邵明亮 張巍 王偉群

常見女性的惡性腫瘤中，乳腺癌近幾年的發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)。尤其是我國(guó)主要大型都市乳腺癌發(fā)病率為81/10萬(wàn)，比十年前增長(zhǎng)了4.28倍［1］。病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)乳腺上皮細(xì)胞在多種致癌因子作用下，基因突變，細(xì)胞發(fā)生病理轉(zhuǎn)化。對(duì)于乳腺癌發(fā)病機(jī)理、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因及其蛋白標(biāo)志物的檢測(cè)一直是一個(gè)研究的熱點(diǎn)。趨化因子(CXCL)及其受體可激活或抑制上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管生成及遷移，和多種腫瘤疾病中修復(fù)組織損傷密切相關(guān)［2］。本研究探討CXCL5與乳腺癌發(fā)生和進(jìn)展的關(guān)系，觀察CXCL5臨床診斷價(jià)值。

1 臨床資料

收集2010～2011年佳木斯大學(xué)第五臨床醫(yī)院手術(shù)患者中，經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌組織標(biāo)本共51例，乳腺纖維瘤組織標(biāo)本20例。乳腺癌患者皆為女性，中位年齡50歲，術(shù)前均未行放化療。

2 材料與方法

2.1 主要試劑 免疫組化試劑盒購(gòu)自晶美生物技術(shù)有限公司，鼠抗人CXCL5單克隆抗體購(gòu)自北京天根生化科技有限公司，各種國(guó)產(chǎn)試劑為分析純級(jí)。

2.2 SABC免疫組織化學(xué)染色法

2.2.1 脫蠟和水化 脫蠟前將組織在室溫中放置60 min，依次按常規(guī)經(jīng)二甲苯，無(wú)水乙醇中，95%乙醇，70%乙醇中浸泡水化。

2.2.2 微波熱修復(fù) 在微波爐里加熱0.01 m枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)至沸騰后將組織放入，斷電，間隔5～10 min，反復(fù)1～2次。

表1 不同組織類型之間CXCL5比較

2.2.3 免疫組織化學(xué)染色 PBS洗2～3次各3 min;滴加5%BSA封閉液，室溫20 min。甩去多余液體不洗。滴加Ⅰ抗50 μl，37℃1 h。PBS洗3次各3 min;滴加生物素化Ⅱ抗40 ～50 μl，37℃20 min;PBS洗 4次各 5 min;DAB 顯色 5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度;PBS沖洗10 min;蘇木素精復(fù)染2 min，鹽酸酒精分化;脫水、透明、封片、鏡檢。

2 結(jié)果

表2 乳腺癌組與良性疾病組CXCL5表達(dá)差異

圖1 陰性對(duì)照200倍鏡下

圖2 浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌陽(yáng)性200倍

圖3 乳腺小葉癌陽(yáng)性200倍

3 討論

目前已報(bào)道的趨化因子有47種，與之對(duì)應(yīng)的受體有21種，CXC類趨化因子亞家族包括CXCL1～CXCL16共16個(gè)成員，它們具有相近的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)白細(xì)胞有正向的趨化和激活作用，在機(jī)體防御、抗感染等過(guò)程中起重要作用［3］。CXCL5又名上皮來(lái)源的中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78)，是促血管生成性(ELR+)CXC趨化因子中的一員。

本課題研究了CXCL5表達(dá)強(qiáng)度與乳腺癌惡性度關(guān)系，由不同病理分級(jí)組間比較可見，病理Ⅲ+IV期CXCL5表達(dá)顯著增高，與病理Ⅰ+Ⅱ期比較差異顯著。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例CXCL5表達(dá)增高，與未發(fā)生轉(zhuǎn)移病例比較具有顯著性，說(shuō)明隨著病理浸潤(rùn)的增強(qiáng)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生CXCL5都參與了乳腺癌的惡性生物學(xué)行為，是受癌基因調(diào)節(jié)的環(huán)節(jié)之一。這一結(jié)論與CXCL5在胃癌表達(dá)情況一致，高表達(dá)者細(xì)胞分化程度降低，病理學(xué)分級(jí)、臨床分期的增高［4］，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，因此檢測(cè)CXCL5表達(dá)強(qiáng)度有助于判斷乳腺癌惡性程度及患者的預(yù)后。

同時(shí)比較不同組織類型乳腺癌表達(dá)的差異，可發(fā)現(xiàn)乳腺癌組明顯高于乳腺纖維腺瘤組，具有顯著性，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、乳腺小葉癌、乳腺髓樣癌組間比較不具有顯著性差異。CXCL5促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的可能機(jī)制為CXCL5與其特異性受體(CXCR2)結(jié)合，作用于酪氨酸激酶受體，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、趨化運(yùn)動(dòng)及抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等一系列促進(jìn)腫瘤血管新生的生物學(xué)效應(yīng)。通過(guò)MAPK和PI3 k信號(hào)通路，活化轉(zhuǎn)錄因子(ELK1)，從而激活與腫瘤形成相關(guān)的基因表達(dá)［5］。CXCL5過(guò)表達(dá)可提高乳腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力，并可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生于腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)，促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

CXCL5是乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要成分，與乳腺癌的新生血管形成、基因調(diào)節(jié)通路以及乳腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有效的觀察CXCL5可以有效地診斷、評(píng)估乳腺癌進(jìn)展預(yù)后，同時(shí)也為以干預(yù)CXCL5為條件的抗腫瘤治療提供思路。

［1］Xu YC，Zhang FC，Lin YM.The study on relationship between SNPs of ESR1 gene and endocrine therapy response in breast cancer patients.Breast cancer research(Pre-pub lication)，2005，1(5):20-22.

［2］Zlotuik A，Yoshie O，Nomiyama H.The chemokine and chemokine receptor superfamilies and their molecular evolution.Genome Biol，2006，7(12):243-245.

［3］Miyazaki H，Patel V，Wang H，Growth factor-sensitive Molecular targets identified in primary and metastatic head and neck squamous cell carcinoma using microarray analysis.Oral Oncol，2006，42(3):240-256.

［4］Miyazaki H，Patel V，Wang H，et al.Down-regulation of CXCL5 inhibits squamous carcinogenesis.Cancer Res，2006，66(8):4279-4284.

［5］歐周羅，邵志敏.趨化因子結(jié)合蛋白與乳腺癌.中華乳腺病雜志(電子版)，2011，4(5):396-401