，河北石家莊 050061）

在實施人工授精之前，對種豬精液質(zhì)量的控制和檢測尤為重要，將直接影響母豬的受精率。本文重點介紹了原精的檢測、稀釋與分裝，常溫精液的檢測及保存注意事項。

種豬精液；檢測；精子活力；畸形率

種豬精液的生物學特性和母豬的受精率密切相關(guān)，所以在實施人工授精之前，對精液質(zhì)量的控制和檢測很重要。

1 原精的檢測

在公豬站對種豬采精后，首先應對原精的以下方面進行檢測。

1.1 外觀

原精呈乳白色，略帶腥味，無膿性分泌物和皮毛等異物。如果呈現(xiàn)淡黃色，可能因為較長時間未采精；如果有膿性分泌物，懷疑種豬的健康出現(xiàn)問題；如果有異味或臭味，可能是包皮內(nèi)有積液或精液被尿液污染所致。

1.2 采精量

采精量應≥100 mL，方為合格。

1.3 精子密度

有條件的公豬站可以用專用的密度儀對精子密度進行測定，也可用血細胞計數(shù)板進行計數(shù)。按照國家相關(guān)標準規(guī)定，種豬常溫精液的精子密度應≥1億/mL，否則為不合格。

1.4 精子活力

取一滴原精滴于載玻片上，在36～38℃、低倍鏡下觀察，活力≥70%為合格。

2 原精的稀釋與分裝

按照原精密度測算出稀釋倍數(shù)，稀釋倍數(shù)=（采精量×密度×活力）/每劑量規(guī)定的直線前進運動精子數(shù)，稀釋液加入量=稀釋倍數(shù)×劑量-采精量。稀釋時應該注意：1）采集的原精應及時稀釋，以免活力降低；2）等溫稀釋：原精和稀釋液的溫差應控制在1℃以內(nèi)，根據(jù)原精的溫度調(diào)整稀釋液的溫度；3）分2～3次稀釋，每次稀釋靜置30秒后再進行下一次稀釋；4）稀釋時，將稀釋液沿杯壁緩慢加入，邊加邊沿一個方向輕輕搖動或攪拌，使其混合均勻；5）稀釋完畢靜置5分鐘后，檢測活力，≥60%則進行分裝，達不到則應廢棄。

精液分裝時應注意瓶內(nèi)或袋內(nèi)不能存留空氣，要求保存溫度為17℃，每隔4～8小時輕輕翻動一次。

3 常溫精液的檢測

3.1 種豬常溫精液的國家標準

關(guān)于種豬常溫精液的國家標準要求如下：1）外觀：乳白色，無雜質(zhì)，包裝封口嚴密。2）劑量：地方品種為40～50 mL，其他為 80～100 mL。3）精子活力：≥60%。4）每劑量中直線前進運動精子數(shù)：地方品種≥10億，其他≥25億。5）精子畸形率≤20%。6）有效期≥72小時。

3.2 常溫精液的檢測

3.2.1 標識

首先產(chǎn)品標識上應該標明豬號、品種、采精具體時間、生產(chǎn)單位等。如果是項目產(chǎn)品，還應有“全國生豬良種項目”標識。不能只用碳素筆在瓶子上標記豬號。精液的外觀檢測同原精。

3.2.2 劑量

取同一頭豬的兩瓶精液，輕輕沿瓶壁倒入量筒內(nèi)，盡量減少氣泡的產(chǎn)生。將量筒放于工作臺上進行標準讀數(shù)，平均每瓶≥80 mL方為合格。應注意：很多精液瓶的刻度并不準確，精液量往往達不到80 mL。

3.2.3 精子活力

將兩個劑量的常溫精液輕輕搖動均勻，分別取25 μL精液于預熱的載玻片上并加蓋玻片，在37℃條件下，用顯微鏡（200～400倍）觀察精子活動情況，每個樣片觀察3個視野，計算平均值，精子活力≥60%為合格。有條件的最好使用相差顯微鏡。

檢測精子活力需快速準確，要在第一時間判斷直線前進運動的精子數(shù)是否在一半以上，進而再觀察是否達到60%、70%、80%等。如果精子活力＜60%，就需多看幾張樣片，多做幾次重復試驗，以避免其他因素造成的活力低下。例如，環(huán)境溫度會影響精子活力，溫度偏低則精子的活躍程度降低；檢測精子活力的時間一般控制在1～2分鐘內(nèi)，時間過長，精子可能會部分甚至全部死亡。

3.2.4 每劑量中直線前進運動的精子數(shù)

取50 μL精液和3.0%的氯化鈉溶液0.95 mL混勻，將血蓋片蓋在血球計數(shù)板的計數(shù)室上，用移液器吸取適量混合好的液體，滴在血蓋片邊緣，使稀釋后的精液慢慢自行流入計數(shù)室，均勻充滿，不允許有氣泡產(chǎn)生或厚度過大，放置5分鐘后，在顯微鏡下觀察計數(shù)，每個計數(shù)室觀察左上角、左下角、右上角、右下角和中間共5個方格，累計5個方格中所有的精子數(shù)；計數(shù)原則：計上不計下，計左不計右。每劑量中直線前進運動的精子數(shù)=5個方格精子數(shù)× 100萬×劑量值×活力。每個樣品應觀察兩個計數(shù)室，用平均值表示結(jié)果，如兩個計數(shù)室計數(shù)誤差大于5%則應重檢。使用血球計數(shù)板前，不能用刷子清洗，防止劃傷格線導致顯微鏡下的視野模糊不清。

3.2.5 精子畸形率

1）抹片：在載玻片A一面的一端標明豬號，取一滴精液滴于載玻片A的另一面的一端，用邊緣光滑的載玻片B的一端與有樣品的載玻片A邊緣呈約35°夾角，將樣品均勻分布于載玻片B一端，然后用載玻片B拖著樣品走向載玻片A的另一端，自然風干15分鐘。每個樣品制作2個抹片。

2）固定：在風干的抹片上滴1～2 mL中性福爾馬林固定液，15分鐘后用清水緩緩沖去固定液，自然風干或冷風吹干。

3）染色：固定好的抹片反扣在帶有平槽的有機玻璃面上，把姬姆薩染液滴于槽與抹片之間，讓其充滿平槽并與抹片充分接觸，1.5小時后用水緩緩沖去染液，晾干待檢。

4）鏡檢：不能使用相差顯微鏡，載物臺不能加熱。在顯微鏡下400倍觀察制備好的抹片，每個抹片分左右兩個區(qū)，共觀察200個精子，取兩片平均值，兩片畸形率差值大于6則重做。精子畸形基本分為以下三類：a類是頭部畸形，即窄頭、梨形頭、圓頭、巨頭、小頭、雙頭和頂部脫落等；b類是尾部畸形，即帶有原生質(zhì)滴、單卷尾、多重卷尾、環(huán)形卷尾和雙尾等；c類是中段畸形，即頸部腫脹、中段纖絲裸露、中段呈螺旋狀等。

3.2.6 常溫精液的有效期及其保存注意事項

國家標準規(guī)定常溫精液的有效期應超過72小時，這就要求使用的稀釋液或稀釋粉是中效或長效的。生產(chǎn)常溫精液要注意：精液中應沒有雜質(zhì)，如有雜質(zhì)，精子容易因聚集、粘連而死亡；精液溫度要逐漸降低至17℃，要用毛巾或塑料袋把分裝好的精液包好置于泡沫箱內(nèi)，然后再放在17℃恒溫箱里保存，如果把剛分裝好的精液直接放入17℃恒溫箱中，對精子損傷非常大；保存時溫差不應超上下1℃，每隔4～8小時應翻動一次。

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2013-11-26