陳 蓉,余文靜,指 導(dǎo):李著華
(瀘州醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,四川 瀘州 646000)
中醫(yī)學(xué),在幾千年的實(shí)踐中被繼承發(fā)展,對(duì)人類的健康甚至歷史的演進(jìn)做出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。但是隨著生命科學(xué)的發(fā)展,人體生命活動(dòng)的客觀規(guī)律被越來(lái)越多的揭示,中醫(yī)理論的主觀性與神秘性阻礙了中醫(yī)學(xué)向全世界范圍的傳播和發(fā)展。如何用客觀的西醫(yī)檢測(cè)指標(biāo)來(lái)反映中醫(yī)理論,使中醫(yī)與西醫(yī)找到客觀的物質(zhì)結(jié)合基礎(chǔ),使傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論客觀化更容易被客觀接受和傳承,一直是醫(yī)學(xué)界孜孜不倦研究的課題。陰陽(yáng)平衡學(xué)說(shuō)是中醫(yī)學(xué)理論的基礎(chǔ),中醫(yī)辨證候,無(wú)不先辨陰陽(yáng);而氧化還原態(tài)(Redox status)平衡是內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的基礎(chǔ),西醫(yī)則處處從內(nèi)環(huán)境的改變探討病情的發(fā)展。陰陽(yáng)平衡與氧化還原態(tài)平衡是否相關(guān)??jī)煞N平衡狀態(tài)的評(píng)價(jià)指標(biāo)是什么?本文擬從以下幾方面進(jìn)行闡述。
陰陽(yáng)是由中國(guó)古代樸素的唯物主義哲學(xué)發(fā)展而來(lái),指導(dǎo)中醫(yī)辨證理論。陰陽(yáng)平衡是中醫(yī)學(xué)理論的基礎(chǔ)與核心,“陰陽(yáng)者,天地之道也,萬(wàn)物之綱紀(jì),變化之父母,生殺之本始,神明之府也,治病必求于本?!保ā端貑?wèn)·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》)。陰陽(yáng)平衡的含義是臟腑平衡、寒熱平衡及氣血平衡。實(shí)質(zhì)是陽(yáng)氣與陰精(精、血、津、液)的平衡,即人體各種功能與物質(zhì)的協(xié)調(diào)。陰陽(yáng)是自然界的根本規(guī)律,生命就是人體陰陽(yáng)對(duì)立雙方的對(duì)立統(tǒng)一運(yùn)動(dòng),人體各種生理病理變化都是陰陽(yáng)運(yùn)動(dòng)變化的結(jié)果,陰陽(yáng)運(yùn)動(dòng)變化的根本在于平衡?!瓣幤疥?yáng)秘,精神乃治”(《黃帝內(nèi)經(jīng)》)。人體陰陽(yáng)運(yùn)動(dòng)是處在動(dòng)態(tài)的平衡之中的,維護(hù)陰陽(yáng)平衡,守之則健,失之即病。如果這種平衡受損到一定程度,就會(huì)“陰陽(yáng)離決,精氣乃亡”。因而人體陰陽(yáng)對(duì)立統(tǒng)一運(yùn)動(dòng)的平衡與否,決定了人體的健康與疾病,成為了辨證論治的重要原則,正如《素問(wèn)·至真要大論》說(shuō):“善診者,察色按脈,先辨陰陽(yáng)。”“謹(jǐn)察其陰陽(yáng)所在而調(diào)之,以平為期。”
陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)抽象地闡明了生命的起源和本質(zhì)、人體的生理功能、病理變化、疾病的診斷和防治的根本規(guī)律,陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)貫穿于中醫(yī)的理、法、方、藥理論中,一直有效地指導(dǎo)著中醫(yī)臨床實(shí)踐。但是,陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)因其抽象性和對(duì)證候評(píng)判的主觀性,已阻礙了中醫(yī)向世界范圍的傳承和發(fā)展,已不能與生命科學(xué)的發(fā)展相適應(yīng)。中醫(yī)和西醫(yī)必須結(jié)合在一起,用客觀指標(biāo)反映中醫(yī)理論,中西醫(yī)貫通真正為人類健康謀福祉,正如名中醫(yī)祝未菊先生所言:術(shù)無(wú)中西,真理是尚;醫(yī)無(wú)中西,殊途同歸。為此,國(guó)內(nèi)外學(xué)者為陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)的客觀化作了不少研究,涉及到人體各系統(tǒng)、細(xì)胞內(nèi)外離子狀態(tài)及基因水平的變化等,如:腎陽(yáng)虛證候與下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸的功能減退有關(guān);脾虛證與消化系統(tǒng)功能減退有關(guān);心火旺證與交感神經(jīng)過(guò)渡亢奮,交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)興奮,兒茶酚胺類物質(zhì)過(guò)渡釋放有關(guān);陰陽(yáng)失調(diào)模型小鼠的Th1/Th2類細(xì)胞因子表達(dá)呈抑制狀態(tài),IFN-γ表達(dá)的抑制程度不同,Th1類細(xì)胞因子IFN-γ的表達(dá)處于相對(duì)優(yōu)勢(shì)[1]。
但是,現(xiàn)有關(guān)于陰陽(yáng)的研究無(wú)一能闡明陰陽(yáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)到底是什么?人體內(nèi)最基本的具有“陰陽(yáng)互根”屬性的物質(zhì)是什么?怎樣用客觀指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)?這可能還要從中醫(yī)和西醫(yī)對(duì)人體基本生命過(guò)程描述的相似性來(lái)研究,理清中西醫(yī)結(jié)合的物質(zhì)基礎(chǔ)。陰陽(yáng)平衡實(shí)質(zhì)是機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的另一種表述[2],而氧化還原態(tài)平衡是機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基本內(nèi)涵之一,陰陽(yáng)平衡與氧化還原態(tài)平衡是否有聯(lián)系?氧化還原態(tài)指標(biāo)能否反映陰陽(yáng)平衡狀態(tài)?目前尚無(wú)研究。
需氧生物細(xì)胞對(duì)氧的代謝利用,每時(shí)每刻都會(huì)產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)活潑的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)與活性氮(Reactive nitrogen species,RNS),ROS和RNS很容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用。當(dāng)體內(nèi)產(chǎn)生的ROS和RNS過(guò)多,超過(guò)機(jī)體的清除能力,和/或機(jī)體抗氧化能力下降,ROS和RNS將對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞性修飾。目前研究表明,ROS和RNS對(duì)靶蛋白的氧化還原修飾方式主要有:可逆性巰基/二硫鍵轉(zhuǎn)換、谷胱甘肽化和S-亞硝基化等。蛋白質(zhì)上的半胱氨酸殘基和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)形成混合型二硫鍵,蛋白質(zhì)的這種修飾方式稱作谷胱甘肽化。這種氧化修飾可能是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控中的一種新的分子機(jī)制,成為除磷酸化修飾、糖基化修飾及泛素化修飾外的重要方式[3]。ROS導(dǎo)致組織細(xì)胞產(chǎn)生氧化性損傷(Oxidative damage)的病理過(guò)程,稱為氧化應(yīng)激(Oxidative Stress,OS)[4~6]。 反之,因氧化不足,還原產(chǎn)物蓄積,也可造成還原應(yīng)激[7~8]。需氧生物體內(nèi)有效的抗氧化系統(tǒng),主要為酶類與非酶類抗氧化劑。酶類包括有超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)以及谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶(Glutathione S-transferase,GST)等等。非酶類抗氧化劑主要提供還原當(dāng)量的各種脂溶性、水溶性化合物,主要包括有谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、硫氧還蛋白(Thioredoxin,TRX)、胡蘿卜素以及維生素C和維生素E。
機(jī)體自身對(duì)于氧化應(yīng)激具有非常強(qiáng)大的防御、拮抗能力,兩者的平衡構(gòu)成了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的一個(gè)重要穩(wěn)態(tài)機(jī)制,稱為氧化還原態(tài)(Redox status,REDST)。機(jī)體在氧化-抗氧化間維持相對(duì)恒定的氧化還原狀態(tài),以維持機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[9]。對(duì)于細(xì)胞而言,氧化還原狀態(tài)發(fā)生變化后,對(duì)細(xì)胞膜以及細(xì)胞內(nèi)分子所產(chǎn)生的氧化或還原作用,引起結(jié)構(gòu)和構(gòu)象改變,在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄等過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控功能。氧化還原態(tài)失衡可以影響到基因的轉(zhuǎn)錄,細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo),酶和生物大分子的活性,細(xì)胞和器官的功能,以及細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、壞死等許多生理病理過(guò)程[10]。因此,氧化還原是決定細(xì)胞生存狀態(tài)的重要因素,健康的機(jī)體應(yīng)保持一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的氧化還原平衡狀態(tài)。
氧化還原對(duì)是機(jī)體內(nèi)能夠通過(guò)提供或接受還原當(dāng)量的方式交換電子的一類成對(duì)分子。其通過(guò)自身還原型與氧化型的轉(zhuǎn)變,起到類似緩沖劑的作用,避免過(guò)多氧化劑或還原劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的直接作用。此外,由于氧化還原對(duì)是直接應(yīng)對(duì)細(xì)胞內(nèi)外氧化還原狀態(tài)變化的物質(zhì),因而,其比例變化是反映氧化還原狀態(tài)的可靠指標(biāo)。
體內(nèi)主要的氧化還原對(duì)是谷胱甘肽還原型/氧化型(GSSG/GSH)和輔酶Ⅱ(NADPH/NADP+),各種細(xì)胞中都存在極高水平的 GSH,濃度在0.1~1mmol/L之間,GSH占細(xì)胞內(nèi)非蛋白質(zhì)硫總量的90%以上,而在肝臟中,GSH占總自由巰基的95%。GSH是體內(nèi)廣泛存在的非常重要的氧化還原緩沖系統(tǒng),參與多種生理功能:GSH-Px酶系統(tǒng)能對(duì)ROS代謝的毒素進(jìn)行解毒,從而防止ROS進(jìn)一步損傷細(xì)胞;GSH可以與攝入體內(nèi)的異物毒素結(jié)合,以硫醚氨酸的形式排出體外,而達(dá)到解除異物毒素的功能;GSH還可以直接或間接提供還原當(dāng)量給維生素C、E、α-硫辛酸等,使蛋白巰基維持與合適的氧化還原狀態(tài),從而穩(wěn)定和保護(hù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。通過(guò)巰基(-SH)和二硫鍵(-S-S-)形式的轉(zhuǎn)換,使蛋白質(zhì)改變細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)功能的調(diào)控[11~13]。GSH 缺 乏 或 GSH/GSSG、Eh(GSH /GSSG)向氧化方向偏移可引起氧化應(yīng)激反應(yīng),使許多信號(hào)分子活化產(chǎn)生損傷效應(yīng)。體內(nèi)GSH水平對(duì)機(jī)體遭受氧化應(yīng)激特別敏感,比如早期神經(jīng)退行性疾病早期還未檢測(cè)到明顯氧化損傷代謝產(chǎn)物標(biāo)志時(shí),即可出現(xiàn) GSH 水平減低[14]。
GSH水平在氧化應(yīng)激時(shí)會(huì)降低,在非氧化應(yīng)激事件也會(huì)降低[15~16],此外ROS還可誘導(dǎo)GSH合成而引起循環(huán)血液中GSH水平增高,因此單純測(cè)定血漿中GSH濃度不足以反映機(jī)體氧化還原態(tài)。氧化應(yīng)激反應(yīng)時(shí)GSH濃度降低,GSSG濃度增高,導(dǎo)致GSH/GSSG比值降低,因而可以利用Nernst方程計(jì)算GSH/GSSG 的氧化還原電位值 (Eh(GSH/GSSG))來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體氧化-抗氧化的動(dòng)態(tài)平衡。在每一分子GSH氧化還原反應(yīng)中,涉及2個(gè)電子傳遞,1分子GSSG還原成2分子GSH,因此GSH/GSSG比值并不是反映氧化還原態(tài)變化的最佳指標(biāo)。研究[17]顯示Eh(GSH/GSSG)比GSH/GSSG比值更重要,因?yàn)镋h(GSH/GSSG)考慮到了2GSH←→GSSG這一化學(xué)計(jì)量關(guān)系,而且Eh(GSH/GSSG)可定量表示GSH/GSSG獲得或失去電子的趨勢(shì)。綜上,GSH 濃 度、GSSG 濃 度、GSH/GSSG 比 值、Eh(GSH/GSSG)四個(gè)指標(biāo)可能更有效評(píng)價(jià)機(jī)體氧化還原狀態(tài)的改變。
輔酶Ⅱ是體內(nèi)許多還原酶的重要輔助因子,在體內(nèi)許多代謝反應(yīng)中發(fā)揮遞氫作用,其在體內(nèi)有兩種形式:氧化型(NADP+)和還原型(NADPH)構(gòu)成了重要的氧化還原對(duì)。機(jī)體氧化損傷機(jī)制同樣受到NADP+/NADPH氧化還原狀態(tài)的調(diào)節(jié),選擇NADPH/NADP+作為氧化還原態(tài)指標(biāo)是因?yàn)樵撗趸€原對(duì)是維持GSH/GSSG平衡的關(guān)鍵因素,NADPH為谷胱甘肽的氧化還原提供還原當(dāng)量,以維持GSH/GSSG正常的氧化還原狀態(tài),從而保護(hù)一些含巰基蛋白質(zhì)及酶免受氧化劑損傷,GSH的消耗須由NADPH遞氫、經(jīng)GSH還原酶(GSH reductase)催化重新生成。所以在測(cè)定血漿GSH的基礎(chǔ)上再測(cè)定輔酶Ⅱ的含量,有助于進(jìn)一步了解機(jī)體的氧化還原狀態(tài)。
首先,二者從不同角度反映了人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要性。內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是指正常機(jī)體在神經(jīng)、體液的調(diào)節(jié)下,在不斷變化的內(nèi)外環(huán)境因素作用下,能夠保持各系統(tǒng)機(jī)能和代謝的正常進(jìn)行,維持內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定性。中醫(yī)雖然沒(méi)有直接使用“內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)”這一術(shù)語(yǔ),但其陰陽(yáng)平衡的理論中卻處處體現(xiàn)了內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的作用。中醫(yī)穩(wěn)態(tài)觀見(jiàn)于以下幾個(gè)重要方面:①臟腑之間的平衡,如心與腎能量的相互交濟(jì),肺降肝升,脾升胃降,肝疏泄腎封藏等,均屬陰陽(yáng)平衡概念范疇。每一內(nèi)臟本身兩種力量的平衡,如肺之宣與肅,腎之陰與陽(yáng)等,肺宣肅功能正常,衛(wèi)表協(xié)調(diào),腠理致密,則不會(huì)患病。②水與火的平衡,人體生理之火屬陽(yáng),精血津液屬陰,二者的相對(duì)平衡在維持生命活動(dòng)及體溫方面有著極為重要的作用。③氣血的平衡,氣屬陽(yáng),血屬陰。這是從人體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)劃分,即屬陽(yáng)的氣體物質(zhì)和屬陰的液態(tài)物質(zhì)的平衡。正是以上平衡基礎(chǔ),才能使人體“精神乃治”,“治”即是生命活動(dòng)正常之義。人體正常生命活動(dòng)形式,內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,是體內(nèi)陰陽(yáng)相對(duì)平衡的結(jié)果[18]。
而機(jī)體氧化還原態(tài)平衡本身就是人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的內(nèi)容之一。正常機(jī)體在神經(jīng)和體液因素的調(diào)節(jié)下,在不斷變動(dòng)的內(nèi)外環(huán)境因素作用下,能夠保持各系統(tǒng)機(jī)能和代謝的正常進(jìn)行,維持內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定性,就是內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是美國(guó)生理學(xué)家Walter Bradford Cannon對(duì)法國(guó)著名生理學(xué)家Claud Bernard提出的內(nèi)環(huán)境進(jìn)一步深化與擴(kuò)展,闡明了內(nèi)環(huán)境是一種可變的但又相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài),并且用“穩(wěn)態(tài)”表達(dá)了內(nèi)環(huán)境相對(duì)恒定現(xiàn)象及其中的調(diào)節(jié)過(guò)程。人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,包括人體、細(xì)胞與內(nèi)環(huán)境之間,內(nèi)環(huán)境與外環(huán)境之間不斷進(jìn)行的物質(zhì)交換的平衡,涉及內(nèi)容廣泛,如酸堿平衡,水、電解質(zhì)平衡,體溫的相對(duì)恒定,器官、組織、細(xì)胞以及大分子物質(zhì)水平的動(dòng)態(tài)平衡,交感副交感神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)器官功能的調(diào)節(jié)等。諸多穩(wěn)態(tài)平衡,基本都與體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)的氧化還原平衡密切相關(guān),而中醫(yī)則用陰陽(yáng)平衡來(lái)高度概括。
其次,二者都具有“互根”的特點(diǎn)。陰陽(yáng)雙方相互依存,互為根本的關(guān)系即陰陽(yáng)互根,陰陽(yáng)的互根是陰陽(yáng)的基本關(guān)系之一。陰或陽(yáng)任何一方都是以其對(duì)方的存在作為自己存在的前提和條件,任何一方都不能脫離對(duì)方而單獨(dú)存在,即“無(wú)陽(yáng)則陰無(wú)以生,無(wú)陰則陽(yáng)無(wú)以化”(《黃帝內(nèi)經(jīng)》)。除此之外,陰和陽(yáng)在發(fā)揮作用上,也是相互依賴的。人體的物質(zhì)與功能之間,功能屬陽(yáng),物質(zhì)屬陰,人體功能的發(fā)揮,必須以人體的物質(zhì)為基礎(chǔ);而人體物質(zhì)的化生及代謝,又離不開(kāi)人體的功能活動(dòng)。陰陽(yáng)這種互根的特點(diǎn),在機(jī)體氧化還原態(tài)上也有相似的表現(xiàn)。一個(gè)物質(zhì)的氧化必伴有另一物質(zhì)的還原,過(guò)多地偏離平衡態(tài)的氧化或還原性物質(zhì)終會(huì)促進(jìn)別的物質(zhì)被氧化或被還原,而自身則被還原或被氧化。氧化與還原處于一個(gè)對(duì)立的有機(jī)體中,沒(méi)有還原就沒(méi)有氧化,沒(méi)有氧化則無(wú)所謂還原,只有這樣才能維持機(jī)體的健康。
其三,二者的平衡都是動(dòng)態(tài)的平衡。不論是中醫(yī)陰陽(yáng)平衡還是西醫(yī)的氧化還原態(tài)平衡,都不是一成不變的,而是一種動(dòng)態(tài)的平衡。中醫(yī)認(rèn)為“陰陽(yáng)平衡,天人相應(yīng)”為健康。一個(gè)健康人的陰陽(yáng)在某一時(shí)刻也不是完全平衡的,因?yàn)槭茏匀唤珀庩?yáng)二氣的影響,早晨的陽(yáng)氣相對(duì)較重,晚上陰氣相對(duì)較重,但是,縱觀一天的情況,陰陽(yáng)是基本處于平衡狀態(tài)的。同理,機(jī)體的氧化和還原當(dāng)量在某一時(shí)刻也不是完全相等,只要從整體而言,某一時(shí)間范圍而言,氧化和還原是大致相等的,機(jī)體的氧化還原態(tài)是平衡的。
綜上所述,中醫(yī)陰陽(yáng)平衡和機(jī)體氧化還原態(tài)平衡有著許多共同點(diǎn),通過(guò)比較健康人群和臨床上各種陰陽(yáng)失衡患者的氧化-還原態(tài)指標(biāo),探討陰陽(yáng)平衡態(tài)與氧化-還原態(tài)之間的關(guān)系,這在技術(shù)上是可行的?;钴S的氧化-還原反應(yīng)伴隨的電子轉(zhuǎn)移是自由基產(chǎn)生的重要來(lái)源。因此,機(jī)體的氧化-還原態(tài)無(wú)論是向氧化過(guò)強(qiáng)方向偏移、或是向還原過(guò)強(qiáng)方向偏移都會(huì)對(duì)機(jī)體造成損害。而現(xiàn)有關(guān)于陰盛陽(yáng)虛或陽(yáng)亢陰虛的一些研究報(bào)告中,由于尚未關(guān)注到氧化-還原平衡的問(wèn)題,報(bào)導(dǎo)大多認(rèn)為多種證候都為氧化增強(qiáng)、氧自由基損傷的表現(xiàn),導(dǎo)致在臨床實(shí)踐中,有的病癥給予抗氧化劑效果不明顯,這也應(yīng)證了陰陽(yáng)失衡不總是氧化損傷,還可能存在還原應(yīng)激。因此,理清陰陽(yáng)失衡證候與氧化還原之間的關(guān)系,從而對(duì)中醫(yī)理論客觀化,陰陽(yáng)本質(zhì)的認(rèn)識(shí),中醫(yī)診斷、治療及藥物研究等都具有重要價(jià)值。
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