蘇秀榮，謝 寧，張紀(jì)龍，王金信，①

根結(jié)線蟲病主要危害黃瓜(Cucumis sativus L.)、番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)和茄子(Solanum melongena L.)等常見蔬菜［1］，是蔬菜生產(chǎn)過(guò)程中的主要障礙之一［2］。目前，化學(xué)防治仍是植物寄生線蟲病害的最主要防治措施，但是這類殺線蟲劑的毒性較高，使用成本也高，環(huán)境相容性較差［3］。近年來(lái)，利用植物天然活性物質(zhì)防治植物害蟲的研究報(bào)道越來(lái)越多［4－6］。

銀膠菊(Parthenium hysterophorus L.)原產(chǎn)于美國(guó)德克薩斯州及墨西哥北部，現(xiàn)廣泛分布于全球熱帶地區(qū)。其花有毒，花粉可造成人和家畜(牛)發(fā)生過(guò)敏性皮炎；該種的繁殖力強(qiáng)且具有較強(qiáng)的化感潛力，可抑制鄰近雜草和作物的生長(zhǎng)［7－9］；銀膠菊葉的乙醚提取物可導(dǎo)致埃及伊蚊(Aedes aegypti L.)產(chǎn)卵能力降低及卵死亡［10］；其鮮葉及種子的蒸餾水提取物可抑制南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita Chitwood)卵的孵化并具有殺線蟲活性［11－12］。而有關(guān)銀膠菊提取物對(duì)根結(jié)線蟲的毒性與控制的研究報(bào)道相對(duì)較少。

鑒于此，作者采用不同溶劑對(duì)銀膠菊葉和花的干粉進(jìn)行了提取及萃取，并比較了它們對(duì)南方根結(jié)線蟲的殺蟲活性，以期為進(jìn)一步合理利用銀膠菊以及尋找新型植物源殺線蟲劑提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試的銀膠菊葉和花均采自山東臨沂莒南，為野生植株；于盛花期采集全株后分別收集葉和花，陰干、粉碎后備用。供試南方根結(jié)線蟲采自山東農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室內(nèi)種植的接種有南方根結(jié)線蟲的番茄苗［13］；從番茄根結(jié)表面挑取新鮮卵囊，將卵粒放于自制孵化器中，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行孵化，每隔24 h收集2齡幼蟲［14］供試。

所用儀器包括MP502B型電子天平(上海精天電子儀器有限公司)、美國(guó)Corning－Costar 24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(上海艾研生物科技有限公司)、250 mL索氏提取器(北京朋利馳科技有限公司)、LRH－150－G型恒溫培養(yǎng)箱(廣東省醫(yī)療器械廠)、RE52－4型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海滬西分析儀器廠)和SZ6045型雙目鏡(日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社)；主要溶劑有蒸餾水、甲醇(AR)、乙酸乙酯(AR)、石油醚(AR)和三氯甲烷(AR)，由天津凱通化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 不同溶劑提取物的制備 取銀膠菊葉和花的干燥粉末各5 g，分別加入150 mL蒸餾水、甲醇、乙酸乙酯和石油醚，用索氏提取器浸提5 h后抽濾，浸提液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾濃縮至10 mL，將濃縮的浸提液置于55℃恒溫干燥箱中，待溶劑揮發(fā)后，得到對(duì)應(yīng)溶劑的提取物浸膏。用蒸餾水將各提取物浸膏配制成質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)10％的待測(cè)溶液母液，其中，配制乙酸乙酯和石油醚提取物溶液時(shí)需加入1滴500號(hào)表面活性劑(十二烷基磺酸鈣)助溶。

1.2.2 甲醇提取物的萃取分離 取銀膠菊葉和花的干燥粉末各1 000 g，分別加入3倍體積的甲醇，置于55℃水浴中浸提5 h后，按上述方法獲得提取物浸膏；然后用300 mL HCl(pH 2)溶解浸膏，抽濾除去殘?jiān)?；濾液用石油醚萃取3次，每次100 mL。棄石油醚層，酸水層合并后用100 mL三氯甲烷萃取，共萃取3次；合并三氯甲烷層萃取液，蒸餾回收三氯甲烷，干燥后獲得三氯甲烷Ⅰ層萃取物。酸水層用氨水調(diào)節(jié)酸堿度(pH 9～pH 10)，然后再用三氯甲烷萃取3次，每次100 mL，合并三氯甲烷層，蒸餾回收三氯甲烷，干燥后獲得三氯甲烷Ⅱ?qū)虞腿∥?。堿水層經(jīng)減壓蒸餾濃縮干燥后獲得固形物。分別用蒸餾水配制成質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)5％的待測(cè)母液，用于殺蟲活性測(cè)定。

使用極性不同的溶劑，按照極性從小到大依次對(duì)上述堿水層固形物進(jìn)行萃取分離，溶劑分別為：三氯甲烷、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=8∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=5∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=4∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=2∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶2、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶4、甲醇、V(甲醇)∶V(水)=1∶1。各溶劑均萃取3次，每次200 mL，合并相同溶劑的萃取物，共收集到11個(gè)萃取組分，即A1～A11，用于殺蟲活性測(cè)定。

1.2.3 生物堿的定性檢測(cè) 參照文獻(xiàn)［15］的2種方法分別對(duì)不同溶劑提取物、萃取物及萃取組分進(jìn)行生物堿定性檢測(cè)，使用的檢測(cè)劑分別是碘化鉍鉀試劑(在酸性溶液中與生物堿反應(yīng)生成棕紅色沉淀)和硅鎢酸試劑(在酸性溶液中與生物堿反應(yīng)生成灰白色沉淀)。

1.2.4 殺蟲活性測(cè)定方法 采用藥液浸泡法［14］測(cè)定待測(cè)溶液對(duì)南方根結(jié)線蟲的殺蟲活性。將0.5 mL線蟲懸浮液注入細(xì)胞培養(yǎng)板的樣品孔內(nèi)，根據(jù)不同待測(cè)液的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)加入一定體積的待測(cè)溶液母液，用蒸餾水補(bǔ)足至總體積1 mL，混合均勻后置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。其中，不同溶劑提取物的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為1.0％、0.5％和0.2％，甲醇提取物的堿水層、三氯甲烷Ⅰ層和Ⅱ?qū)虞腿∥锏馁|(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為1.0％，組分A1～A11的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.2％和0.1％；以蒸餾水作為蒸餾水和甲醇提取物或萃取物的空白，以含有1滴500號(hào)表面活性劑并稀釋相同倍數(shù)的蒸餾水作為乙酸乙酯和石油醚提取物的空白。每處理4次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)約30條試蟲。分別于處理后24和48 h檢查各待測(cè)液中線蟲的死亡與存活情況，并分別計(jì)算線蟲的死亡率和校正死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

按照公式“得率=(提取物浸膏質(zhì)量/粉末樣品質(zhì)量)×100％”計(jì)算提取物得率。線蟲死亡率和校正死亡率的計(jì)算公式分別為：死亡率=(死亡蟲數(shù)/供試蟲數(shù))×100％；校正死亡率=〔(處理組死亡率－空白組死亡率)/(1－空白組死亡率)〕×100％。

采用南京農(nóng)業(yè)大學(xué)王紹華編制的STST統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同組分的提取率及生物堿定性檢測(cè)

采用蒸餾水、甲醇、乙酸乙酯及石油醚為溶劑，對(duì)銀膠菊葉和花的干粉進(jìn)行提取，不同溶劑提取物的得率差異明顯。葉和花蒸餾水提取物的得率最高，分別為24.5％和20.3％；葉和花甲醇提取物的得率次之，分別為19.6％和10.9％；葉和花乙酸乙酯提取物的得率分別為6.8％和7.7％；葉和花石油醚提取物的得率最低，分別為2.0％和2.7％。盡管葉和花的蒸餾水和甲醇提取物的得率較高，但蒸餾水提取物中雜質(zhì)較多，難以提純，因而選取銀膠菊葉和花的甲醇提取物進(jìn)行進(jìn)一步的活性組分萃取與分離。

生物堿定性檢測(cè)結(jié)果表明：銀膠菊葉和花的甲醇和水提取物，葉和花甲醇提取物的堿水層、三氯甲烷Ⅰ和Ⅱ?qū)虞腿∥?，以及葉和花甲醇提取物堿水層的不同極性組分A1～A11中均含有大量的生物堿。

2.2 不同組分的殺線蟲活性分析

2.2.1 不同溶劑提取物的殺蟲活性比較 用銀膠菊葉和花的4種溶劑提取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲的校正死亡率分別見表1和表2?？傮w來(lái)看，在質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)相同的條件下，銀膠菊葉和花的蒸餾水提取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的殺蟲活性最強(qiáng)，甲醇提取物次之，乙酸乙酯提取物較弱，石油醚提取物最弱；不同溶劑提取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性隨其質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的降低而減弱，即質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)越低，對(duì)試蟲的毒殺活性越弱，試蟲的校正死亡率越低。

用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％、0.5％和0.2％的銀膠菊葉蒸餾水提取物處理48 h，南方根結(jié)線蟲的校正死亡率都達(dá)到95％以上；用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％和0.5％的銀膠菊葉甲醇提取物進(jìn)行處理，南方根結(jié)線蟲的48 h校正死亡率也達(dá)到95％以上。用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％和0.5％的銀膠菊花蒸餾水提取物進(jìn)行處理，南方根結(jié)線蟲的24和48 h校正死亡率都達(dá)到了100.00％；而用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％和0.5％的銀膠菊花甲醇提取物進(jìn)行處理，南方根結(jié)線蟲的48 h校正死亡率也較高，均超過(guò)90％。差異顯著性分析結(jié)果表明：銀膠菊葉和花的4種溶劑提取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的殺蟲活性基本都存在顯著差異。

表1 用銀膠菊葉不同溶劑提取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table1 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different solvent extracts from leaf of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(±SD)1)

表1 用銀膠菊葉不同溶劑提取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table1 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different solvent extracts from leaf of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示差異顯著(P=0.05)The different small letters in the same column indicate the significant difference (P=0.05).2)1：蒸餾水提取物Distilled water extracts；2：甲醇提取物 Methanol extracts；3：乙酸乙酯提取物Ethyl acetate extracts；4：石油醚提取物Petroleum ether extracts.

處理液2) Treatment solution2)質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)/％ Mass-volume ratio不同處理時(shí)間試蟲的校正死亡率/％ Adjusted mortality of test-insect at different treatment times 24 h 48 h 1 1.0 100.00±0.00a 100.00±0.00a 2 1.0 91.66±3.25b 97.22±5.43a 3 1.0 72.22±3.42c 84.51±3.51b 4 1.0 45.58±3.29d 41.78±3.45c 1 0.5 100.00±0.00a 100.00±0.00a 2 0.5 89.02±2.69b 96.57±5.27a 3 0.5 64.56±4.35c 73.43±3.10b 4 0.5 35.86±5.02d 28.32±6.86c 1 0.2 85.12±4.34a 95.67±5.24a 2 0.2 70.64±4.25b 51.63±5.84c 3 0.2 56.47±4.83c 62.02±2.35b 4 0.2 33.12±2.71d 20.96±2.31d

表2 用銀膠菊花不同溶劑提取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table2 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different solvent extracts from flower of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(±SD)1)

表2 用銀膠菊花不同溶劑提取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table2 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different solvent extracts from flower of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示差異顯著(P=0.05)The different small letters in the same column indicate the significant difference (P=0.05).2)1：蒸餾水提取物Distilled water extracts；2：甲醇提取物 Methanol extracts；3：乙酸乙酯提取物Ethyl acetate extracts；4：石油醚提取物Petroleum ether extracts.

處理液2) Treatment solution2)質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)/％ Mass-volume ratio不同處理時(shí)間試蟲的校正死亡率/％ Adjusted mortality of test-insect at different treatment times 24 h 48 h 1 1.0 100.00±0.00a 100.00±0.00a 2 1.0 92.35±3.98b 98.27±5.12a 3 1.0 80.09±5.38c 86.32±4.23b 4 1.0 16.84±3.62d 8.19±3.27c 1 0.5 100.00±0.00a 100.00±0.00a 2 0.5 76.58±4.87b 90.25±3.26b 3 0.5 60.41±4.25c 72.24±3.19c 4 0.5 5.36±3.61d 3.25±2.47d 1 0.2 51.24±5.73b 68.23±4.76a 2 0.2 70.36±5.38a 62.15±6.25a 3 0.2 54.83±6.38b 49.39±7.11b 4 0.2 2.44±1.90c 2.10±2.43c

2.2.2 甲醇提取物中不同萃取物的殺蟲活性比較 將銀膠菊葉和花甲醇提取物的堿水層、三氯甲烷Ⅰ層和Ⅱ?qū)虞腿∥锱渲瞥少|(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％的處理液，對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性差異明顯，24和48 h的校正死亡率見表3。表3結(jié)果顯示：銀膠菊葉和花甲醇提取物的堿水層萃取物以及花甲醇提取物的三氯甲烷Ⅰ層萃取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性均最強(qiáng)，24和48 h的校正死亡率均為100.00％，顯著高于其他萃取物(P＜0.05)；而其葉甲醇提取物的三氯甲烷Ⅰ層和花甲醇提取物的三氯甲烷Ⅱ?qū)虞腿∥镆簿哂幸欢ǖ臍⒕€蟲活性，處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲的校正死亡率均在50％以上；相對(duì)而言，銀膠菊葉甲醇提取物的三氯甲烷Ⅱ?qū)虞腿∥飳?duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性最弱，處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲的校正死亡率均在50％以下，顯著低于其他萃取物(P＜0.05)。

表3 用銀膠菊花和葉甲醇提取物的不同萃取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table 3 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different partitioned extracts from methanol extracts of flower and leaf of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(± SD)1)

表3 用銀膠菊花和葉甲醇提取物的不同萃取物處理24和48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)1)Table 3 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different partitioned extracts from methanol extracts of flower and leaf of Parthenium hysterophorus L.for 24 and 48 h(± SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示差異顯著(P=0.05)The different small letters in the same column indicate the significant difference (P=0.05).2)萃取物的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為1.0％Mass-volume ratio of partitioned extracts is 1.0％.

萃取物2) Partitioned extracts2)不同處理時(shí)間試蟲的校正死亡率/％ Adjusted mortality of test-insect at different treatment times 24 h 48 h花甲醇提取物Methanol extracts from flower堿水層Alkaline water layer 100.00±0.00a 100.00±0.00a三氯甲烷Ⅰ層Chloroform layerⅠ 100.00±0.00a 100.00±0.00a三氯甲烷Ⅱ?qū)覥hloroform layerⅡ 76.97±3.43b 77.47±4.58b葉甲醇提取物Methanol extracts from leaf堿水層Alkaline water layer 100.00±0.00a 100.00±0.00a三氯甲烷Ⅰ層Chloroform layerⅠ 51.18±4.81b 68.07±3.96b三氯甲烷Ⅱ?qū)覥hloroform layerⅡ44.50±3.92c 47.02±1.94c

2.2.3 甲醇提取物堿水層中不同極性組分的殺蟲活性比較 用銀膠菊葉和花甲醇提取物堿水層的不同極性組分(A1～A11)處理48 h后，南方根結(jié)線蟲的校正死亡率見表4。由表4可見：在花甲醇提取物堿水層的11個(gè)組分中，用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.2％和0.1％的A2〔溶劑為V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1〕和A7〔溶劑為V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1〕處理48 h后南方根結(jié)線蟲的校正死亡率都達(dá)100.00％，顯著高于其他組分；在葉甲醇提取物堿水層的11個(gè)組分中，用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.2％和0.1％的A2和A6〔V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=2∶1〕處理48 h后南方根結(jié)線蟲的校正死亡率都達(dá)100.00％，也顯著高于其他組分；而其他組分對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性均明顯低于上述4個(gè)組分。

表4 用銀膠菊花和葉甲醇提取物堿水層的不同萃取組分處理48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)Table 4 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different partitioned constituents from alkaline water layer of methanol extracts from flower and leaf of Parthenium hysterophorus L.for 48 h(±SD)

表4 用銀膠菊花和葉甲醇提取物堿水層的不同萃取組分處理48 h后南方根結(jié)線蟲死亡率比較(±SD)Table 4 Comparison ofmortality of Meloidogyne incognita Chitwood treated by different partitioned constituents from alkaline water layer of methanol extracts from flower and leaf of Parthenium hysterophorus L.for 48 h(±SD)

1)組分A1～A11的萃取劑依次為三氯甲烷、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=8∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=5∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=4∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=2∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶2、V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶4、甲醇、V(甲醇)∶V(水)=1∶1 Partitioned solvents of A1－A11 constituents are in order of chloroform，V(chloroform)∶V(methanol)=10∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=8∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=5∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=4∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=2∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=1∶1，V(chloroform)∶V(methanol)=1∶2，V(chloroform)∶V(methanol)=1∶4，methanol，V(methanol)∶V(water)=1∶1.2)同列中不同的小寫字母表示差異顯著(P=0.05)The different small letters in the same column indicate the significant difference(P=0.05).G1：各萃取組分的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.2％Mass-volume ratio of partitioned constituents is 0.2％；G2：各萃取組分的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.1％Massvolume ratio of partitioned constituents is 0.1％.

花的萃取組分1) Partitioned constituent from flower1)不同處理組試蟲的校正死亡率/％2) Adjusted mortality of test-insect in different treatment groups2) G1 G2葉的萃取組分1) Partitioned constituent from leaf1)不同處理組試蟲的校正死亡率/％2) Adjusted mortality of test-insect in different treatment groups2) G1 G2 A1 60.62±3.51c 47.31±3.12b A1 4.67±0.60f 3.88±0.36f A2 100.00±0.00a 100.00±0.00a A2 100.00±0.00a 100.00±0.00a A3 48.80±9.78d 34.80±4.45c A3 59.84±5.06b 30.85±4.94c A4 50.32±3.83d 30.63±6.81c A4 63.27±0.86b 42.29±1.52b A5 58.70±1.96 f 44.75±2.53d A5 15.12±3.96de 7.91±2.52ef A6 70.43±6.58b 49.91±7.64b A6 100.00±0.00a 100.00±0.00a A7 100.00±0.00a 100.00±0.00a A7 12.96±1.44e 7.78±1.01ef A8 8.70±1.16 f 4.55±0.95d A8 20.03±2.28cd 11.55±1.57e A9 51.44±6.01d 27.37±8.86c A9 16.64±4.44de 4.93±0.86f A10 38.11±6.27e 25.29±5.87c A10 23.68±2.68c 5.61±1.56ef A11 9.54±2.84 f 5.96±2.42d A11 19.01±1.83c d 18.67±1.65d

3 討論和結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)：銀膠菊是含有殺線蟲活性物質(zhì)的植物，與一些具有殺線蟲活性的植物種類［16］類似，銀膠菊不同部位提取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性有一定差異。用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％和0.5％的銀膠菊葉和花蒸餾水提取物處理48 h后試蟲的校正死亡率均達(dá)100.00％；但質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.2％的葉蒸餾水提取物對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性則高于其花的蒸餾水提取物，這與Hasan等［17］的研究結(jié)果相似。同種植物不同溶劑提取物的殺線蟲活性差異較大［18－19］，而銀膠菊葉和花的蒸餾水或甲醇提取物的殺蟲活性較強(qiáng)，這與Sharma等［11］和Khurma等［12］的研究結(jié)果一致，說(shuō)明銀膠菊葉或花中含有的殺蟲活性物質(zhì)可能含有極性較大的官能團(tuán)。用銀膠菊葉和花的石油醚和乙酸乙酯提取物進(jìn)行處理，南方根結(jié)線蟲表現(xiàn)出明顯的復(fù)活現(xiàn)象；用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.2％的石油醚和乙酸乙酯提取物進(jìn)行處理，48h后試蟲的校正死亡率比24 h低，說(shuō)明這些提取物可能對(duì)南方根結(jié)線蟲有麻痹作用，在數(shù)小時(shí)甚至數(shù)十小時(shí)之后因提取物的麻痹作用失效，試蟲得以復(fù)活［14］；也可能是其中的部分活性成分不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)變成其他非活性物質(zhì)，導(dǎo)致部分試蟲復(fù)活。

具有殺線蟲活性的植物次生代謝產(chǎn)物種類較多，生物堿是其中的重要成分之一［20］。銀膠菊葉和花的甲醇提取物的不同溶劑萃取物中，堿水層萃取物的提取量較大而且殺線蟲活性強(qiáng)，與其中所含的生物堿成分有關(guān)，值得進(jìn)行進(jìn)一步分離與開發(fā)利用研究。在銀膠菊葉和花的甲醇提取物的不同溶劑萃取物中，用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1.0％的花和葉堿水層萃取物以及花的三氯甲烷Ⅰ層萃取物分別處理48 h，試蟲的校正死亡率為 100.00％，但用葉的三氯甲烷Ⅰ層萃取物處理48 h，試蟲的校正死亡率僅為68.07％。與葉相比，銀膠菊花甲醇提取物的三氯甲烷層萃取物有較強(qiáng)的殺蟲活性，說(shuō)明銀膠菊花中的殺線蟲活性成分更多或含量更高。其葉和花甲醇提取物堿水層的不同極性組分對(duì)南方根結(jié)線蟲的殺蟲活性不同，其中，以V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1和V(三氯甲烷)∶V(甲醇)= 1∶1為溶劑提取的花甲醇提取物堿水層組分、以及用V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1和V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=2∶1為溶劑提取的葉甲醇提取物堿水層組分均具有較強(qiáng)的殺蟲活性，說(shuō)明銀膠菊的殺線蟲活性可能是數(shù)種活性成分單獨(dú)或共同作用的結(jié)果。Datta等［21］的研究結(jié)果表明：銀膠菊中的倍半萜內(nèi)酯類衍生物具有一定的殺線蟲活性。而本實(shí)驗(yàn)提取的具有殺線蟲活性的提取物及組分中除生物堿外是否還含有倍半萜內(nèi)酯類衍生物則有待進(jìn)一步分離研究。

銀膠菊對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒殺活性不僅與提取部位及溶劑的種類和極性有關(guān)，提取物濃度及作用時(shí)間等因素也對(duì)其殺線蟲活性有不同程度的影響。根據(jù)研究結(jié)果，建議選擇極性較大的甲醇或蒸餾水對(duì)銀膠菊的葉和花進(jìn)行浸提，并且有必要采取進(jìn)一步的萃取分離方法對(duì)其中的殺蟲活性成分進(jìn)行分離純化，以尋找有效的殺線蟲生物源農(nóng)藥。

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