萬生芳

(甘肅中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合系，甘肅蘭州 730000)

中醫(yī)學(xué)中脾是以消化系統(tǒng)為主的多系統(tǒng)多器官的綜合功能單位。脾胃功能與機(jī)體正氣的生成有著密切的關(guān)系。脾虛證是一種以腹瀉、體質(zhì)量下降、畏寒、倦怠等為主要表現(xiàn)的中醫(yī)病證，比較集中地反映了機(jī)體消化吸收、代謝和免疫功能的低下狀態(tài)。紅芪是豆科植物多序巖黃芪(Hedysarum Polybotrys Hand．-Mazz)的干燥根，其色赤，故稱紅芪，主產(chǎn)于甘肅，效同黃芪，臨床常將其代替黃芪使用［1］。課題組前期研究［2］表明：紅芪多糖能夠提高脾虛證大鼠胃黏膜的修復(fù)能力。為了進(jìn)一步探討紅芪多糖對(duì)脾虛證大鼠機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用是否有影響，課題組開展了以下研究工作。

1 材料與方法

1．1 動(dòng) 物

Wistar大鼠，SPF級(jí)，雄性，鼠齡 80～100 d，體質(zhì)量(200±10)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為：SCXK(甘)2011-0001。

1．2 藥品、試劑與儀器

紅芪，選用甘肅宕昌GAP種植基地產(chǎn)紅芪，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室鑒定為多序巖黃芪(Hedysarum polybotrys．hand．-Mazz)的干燥根，等級(jí)優(yōu);大黃，選用甘肅隴南地區(qū)GAP種植基地產(chǎn)大黃，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室鑒定為掌葉大黃(Rheum palmatum)的根，等級(jí)優(yōu)。黃芪多糖，北京美迪克斯生物科技有限公司產(chǎn)品，批號(hào)HD006001;FITC異硫熒光素，甘肅恒興生物科技有限公司產(chǎn)品，批號(hào)F7250-50;［PE］anti-rat CD3a/CD4a/CD8a，甘肅恒興生物科技有限公司產(chǎn)品，批號(hào)85-12-0084-80。D-37520型電動(dòng)高速離心機(jī)，產(chǎn)地德國;BECKMAN COULTER Ppics XL型流式細(xì)胞儀，產(chǎn)地美國。

1．3 藥品的制備

紅芪多糖的制備：將1000 g紅芪飲片加入5000 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，趁熱抽濾;再加入5000 mL水2次煎煮30 min，趁熱抽濾;兩次藥液混合，冷卻后加無水乙醇至含醇量600 g/L，靜置24 h;抽濾，濾液用無水乙醇和乙醚依次沖洗沉淀，沉淀物即為紅芪多糖;60℃烘干備用。1000 g/L大黃水煎液的制備：大黃飲片500 g，加入2500 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，濾渣;2次煎煮;兩次藥液混合，明火直滾至800 mL;將藥液置于60℃水浴鍋內(nèi)，濃縮至500 mL，即為1000 g/L大黃水煎液(每mL含生藥1g)。

1．4 動(dòng)物分組與脾虛證模型的建立

將60只大鼠隨機(jī)分出10只作為空白對(duì)照組正常飼養(yǎng)，其余50只參照文獻(xiàn)［3-4］采用苦寒瀉下法制備脾虛證模型。用1000 g/L大黃水煎液按75 μL/g體質(zhì)量每天灌胃，1 d 2次，連續(xù)42 d。密切觀察大鼠表現(xiàn)。若有食欲不振(食量減少)，消瘦(體質(zhì)量下降)，大便稀溏，肛門污穢，倦怠乏力(懸空拉尾抵抗力減弱)，毛發(fā)不榮，萎靡嗜睡，瞇眼等癥狀，則提示造大鼠脾虛模成功。將造模成功的50只大鼠隨機(jī)分模型對(duì)照組，黃芪多糖高、中劑量組，紅芪多糖高、中劑量組共5組，每組10只。

1．5 用藥方法

參考黃芪多糖注射液臨床滴注用量，將黃芪多糖液配制為10 g/L、5 g/L，按高、中劑量對(duì)黃芪多糖高、中劑量組大鼠分別進(jìn)行灌胃;將紅芪多糖液配制為10 g/L、5 g/L，按高、中劑量對(duì)紅芪多糖高、中劑量組大鼠分別進(jìn)行灌胃。均連續(xù)用藥30 d。

1．6 檢測指標(biāo)

于造模后第2天和用藥30 d后，分別麻醉各組大鼠;采血5 mL，加入抗凝劑，晃動(dòng)試管混勻，靜置10 min;加入 PI染色液0．5 mL混勻;室溫放置5 min;加2．5 mL洗液，3000 r/min 離心 10 min;棄上清;加入熒光標(biāo)記的細(xì)胞因子抗體，混勻，室溫暗處放置30 min。完成孵育后，立即進(jìn)行流式細(xì)胞分析，測定T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)。

1．7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16．0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。組間百分率的比較采用Pearson卡方檢驗(yàn)。以P＜0．05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

模型對(duì)照組中CD3+T、CD4+T細(xì)胞較空白對(duì)照組下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。黃芪多糖、紅芪多糖高劑量組與模型對(duì)照組對(duì)比，CD3+T細(xì)胞計(jì)數(shù)值均上升，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。黃芪多糖高、中劑量組之間對(duì)比，紅芪多糖高、中劑量組之間對(duì)比，CD3+T細(xì)胞含量差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。模型對(duì)照組CD4+T/CD8+T比值較空白對(duì)照組下降，黃芪多糖高、中劑量及紅芪多糖高、中劑量組CD4+T/CD8+T比值較模型對(duì)照組上升，但差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見表1。

表1 各組T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)對(duì)比 %

3 討論

人體正氣虛損是導(dǎo)致各類疾病產(chǎn)生的重要因素。脾胃為后天之根本，脾胃功能與機(jī)體正氣的生成有著密切的關(guān)系。脾虛證患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降，免疫調(diào)節(jié)失衡，以致機(jī)體抗病能力降低［5］。有研究證實(shí)：脾虛證大鼠胃黏膜的損傷指數(shù)明顯高于正常對(duì)照組［6］。有學(xué)者研究表明：惡性腫瘤伴脾虛證患者免疫調(diào)節(jié)異常主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞為中心的細(xì)胞免疫功能低下［7］，脾虛證模型存在免疫功能的受損及T細(xì)胞亞群調(diào)節(jié)功能的紊亂［8］。本研究結(jié)果顯示脾虛證大鼠血中CD3+T、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)下降，CD4+T/CD8+T比值下降，提示脾虛證大鼠機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，抗病能力低下;各藥物組與模型對(duì)照組對(duì)比，CD3+T、CD4+T細(xì)胞值上升，CD4+T/CD8+T比值上升，提示紅芪多糖在一定程度上能夠改善脾虛證大鼠的免疫功能。

［1］中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所．中藥志［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：195．

［2］萬生芳，張麗萍，張艷，等．紅芪多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性脾虛大鼠胃黏膜中 TNF-α、COX-2表達(dá)的影響［J］．中醫(yī)研究，2011，24(11)：13-17．

［3］周永生，樊雅莉，陳小野，等．脾氣虛證動(dòng)物模型規(guī)范化的初步研究［J］．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2003，20(2)：1-5．

［4］陳奇．中藥藥理研究方法學(xué)［M］．3版．北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1023．

［5］田佳鑫．三種脾虛泄瀉證模型大鼠消化系統(tǒng)功能改變的比較［J］．中國臨床康復(fù)，2006，10(39)：129-131．

［6］尹光耀．脾虛證胃病胃黏膜亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其微量元素、DNA研究的臨床意義［J］．中國中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志，1996，4(1)：10-15．

［7］黃明宜，申虹．惡性腫瘤脾虛證患者T淋巴細(xì)胞亞群分布與脾虛證的關(guān)系［J］．中國誤診學(xué)雜志，2002，2(8)：1148-1149．

［8］王洪海，謝鳴．復(fù)合病因造模法致脾虛證大鼠模型在免疫系統(tǒng)方面的變化［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(12)：41-45．