陸漓濱，唐慶華

（廣西桂林南藥股份有限公司，桂林 541000）

蒿甲醚（Artemether）作為一種抗瘧原料藥，與其他抗瘧藥聯(lián)合用藥，治療危重瘧疾者療效好，近年來備受人們的關(guān)注。該原料藥的制備工藝使用了甲醇、乙醇及二氯甲烷等有機溶劑，依據(jù)第四屆人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）1997年7月17日提出的殘留溶劑指導(dǎo)原則[1]，甲醇、乙醇和二氯甲烷溶劑被列為藥品必須限制的第二、三類低毒性有機溶劑，因此對該原料藥進(jìn)行有機溶劑殘留檢測就顯得尤為重要。筆者及同事曾用液體頂空和液固頂空氣相色譜法對藥物中有機溶劑殘留量進(jìn)行測定，均獲得較為理想的效果[2~5]。本文建立的蒿甲醚有機溶劑殘留測定法，方法簡單、準(zhǔn)確、靈敏度及重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

日本島津GC-17A氣相色譜儀，HSS-4A頂空進(jìn)樣裝置，CLASS-GC10色譜工作站；

蒿甲醚原料藥（某公司提供）；甲醇、乙醇、二氯甲烷溶液均為色譜純，純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1大口徑毛細(xì)管柱30 m×0.53 mm× 1.5μm；柱溫：35℃ 氣化室：150℃；檢測器：FID，250℃；載氣： 氮氣，流速3mL·min-1；頂空設(shè)置：VIAL 75℃；SYRINGE 75℃；COND TIME 20 min；ANAL TIME 10 min；頂空進(jìn)樣量100μL。理論板數(shù)不低于8000；甲醇、乙醇、二氯甲烷的分離度均大于2。對照品溶劑及原料藥氣相色譜圖見圖1。

圖1 對照品溶劑(A)及原料藥(B)氣相色譜圖

2.2 溶液及試樣制備

2.2.1 對照品試樣制備

分別精密稱取甲醇0.0605g , 乙醇0.0043g，二氯甲烷0.0046g，分別置100mL容量瓶中，用純化水稀釋并定容，作為對照品貯備液；分別精密移取甲醇、乙醇及二氯甲烷對照品貯備液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一頂空瓶中，加入純化水1mL，加蓋密封，作為對照品試樣。

2.2.2 供試品試樣制備

稱取蒿甲醚原料藥0.1g置頂空瓶中，加入純化水1mL，加蓋密封，作為供試品試樣。

2.3 線性試驗及檢測限

精密移取對照品貯備液甲醇0.05mL，乙醇0.15mL，二氯甲烷0.12mL；甲醇0.5mL，乙醇0.3mL，二氯甲烷0.3mL；甲醇0.85mL，乙醇0.6mL，二氯甲烷0.6mL；甲醇0.95mL，乙醇1.0mL，二氯甲烷1.0mL；甲醇1.05mL，乙醇1.5mL，二氯甲烷1.5mL等5個試樣，按甲醇、乙醇及二氯甲烷量由小到大順序分別置頂空瓶中，并各加入純化水1 mL，加蓋密封，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液試樣，裝入HSS-4A試樣轉(zhuǎn)盤，依次在自動恒溫箱中于75℃下保溫20 min，每個樣品各頂空進(jìn)針3次，分別以各對照品的峰面積Y為縱座標(biāo)，以濃度X為橫座標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明：甲醇、乙醇及二氯甲烷分別在30.2~635.2，6.4~64.5，5.5~68.7μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為：

當(dāng)信噪比S/N=3，甲醇、乙醇及二氯甲烷的檢測限分別為0.02，0.04，0.01μg· g-1。

2.4 回收率試驗

用已測得溶劑殘留量的蒿甲醚原料藥，批號為API 1的試樣，分別精密添加入適當(dāng)甲醇、乙醇及二氯甲烷溶劑量的對照品貯備液，即相當(dāng)于加入蒿甲醚原料藥中甲醇量為726.0 μg· g-1，乙醇量為276.0μg·g-1，二氯甲烷量為460.0 μg·g-1，加蓋裝盤，依照本頂空氣相色譜法測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果 ( n = 3 )

2.5 精密度試驗

2.5.1 系統(tǒng)精密度試驗

分別移取甲醇、乙醇及二氯甲烷對照品貯備液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一頂空瓶中，加入純化水1mL，加蓋密封，作為系統(tǒng)精密度試驗的試樣，依法測定，連續(xù)頂空進(jìn)樣6次，測試甲醇、乙醇及二氯甲烷的溶劑峰面積，計算結(jié)果：甲醇、乙醇及二氯甲烷的RSD分別為5.3%，4.2%，2.0%。

2.5.2 方法精密度試驗

分別移取甲醇、乙醇及二氯甲烷對照品貯備液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一頂空瓶中，加入純化水1mL，加蓋密封，作為對照品試樣；再分別稱取蒿甲醚原料藥API 3平行6份，分別加入純化水1mL，作為方法精密度試驗的試樣，依法測定，連續(xù)頂空進(jìn)樣6次，測試結(jié)果：計算甲醇、乙醇的RSD分別為9.25%，5.50%，均小于10%，符合頂空氣相色譜法中殘留溶劑測定法之外標(biāo)法的規(guī)定[6]；而且測得甲醇和乙醇的殘留量與先前測定值基本一致，試樣均未檢出二氯甲烷。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品試樣，以1天、2天、3天進(jìn)樣測定，測試結(jié)果表明：蒿甲醚原料藥樣品均未檢出二氯甲烷，原料藥中甲醇，乙醇溶劑殘留量基本不變，計算RSD值，甲醇、乙醇分別為6.20%，0.48%。

2.7 樣品測定

稱取3個批號的蒿甲醚原料藥，每份約0.1g，各置頂空瓶中，分別加入純化水1mL，加蓋密封，裝入試樣轉(zhuǎn)盤，按本頂空氣相色譜法進(jìn)行測定。檢測結(jié)果表明：蒿甲醚原料藥試樣均未檢出二氯甲烷，原料藥氣相色譜圖見圖1。

所測試的3批蒿甲醚原料藥，甲醇、乙醇的殘留量均符合規(guī)定[1]，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果 ( n = 3 )

3 討論

本文建立的蒿甲醚原料藥中有機溶劑殘留的頂空氣相色譜法，選擇純化水作為蒿甲醚原料藥的溶劑，不單是考慮到用純化水作溶劑不像有機溶劑會干擾各待測物出峰，更值得一提的是，用純化水作為蒿甲醚的溶劑既可避免有機溶劑帶入的酸、堿性介質(zhì)對甲氧基的影響，并有利于試樣中甲醇、乙醇及二氯甲烷溶劑的出峰，考慮到蒿甲醚分子結(jié)構(gòu)因素，原料藥溶液的頂空試樣瓶不宜在過高的溫度下恒溫時間太長。

本液體頂空氣相色譜法，測定組分出峰保留時間與相應(yīng)物質(zhì)對照品溶液進(jìn)樣一致。不過，還應(yīng)該說明一點，在原料藥樣品色譜圖中，所能看到的4.605min基線處出現(xiàn)的小峰，并不是二氯甲烷溶劑峰，盡管該小峰在后面進(jìn)行系統(tǒng)性試驗中還有出現(xiàn)，然而依據(jù)有針對性地進(jìn)行的相應(yīng)色譜條件試驗，已排除了二氯甲烷溶劑的可能性。

本色譜法添加組分回收完全。

本方法采用液體頂空進(jìn)樣，作為原料藥溶劑殘留測定的2010年版《中國藥典》的法定方法[6]，不失為一種理想的方法。

[1]周海鈞主譯. 藥品注冊的國際技術(shù)要求 [M].北京;人民衛(wèi)生出版社,2000：88-89.

[2]唐慶華,翁小清,唐咸梅. 頂空氣相色譜法測定鹽酸依匹斯汀中溶劑殘留[J].中國藥事,2004,18（9）：563-564.

[3]唐慶華,陸漓濱. 細(xì)辛腦中有機溶劑殘留的毛細(xì)管頂空GC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2005,36（2）：95-96.

[4]唐慶華,胡建英.液固頂空GC測定阿拉普利中溶劑殘留[J].生命科學(xué)儀器, 2005,3（6）：44-46.

[5]唐慶華,馬志偉. 液體頂空GC測定鹽酸馬尼地平有機溶劑殘留[J].生命科學(xué)儀器, 2006,4（4）：37-39.

[6]中國藥典2010版[S].（二部）,附錄Ⅷ P殘留溶劑測定法：附錄61.