喬 羽，解 穎，白玉賓，王 兵，陳 飛，劉春紅，柳成剛，常佳怡，高恩宇，韓潔茹，姜德友

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，哈爾濱 150040）

糖尿病腎?。―N）是糖尿病的一種嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，其主要病理改變?yōu)槟I小球肥大，基底膜增厚，以及系膜區(qū)基質(zhì)增加，導(dǎo)致彌漫性或結(jié)節(jié)性腎小球硬化。臨床上早期表現(xiàn)為尿中排出微量白蛋白，繼之出現(xiàn)臨床蛋白尿，最后進(jìn)展為慢性腎功能不全。近年來隨著其發(fā)病率和病死率的提高，DN嚴(yán)重地威脅著人類的健康，影響患者的生存質(zhì)量，因此，對(duì)DN的研究已成為世界性醫(yī)學(xué)攻關(guān)課題。由于該病的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，臨床尚無理想藥物，而中醫(yī)藥在防治DN方面頗具優(yōu)勢(shì)，為此筆者借助分子生物學(xué)研究方法，采用基因芯片技術(shù)，利用目前國(guó)際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的美國(guó)Affymetrix公司生產(chǎn)的Rat2302.0基因表達(dá)譜芯片，首先進(jìn)行差異基因篩選，然后進(jìn)一步用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）檢測(cè)，尋找DN相關(guān)基因，探討DN病變機(jī)制，篩選藥效靶點(diǎn)，闡釋中藥復(fù)方腎消康治療DN的作用機(jī)制，為此筆者對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)DN大鼠的腎臟基因表達(dá)譜進(jìn)行了研究。本文僅報(bào)告腎消康對(duì)DN大鼠腎臟組織基因鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白α12（Gna12）表達(dá)的影響。

1 基因芯片實(shí)驗(yàn)

1.1 主要試劑、藥品和儀器 鏈脲佐菌素（STZ）為Calbiochem公司產(chǎn)品；腎消康制成浸膏，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室制備，-20℃的冰箱保存，使用前加溫至37℃。有關(guān)芯片檢測(cè)試劑及儀器，均為上海生物芯片有限公司制備，包括Affymetrix Genechip Scanner2.0、Affymetrix Fluidics Station450、Affymetrix Genechip Hybridization Oven640等。

1.2 動(dòng)物造模及分組 Wistar大鼠120只，雄性，體質(zhì)量180～210 g（由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供），合格證號(hào)：P00102004，分籠飼養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)7只，室溫（18±2）℃，相對(duì)濕度 50%～60%，通風(fēng)良好，每日光照12 h，自由攝食、飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取10只作為空白對(duì)照組，以普通飼料喂養(yǎng)，經(jīng)左下腹注射檸檬酸緩沖液25 mg/kg（pH 4.4），其余大鼠稱質(zhì)量，以25 mg/kg STZ左下腹腔注射，每日上午注射1次，連續(xù)5 d。注射前12 h禁食，不禁水。注射后1 h，大鼠自由飲水、進(jìn)食。造模1周后測(cè)血糖。血糖值在16.7 mmol以上的大鼠共50只，再隨機(jī)分為模型組、西藥對(duì)照組、腎消康高、中、低治療組，各組均10只。各組均喂以高熱量飼料（1%膽固醇、10%豬油、10%蛋黃粉、1%蔗糖、78%為基礎(chǔ)飼料）19周，繼續(xù)喂養(yǎng)普通飼料7周，共喂養(yǎng)26周。

1.3 給藥方法 喂養(yǎng)高熱量飼料19周后，隨機(jī)抽取各組大鼠進(jìn)行病理檢測(cè)，光鏡、電鏡下病理檢測(cè)近似人類糖尿病慢性腎組織損傷的病理變化?？崭狗Q質(zhì)量，按大鼠的體表面積與成人劑量之間的換算關(guān)系計(jì)算給藥量。腎消康治療組給藥量為0.79 g/mL，每200 g體質(zhì)量每次給藥2 mL，每日灌胃1次，空白組、模型組以等量生理鹽水灌胃。

1.4 標(biāo)本采集 以電子秤稱取每只大鼠體質(zhì)量，禁食、水12 h，摘眼球取血，分裝不同試管，4℃保存?zhèn)錂z，以測(cè)肌酐、尿素氮等指標(biāo)。乙醚麻醉后，常規(guī)固定、消毒、鋪布等處理，沿正中線切開腹壁，快速用180℃、12 h處理過的手術(shù)剪刀摘取腎臟、稱質(zhì)量，立即用預(yù)冷的生理鹽水沖洗，沖洗后在冰上操作。將右腎置于4%多聚甲醛固定，供光鏡觀察及免疫組化實(shí)驗(yàn)使用；將1/3左腎置于2.5%戊二醛中固定，以備制做電鏡；將其余2/3左腎置于液氮中凍存以備提取核糖核酸（RNA）使用。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.6 DN大鼠腎臟損傷的生化指標(biāo)及病理變化

1.6.1 血肌酐、血尿素氮的變化 模型組血尿素氮（BUN）水平明顯升高，與空白組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），各治療組較模型組有較大幅度降低（P<0.01），其中西藥對(duì)照組、腎消康高劑量組和中劑量組（P<0.01），腎消康低劑量組（P<0.05），各治療組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；血肌酐（SCr）模型組水平明顯升高，與空白組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），各治療組較模型組有較大幅度降低（P<0.01），各治療組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明腎消康可使血肌酐、血尿素氮的生化指標(biāo)降低。

表1 各組血清 Scr、BUN 水平比較（n=10，±s）Tab.1 Comparison of serum levels of Scr and BUN in three groups（n=10，±s）

表1 各組血清 Scr、BUN 水平比較（n=10，±s）Tab.1 Comparison of serum levels of Scr and BUN in three groups（n=10，±s）

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

組別Scr（μmol/L）BUN(mmol/L)空白組 107.19±13.216.33±1.14模型組 162.66±17.06** 15.78±3.95**西藥對(duì)照組 133.74±16.7## 11.34±2.26##高劑量組 128.80±18.66## 10.95±0.97##中劑量組 121.44±22.48## 10.52±2.17##低劑量組 123.9±21.37## 11.78±3.35#

1.6.2 尿微量白蛋白、β2-微球蛋白的變化 模型組大鼠尿微量白蛋白（Alb）、β2-微球蛋白（β2-MG）排泄量明顯高于空白組（P<0.01），治療組與模型組比較，尿微量白蛋白、β2-微球蛋白排泄量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。提示腎小球和腎小管的結(jié)構(gòu)和功能受損，腎消康能降低尿微量白蛋白、β2-微球蛋白排出量，說明其對(duì)腎臟結(jié)構(gòu)及功能有較好的保護(hù)作用。

表2 各組 24 h Alb，β2-MG 水平比較（n=10，±s）Tab.2 Comparison of Alb and β2-MG levels during 24 h in three groups（n=10，±s）

表2 各組 24 h Alb，β2-MG 水平比較（n=10，±s）Tab.2 Comparison of Alb and β2-MG levels during 24 h in three groups（n=10，±s）

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

組別 Alb（mg/24 h）β2-MG（mg/24 h）空白組 25.68±4.321.47±0.25模型組 70.96±9.52** 3.95±0.78**西藥對(duì)照組 40.25±9.83## 2.62±0.79##高劑量組 36.04±8.80## 2.55±0.70##中劑量組 32.56±8.01## 2.45±0.86##低劑量組 33.52±7.86## 2.51±0.52##

1.6.3 腎臟組織病理及超微結(jié)構(gòu)變化 光鏡下觀察，空白組：大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜厚薄均勻。近曲小管的上皮細(xì)胞較少，胞漿，管腔狹窄而不規(guī)則；遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞較多，胞漿伊紅淡染，管腔寬而規(guī)則，見圖1。模型組：腎小球系膜細(xì)胞增生，基質(zhì)堆積明顯，腎小球肥大，腎小球基底膜增厚，發(fā)生透明樣改變，腎小球與囊壁粘連（滲出性腎小球硬化），小球分葉、分瓣明顯（彌漫性腎小球硬化），趨向纖維化，見圖2、圖3。腎消康中劑量組：少數(shù)腎小球輕微的基底膜增厚，輕微的透明樣變，部分腎小球囊壁增厚，少數(shù)腎小球粘連、有分葉狀，有少數(shù)纖維增生，少數(shù)有局部系膜基質(zhì)增生及輕度的腎小管擴(kuò)張和上皮細(xì)胞脫落，見圖4。

電鏡下觀察，空白組：近端小管上皮細(xì)胞微絨毛密集，胞質(zhì)內(nèi)可見大量圓桿狀線粒體和少量溶酶體，游離蛋白豐富，高爾基復(fù)合體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)。遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞器形態(tài)清晰，系膜細(xì)胞完好，見圖5。模型組：腎小球基膜增厚，足細(xì)胞壞死，濾孔膜溶解，血管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)呈網(wǎng)狀排列。近端腎小管上皮微絨毛溶解脫落，細(xì)胞間連接消失。胞質(zhì)內(nèi)溶酶體數(shù)量增多，線粒體絮狀變。遠(yuǎn)端小管壞死的細(xì)胞質(zhì)膜脫落，質(zhì)膜內(nèi)褶區(qū)可見較多的小空泡，見圖6、圖7。腎消康中劑量組：腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮清晰可見，濾孔膜柵欄狀排列，足細(xì)胞核清晰，部分核呈凋亡狀。近端小管微絨毛脫失、溶解，胞質(zhì)內(nèi)有大量的溶酶體，游離核蛋白體豐富。間質(zhì)血管內(nèi)皮功能活躍，細(xì)胞器數(shù)量增多，見圖8。

圖6 模型組腎臟（電鏡 ×6000）Fig.6 Kidneyofmodelgroup(electron microscope×6000)

圖5 空白組腎臟（電鏡 ×6000）Fig.5 Kidney of blank group(electron microscope×6000)

圖7 模型組腎臟（電鏡 ×6000）Fig.7 Kidney of model group(electron microscope×6000)

圖8 腎消康中劑量組腎臟（電鏡 ×6000）Fig.8 Kidney of Shenxiaokang middle dose group(electron microscope×6000)

1.7 基因芯片實(shí)驗(yàn)方法 從各組大鼠中取腎臟，使用QIAGEN RNA Isolation Kit抽提總RNA，由純化的總RNA合成雙鏈cDNA，經(jīng)PLG提取、乙醇沉淀將雙鏈互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA）純化，用Bio Array High Yield RNA Transcript Labeling Kit方法以生物素標(biāo)記互補(bǔ)核糖核酸（cRNA）合成，QIAGEN Rneasy Columns法體外轉(zhuǎn)錄純化生物素標(biāo)記的cRNA，用分光光度計(jì)分析RNA濃度進(jìn)行質(zhì)控，凝膠電泳檢測(cè)產(chǎn)物，片斷化cRNA，合成cRNA探針。合成好的cRNA探針經(jīng)片段化處理后用于與基因芯片雜交。芯片的雜交、洗脫、染色及檢測(cè)利用Affymetrix公司生產(chǎn)的專用設(shè)備“基因芯片檢測(cè)工作站”進(jìn)行，一切操作過程均按Affymetrix公司推薦的條件進(jìn)行。

1.8 基因芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)的處理 芯片掃描所得數(shù)據(jù)應(yīng)用“Affymetrix Microarray Suite software 5.0”進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

1.9 基因芯片篩選結(jié)果按照比較嚴(yán)格的條件篩選出差異表達(dá)基因，表達(dá)差異2倍以上的基因列表，包括基因名稱、GenBank號(hào)、Uni號(hào)和染色體定位。其中，NM_03 段落tr.1：Gna12即是篩選出的差異表達(dá)基因之一，在DN大鼠腎臟組織表達(dá)下調(diào)，經(jīng)腎消康治療后表達(dá)上調(diào)，見圖9。

灰度掃描圖中采用芯片圖像分析軟件分析芯片灰度掃描圖，得到芯片上每個(gè)基因點(diǎn)的原始信號(hào)值（包括前景信號(hào)值和背景信號(hào)值），從而進(jìn)行差異表達(dá)基因的判定。散點(diǎn)圖中X軸為對(duì)照組信號(hào)值，Y軸為實(shí)驗(yàn)組信號(hào)值，圖中紅色點(diǎn)為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組該基因的Detection均為P，藍(lán)色為兩組中有一個(gè)值不是P，而黃色為兩組均為A。這些點(diǎn)在Affymetrix公司的MASS5.0軟件中可以顯示Probe Set ID。

2 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器 PCR儀，PTC-225 Peltier Thermalcycler， MJ Research Inc.，Waltham，Massachusetts；熒光定量PCR儀，Rotor-Gene RG-3000 Real-Time Thermal Cycler，Corbett Reseach，Sydney，Australia。

DN大鼠腎組織 Gna12的 sense primer、antisense primer、product值如下：sense primer：5’-GGAGAAGGTGAAGTCGGTGAGC-3’，length：22 bp，Tm值：60.30℃。anti-senseprimer：5’-GGCAGTGGTGAAGTGGTGGAAC-3’，length：22 bp，Tm 值：61.30℃。product length:154 bp,product Tm值：92.50℃。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法 本實(shí)驗(yàn)采用Eve green法，使用TAKARA公司的RNA PCR kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒,按照試劑盒提供的反應(yīng)體系進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反轉(zhuǎn)錄體系 10 μL，30℃反應(yīng) 10 min，42 ℃反應(yīng) 30～50 min，95℃加熱5 min，4℃反應(yīng)5 min中止。

利用TAKAR公司的TaKaRa Ex Taq Rt-PCR Version.2.1進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系25μL，反應(yīng)條件95℃ 120秒，95℃ 15秒，60℃ 20秒45個(gè)循環(huán)，72℃20秒中止。

2.3 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR數(shù)據(jù)分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用軟件Rotor-Gene 6.0以及Excel 7.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。

2.4 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果

2.4.1 Gna12的擴(kuò)增曲線 見圖10。

2.4.2 Gna12的標(biāo)準(zhǔn)曲線 見圖11。

2.4.3 Gna12的擴(kuò)溶解曲線 見圖12。

2.4.4 Gna12的Copies值 Gna12實(shí)時(shí)定量結(jié)果表明，模型組大鼠腎臟組織Gna12表達(dá)下調(diào)，而經(jīng)腎消康治療后大鼠腎臟組織中Gna12表達(dá)上調(diào)，見圖13。

3 討論

細(xì)胞間通過傳遞信號(hào)分子相互交流，G蛋白系統(tǒng)是細(xì)胞中最常見的信號(hào)傳遞方式。G蛋白即鳥嘌呤核苷酸（GTP）結(jié)合蛋白，具有GTP酶活性，是在細(xì)胞信號(hào)通路中起信號(hào)轉(zhuǎn)換器或分子開關(guān)作用的蛋白質(zhì)，是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路上的重要組成部分，體內(nèi)外許多激素、遞質(zhì)、毒物和藥物等均可通過G蛋白引起細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的第二信使改變，導(dǎo)致一系列生理生化變化[1]。

G蛋白可分為兩類：1）由α、β和γ亞單位組成的異三聚體，在膜受體與效應(yīng)器之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起中介作用；2）小分子G蛋白，為分子質(zhì)量21～28 ku的小肽，只具有G蛋白α亞基的功能，在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，屬于小GTP酶的Ras超家族。

當(dāng)受體被配體激活后，Gα上的GDP為GTP所取代，這是G蛋白激活的關(guān)鍵步驟。此時(shí)G蛋白解離成GTP-Gα和Gβγ兩部分，它們可分別與效應(yīng)器作用，直接改變其功能，如離子通道的開閉，或通過產(chǎn)生第二信使影響細(xì)胞的反應(yīng)。Gα上的GTP酶水解GTP，終止G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此時(shí)，Gα與Gβγ又結(jié)合成無活性的三聚體[2]。

目前，Gα亞基主要有Gαs、Gαi、Gαq/11 和Gα12/13幾種不同的類型。它們主要是在效應(yīng)識(shí)別上不同，但卻有著相似的激活機(jī)制。Gαi抑制ATP生成cAMP；Gαq/11刺激膜結(jié)合的磷脂酶C測(cè)試，然后將PIP2裂解成兩個(gè)第二信使：IP3和二酰基甘油（DAG）；Gα12/13參與Rho家族GTP酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（通過RhoGEF家族）和控制細(xì)胞骨架重構(gòu)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移[3]。

細(xì)胞骨架是一動(dòng)態(tài)纖維網(wǎng)絡(luò)，具有細(xì)胞收縮、維持細(xì)胞形狀、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏附、吞噬等功能[4]。細(xì)胞骨架的主要成分是微絲，肌動(dòng)蛋白（actin）是微絲的基礎(chǔ)蛋白，以纖維狀肌動(dòng)蛋白（F-actin）和單球狀肌動(dòng)蛋白（G-actin）兩種形式存在并相互轉(zhuǎn)換，調(diào)節(jié)系膜細(xì)胞的收縮狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)毛細(xì)血管口徑及腎小球?yàn)V過率[5]。

G蛋白是細(xì)胞中重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，是許多信號(hào)傳遞途徑的中心環(huán)節(jié)，因此也就成了眾多藥物和毒素攻擊的靶位點(diǎn)。事實(shí)上，如糖尿病、失明、過敏、抑郁癥、心血管缺陷和某些癌癥疾病以及其他病癥，都被認(rèn)為是由于G蛋白信號(hào)紊亂引起的[6]。但Gna12在DN發(fā)病機(jī)制中的作用目前還不得而知，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究極少，從本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果可以看出：在DN狀態(tài)下，模型組大鼠腎臟Gna12表達(dá)下調(diào)，筆者由此推斷高糖影響了Gna12的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，從而使F-actin解聚，細(xì)胞骨架重構(gòu)導(dǎo)致系膜細(xì)胞收縮功能失調(diào)，造成早期DN腎小球的高濾過狀態(tài)，導(dǎo)致DN的發(fā)生。

DN為本虛標(biāo)實(shí)之證，病及五臟六腑、氣血經(jīng)絡(luò)，其臟腑虛損以脾腎為著，脾虛則其運(yùn)化、升清、散精的作用不足，血中精微不能輸布臟腑，濡養(yǎng)四肢，積蓄過多則隨小便漏泄體外，發(fā)為消渴[7]。脾腎兩虛是病理基礎(chǔ)，濕濁瘀血既是病理產(chǎn)物又是致病因素，脾腎虧虛、濕濁瘀血貫穿DN始終。

腎消康具有補(bǔ)腎健脾、利濕泄?jié)帷⒒鐾ńj(luò)的作用。腎陰得充則一身陰液得養(yǎng)，腎陽(yáng)不虛，其蒸騰氣化功能正常，腎之封藏功能如常，精微物質(zhì)存內(nèi)為機(jī)體所用而不外泄。健脾益氣，培補(bǔ)后天之本，使水谷精微得以四布，臟腑得養(yǎng)，清者得升，濁者得降，濕濁得化，精微得布；脾氣充盛又可化生氣血，血流通暢，祛除瘀血形成之源。利濕泄?jié)峥赏ㄟ^促進(jìn)代謝，使體內(nèi)精微物質(zhì)得到利用，使本身有害物質(zhì)得到清除。活血化瘀可使經(jīng)絡(luò)之瘀滯得除，各臟腑得新血濡養(yǎng)。

腎消康，其藥物組成有生地、山藥、山茱萸、茯苓、澤瀉、牡丹皮、人參、黃芪、枸杞子、陳皮、葛根、水蛭等。方中以六味地黃湯為基礎(chǔ)方，滋陰清熱。枸杞子藥性平和，為平補(bǔ)陰陽(yáng)之佳品，用之增強(qiáng)補(bǔ)腎之力；人參、黃芪補(bǔ)虛扶正，且人參、黃芪與茯苓、澤瀉、葛根、水蛭配伍，使扶正與祛邪協(xié)調(diào)兼顧，祛邪不傷正、扶正不留邪；陳皮與葛根配伍，陳皮辛散苦降，長(zhǎng)于理氣燥濕健脾瀉胃濁，調(diào)中快膈；葛根升津、升發(fā)清陽(yáng)、鼓舞脾胃清陽(yáng)之氣；水蛭破血逐瘀，效強(qiáng)而不傷正。方中諸藥相合，祛邪而不傷正，扶正而不留邪，標(biāo)本兼顧，為臨床治療DN的良方[8]。王盛發(fā)等[9]通過糖尿病腎病中醫(yī)治療用藥規(guī)律分析，總結(jié)了一些用藥頻度較高的中藥，如黃芪、茯苓、山藥、山茱萸等，中藥類型則以補(bǔ)益、健脾、活血、清熱類為多，這為本方用藥提供了有力的參考依據(jù)。

現(xiàn)代藥理證實(shí)：生地、山茱萸、山藥、黃芪、茯苓、澤瀉均有降血糖作用；黃芪有雙向調(diào)節(jié)血糖作用和減少尿蛋白排泄作用；茯苓、澤瀉降糖降脂改善糖脂代謝，增加腎血流量，促進(jìn)腎功能恢復(fù)[10]。譚俊珍等[11]認(rèn)為六味地黃丸對(duì)糖尿病大鼠糖、脂代謝有一定的改善作用。

4 結(jié)論

本研究應(yīng)用Affymetrix Rat2302.0基因芯片檢測(cè)糖尿病大鼠腎臟基因表達(dá)譜，篩選差異表達(dá)基因，Gna12基因是篩選出的腎臟差異表達(dá)基因和藥效靶點(diǎn)之一，并對(duì)該基因做熒光定量RT-PCR測(cè)序分析?；蚬δ芊治霰砻鳎贒N狀態(tài)下，模型組大鼠腎臟Gna12表達(dá)下調(diào)，表明Gna12的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能受到影響。腎消康中劑量組Gna12表達(dá)上調(diào)，中藥復(fù)方腎消康可調(diào)控Gna12的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，對(duì)Gna12有良性調(diào)節(jié)作用。其作用機(jī)制有待于更深入研究。

[1]李 巖，謝克勤.化學(xué)物對(duì)G蛋白影響的研究進(jìn)展[J].衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，2002，16（2）：127－130.

[2]Eric RK,James HS,Thomas MJ.Principles of Neural Science[M].New York:McGraw-Hill,2000.

[3]Neves SR,Ram PT,Iyengar R.G protein pathways[J].Science,2002,296(5573):1636-1639.

[4]Baumann CA,Ribon V,Kanzaki M,et al.CAP defines a second signaling pathway required for insulin-stimulated glucose transport[J].Nature,2000,407(6801):202-207.

[5]Chiang SH,Baumann CA,Kanzaki M,et al.Insulin stimulated GLUT4 translocation requires the CAP-dependent activation of TC10[J].Nature,2001,410(6831):944-948.

[6]Alcazar O,Ho RC,Fujii N,et al.cDNA cloning and functional characterization of a novel splice variant of c-Cbl-associated protein from mouse skeletal muscle[J].Biochem Biophys Res Commun,2004,317(1):285-293.

[7]段艷蕊，杜義斌.糖尿病腎病從脾論治機(jī)制初探[J].天津中醫(yī)藥，2011，28（5）：399－400.

[8]白玉賓.腎消康對(duì)糖尿病腎損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究[D].哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2007.

[9]王盛發(fā)，唐 劭，曹克光.糖尿病腎病中醫(yī)治療用藥規(guī)律分析[J].天津中醫(yī)藥，2009，26（2）：167－168.

[10]張 威.中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病腎病60例臨床觀察[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（3）：119.

[11]譚俊珍，李慶雯，范英昌，等.六味地黃丸對(duì)糖尿病大鼠血糖和血脂的影響[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（4）：196－198.