莫耀南，翟仙敦，呂 宙，官 玲,周海梅，李 樸，馬錦琦

在實(shí)際案件中，腐敗尸體、特別是白骨化尸體的死亡時(shí)間確定尚沒有一個(gè)行之有效的方法。而運(yùn)用昆蟲生長發(fā)育規(guī)律推斷死后經(jīng)歷時(shí)間(postmortem interval，PMI)，不失為一種有效的方法。一些法醫(yī)昆蟲學(xué)者發(fā)現(xiàn)某些藥(毒)物可以影響嗜尸性昆蟲的生長發(fā)育規(guī)律，因此有必要對(duì)這類中毒的尸體上昆蟲的生長發(fā)育規(guī)律的改變進(jìn)行研究，從而得出更加準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)。氯胺酮是娛樂場所濫用藥物，因吸食過量或因幻覺導(dǎo)致意外致死的案例屢見報(bào)道[1]。本研究以我國夏季絕對(duì)優(yōu)勢(shì)蠅種大頭金蠅為研究對(duì)象，探討氯胺酮對(duì)大頭金蠅生長發(fā)育的影響，旨在為法醫(yī)昆蟲毒理學(xué)提供基礎(chǔ)性資料。

1 材料與方法

1.1主要試劑鹽酸氯胺酮注射液(江蘇恒瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：KH091204)，SKF525A(丙基解痙素，內(nèi)標(biāo))，醫(yī)用瓊脂粉，XA液(二甲苯50 mL、95%乙醇50 mL)，Hood氏液(75%乙醇95 mL、甘油5 mL)。

1.2主要儀器設(shè)備AL104電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)，外徑千分尺(分度值0.01 mm，測(cè)量范圍0～25 mm，上海工具廠有限公司)，SK-C臺(tái)式放大鏡(10×，廣東省東莞市加合科技有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)蠅種封閉群的建立本實(shí)驗(yàn)中育種用大頭金蠅源于洛陽地區(qū)當(dāng)?shù)胤N群。在河南科技大學(xué)校園內(nèi)利用新鮮豬肝誘使雌蠅產(chǎn)卵后，將蠅卵置入恒溫室內(nèi)，待其孵化后篩選發(fā)育良好的幼蟲連續(xù)飼育3代。以第3代成蠅所產(chǎn)的部分卵(第4代)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4急性中毒模型的建立根據(jù)毒理學(xué)資料[2-3]換算，體質(zhì)量70 kg的成年人靜脈注射氯胺酮的LD50約為2.8 g，即40 mg/kg體質(zhì)量，而口服氯胺酮的LD50約為4.2 g，即60 mg/kg體質(zhì)量。為方便試劑取用及計(jì)算，本實(shí)驗(yàn)中以50 mg/kg體質(zhì)量為人類LD50標(biāo)準(zhǔn)。本研究參考O’Brien與Oliveira[4-5]的急性中毒模型，并加以改進(jìn)。制成4個(gè)濃度(0，1/2LD50，LD50，2LD50)的培養(yǎng)基，依此標(biāo)記為K0、K1、K2、K3，置入4℃冰箱內(nèi)備用。

1.5幼蟲的飼養(yǎng)在室溫下用新鮮豬肝誘使育種組成蠅產(chǎn)卵，記錄產(chǎn)卵時(shí)間。將不同成蟲所產(chǎn)卵塊均分為4份，每份約400枚卵，保證每個(gè)實(shí)驗(yàn)組均含有來自不同成蟲的卵。將4份卵塊分別接種至標(biāo)記為K0、K1、K2、K3的培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基置入鋪墊有薄層沙土的培養(yǎng)箱中，將培養(yǎng)箱置入恒溫室內(nèi)。恒溫室內(nèi)的環(huán)境溫度為(28±1)℃，相對(duì)濕度為75%±10%，光周期為12 h∶12 h。觀察記錄蠅卵孵化的時(shí)間、幼蟲離食的時(shí)間及幼蟲化蛹的時(shí)間。

1.6樣本的采集與測(cè)量幼蟲孵出后16 h開始取樣，此后每隔12 h留取一次樣本直至幼蟲化蛹。每實(shí)驗(yàn)組每次隨機(jī)留取10只幼蟲，將其浸入XA液中5 min。待幼蟲體節(jié)完全伸展后，將其取出并轉(zhuǎn)移到Hood氏液中保存待測(cè)。測(cè)量時(shí)取出幼蟲，吸干表面水分后分別測(cè)量體長及稱質(zhì)量，并分組記錄每個(gè)樣本的體長及體質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1氯胺酮對(duì)幼蟲體長的影響通過觀察發(fā)現(xiàn)，40 h前，K1、K2、K33組平均體長均顯著小于對(duì)照組K0，3組處理組間未見明顯劑量—體長相關(guān)性(圖1)。K0、K1、K2、K3各組最大體長分別出現(xiàn)在第64、76、76、76 h，K2組最大體長顯著大于K3組，K0、K1、K2組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，K0、K1、K3組間也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表1)。在達(dá)到最大體長前，K1、K2、K33組大頭金蠅幼蟲的平均體長增長速度分別較K0組下降了16.4%、14.8%、16.8%。

圖1 取食含不同濃度鹽酸氯胺酮飼料的大頭金蠅幼蟲平均體長變化曲線

表1 取食含不同濃度鹽酸氯胺酮飼料的大頭金蠅幼蟲的平均體長

括號(hào)內(nèi)為標(biāo)準(zhǔn)差，其后若為同一字母表示無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖2 取食含不同濃度鹽酸氯胺酮飼料的大頭金蠅幼蟲平均體質(zhì)量變化曲線

2.2氯胺酮對(duì)幼蟲體質(zhì)量的影響在76 h前，K1、K2、K3各組平均體質(zhì)量一直小于對(duì)照組K0，64 h后開始大于K0，3組處理組間未見明顯劑量—體質(zhì)量相關(guān)性(圖2)。K0組、K1組、K2組、K3組最大體質(zhì)量分別出現(xiàn)在第64、76、76、88 h，K1組與K3組最大體質(zhì)量顯著小于K0組與K2組，而K1與K3組間、K0與K2組間無顯著差異(表2)。在達(dá)到最大體質(zhì)量前，K1、K2、K33組幼蟲的平均體質(zhì)量增長速度分別較K0組下降了21.7%、14.1%、33.0%。

表2 取食含不同濃度鹽酸氯胺酮飼料的大頭金蠅幼蟲的平均體質(zhì)量

括號(hào)內(nèi)為標(biāo)準(zhǔn)差，其后若為同一字母表示無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

3 討論

在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，PMI推斷一直是命案偵破的重點(diǎn)和難點(diǎn)。運(yùn)用法醫(yī)昆蟲學(xué)研究的成果和技術(shù)方法推斷晚期死亡時(shí)間，大大提高了死亡時(shí)間推斷的準(zhǔn)確性。一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)某些毒物或藥物可能在昆蟲體內(nèi)蓄積并影響它們的生長發(fā)育[6-9,4]。因此有必要通過觀察藥/毒物對(duì)嗜尸性昆蟲的生長發(fā)育影響，協(xié)助法醫(yī)進(jìn)行死亡時(shí)間推斷。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，氯胺酮對(duì)大頭金蠅的平均體長增長速度以及最大體長出現(xiàn)時(shí)間均有顯著影響，但其對(duì)大頭金蠅幼蟲的最大體長的影響未觀察到一致性結(jié)果。K1、K2、K33組幼蟲平均體長在達(dá)到最大值前的大部分時(shí)間內(nèi)都小于K0組，且最大體長出現(xiàn)時(shí)間較對(duì)照組延遲了12 h。

氯胺酮對(duì)大頭金蠅幼蟲的平均體質(zhì)量增長速度及最大體質(zhì)量出現(xiàn)時(shí)間也均有影響。與對(duì)照組相比， K1、K2、K33組幼蟲平均體質(zhì)量增長速度分別下降了21.3%、19.7%、25.6%。這種抑制作用的程度與氯胺酮濃度梯度間未觀察到明顯相關(guān)性。該結(jié)果與氯胺酮對(duì)大頭金蠅幼蟲體長的增長速度的抑制作用表現(xiàn)不完全一致。這表明，大頭金蠅幼蟲的體長與體質(zhì)量的增長并不完全平行。K1、K2、K33組大頭金蠅幼蟲平均體質(zhì)量在達(dá)到最大值前的大部分時(shí)間內(nèi)都小于對(duì)照組，且最大體質(zhì)量出現(xiàn)平均時(shí)間較對(duì)照組延遲了16 h。

綜上分析，氯胺酮能顯著抑制大頭金蠅幼蟲體長及體質(zhì)量的增長速度。與對(duì)照組相比，處理組最大體長及最大體質(zhì)量均未見一致性差異，但達(dá)到最大體長及最大體質(zhì)量的時(shí)間均顯著延遲，并相應(yīng)延長了整個(gè)幼蟲期。這與一些學(xué)者使用其他藥物對(duì)大頭金蠅的研究[5]一致。對(duì)此可以認(rèn)為：不同劑量的氯胺酮對(duì)大頭金蠅幼蟲體長和體質(zhì)量的增長速度存在顯著影響，但不能確定劑量—體長、劑量—體質(zhì)量的線性相關(guān)性。需要指出，本實(shí)驗(yàn)直接采用了不同劑量的氯胺酮人工培養(yǎng)基而沒有經(jīng)過肝臟系統(tǒng)代謝，可能會(huì)影響大頭金蠅幼蟲體內(nèi)藥物的有效性和代謝，同時(shí)，由于采用室內(nèi)恒溫環(huán)境培養(yǎng)，與自然環(huán)境生長發(fā)育也存在差異。

本研究表明，在溫度一定情況下，氯胺酮對(duì)大頭金蠅幼蟲生長發(fā)育速度有明顯抑制，從而導(dǎo)致此類命案實(shí)際PMI推斷出現(xiàn)偏差，得出錯(cuò)誤死亡時(shí)間的推斷結(jié)果。

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