李 雪，秦祎婷，董學(xué)會

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，北京 100193）

遼藁本（Ligusticum jeholense Nakai et Kitag）是傘形科藁本屬多年生草本植物，以干燥根及根莖入藥，有祛風(fēng)、散寒、除濕、止痛的功效，主治風(fēng)寒感冒、頭巔頂痛、風(fēng)濕肢節(jié)痹痛等癥[1]，主要化學(xué)成分為阿魏酸和藁本內(nèi)酯等[2]。近年來，隨著藥品的開發(fā)，遼藁本需求量不斷增大，野生資源瀕臨枯竭，不能滿足市場需求，這使得人工種植遼藁本市場前景廣闊。目前，中草藥種子質(zhì)量檢驗標(biāo)準(zhǔn)的系統(tǒng)化研究僅限于人參、甘草和黃芩等幾個品種，包括遼藁本在內(nèi)的300多種大宗中藥材還沒有相應(yīng)的種子檢驗標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，無法對市場上的中草藥種子的質(zhì)量進(jìn)行有效控制，導(dǎo)致假、劣種子混跡優(yōu)良種子中間，影響正常生產(chǎn)。為對遼藁本種子生物學(xué)特性進(jìn)行研究，筆者參照《國際種子檢驗規(guī)程》（ISTA1996）和GB/T 3543-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》[3-4]及當(dāng)前種子檢驗的研究成果，對遼藁本種子扦樣和表示種子質(zhì)量的種子凈度、發(fā)芽率、千粒重等指標(biāo)的檢驗和鑒定方法進(jìn)行研究，初步制定遼藁本的種子檢驗方法，為中草藥種子質(zhì)量檢驗規(guī)范程序的確定提供實驗依據(jù)。

1 材料

遼藁本種子來源于遼寧省清源縣，2010年采收。由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)董學(xué)會副教授鑒定為遼藁本L.jeholense.種子。

2 方法

參照文獻(xiàn)[5-6]進(jìn)行方法探討。

2.1 扦樣 按GB/T 3543.2-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》執(zhí)行。確定其種子批的最大質(zhì)量和樣品最小質(zhì)量，同時確定初次樣品、混合樣品、送驗樣品、實驗樣品的獲取方法。

2.2 凈度分析 按GB/T 3543.2-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》執(zhí)行。

2.3 發(fā)芽實驗

2.3.1 發(fā)芽溫度實驗 實驗在鋪有兩層濕潤發(fā)芽紙的發(fā)芽盒中進(jìn)行，設(shè)15、20、25、30℃4個恒定溫度處理。

2.3.2 不同發(fā)芽床的比較 紙上（TP）：在發(fā)芽盒中鋪兩層濕潤干凈的發(fā)芽紙，將預(yù)濕的種子均勻置床，培養(yǎng)。紙間（BP）：將兩層充分噴濕的發(fā)芽紙攤于平板上，將預(yù)濕的種子均勻置于一層紙上，再將另一層發(fā)芽紙松松蓋在種子上，卷好，培養(yǎng)。砂上（TS）：將拌好的濕砂在發(fā)芽盒內(nèi)鋪2 cm厚，將種子均勻壓入砂的表層，培養(yǎng)。砂中（S）：將拌好的濕砂在發(fā)芽盒內(nèi)鋪2 cm厚，將種子均勻置床，加蓋1 cm厚的松散濕砂，培養(yǎng)。

2.3.3 需光實驗 分為部分光照和黑暗兩種處理。光照強度為2000lx，部分光照處理為每日光照12h，黑暗12 h培養(yǎng)；黑暗處理是將置床后的發(fā)芽盒用錫箔紙嚴(yán)密包裹后，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.3.4 不同貯藏溫度的比較 將部分種子貯藏于20、4、-20℃的環(huán)境，10個月后均勻置床，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

上述發(fā)芽實驗中，每個處理均重復(fù)3次，每次重復(fù)放置100粒種子，種子開始萌發(fā)后每日統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)（萌發(fā)以胚根突破種皮1～2 mm為標(biāo)準(zhǔn)），持續(xù)到不再有發(fā)芽數(shù)增加為止。最后測定種子的發(fā)芽率。

2.4 質(zhì)量測定 按百粒法、千粒法進(jìn)行質(zhì)量測定。百粒法8次重復(fù)實測質(zhì)量，千粒法2次重復(fù)實測質(zhì)量，對取得的種子平均千粒重進(jìn)行比較分析，確定最適宜方法。

2.5 數(shù)據(jù)分析 采用SAS9.1版本，計量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用 t檢驗，三組及以上組間比較采用單因素方差分析（Oneway ANOVA），P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 扦樣

3.1.1 初次樣品的扦取 按GB/T3543.2-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》執(zhí)行。

3.1.2 送驗樣品的配制 質(zhì)量規(guī)定：通常凈度分析和其他植物種子數(shù)目測定所需的送驗樣品至少應(yīng)包含25000粒種子，這個數(shù)目是凈度分析實驗樣品的10倍。因此送驗樣品的質(zhì)量可以根據(jù)遼藁本的千粒重推算得到。

送驗樣品的分?。喊碐B/T 3543.2-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》執(zhí)行。遼藁本種子批最大質(zhì)量和樣品最小質(zhì)量見表1。

表1 遼藁本種子批最大質(zhì)量和樣品最小質(zhì)量Tab.1 Maximum weight of seed lot and minimum weight of sample on seed of L.jeholense

3.1.3 樣品的保存 為了便于復(fù)檢，檢驗后的樣品應(yīng)當(dāng)在能控制溫濕度的專用房間存放一段時間，通常是1 a。

3.2 凈度分析 參照GB/T 3543.2-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》凈度分析法執(zhí)行。將樣品區(qū)分為凈種子、其他植物種子和雜質(zhì)，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：凈種子鑒定參照《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》中歐防風(fēng)屬、歐芹屬、茴芹屬標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。其他植物種子指凈種子以外的任何植物種類的種子單位（包括其他植物種子和雜草種子）。雜質(zhì)包括除凈種子和其他植物種子以外的所有種子單位、其他雜質(zhì)。凈度分析采用全試樣法，各種成分的分析結(jié)果見表2，試樣增失差距沒有偏離原始質(zhì)量的5%。

表2 遼藁本種子凈度測定Tab.2 Purity analysis on seed of L.jeholenseg

3.3 發(fā)芽實驗

3.3.1 不同溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響 結(jié)果見表3。

表3 不同溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.3 Effect of temperature on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

表3 不同溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.3 Effect of temperature on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

注：1.同一列平均值后的字母不同表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，字母相同表示差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.初次計數(shù)時間為發(fā)現(xiàn)胚根突破種皮的最早時間，末次計數(shù)時間為發(fā)芽結(jié)束，發(fā)芽率不再增加的時間，下表同。

發(fā)芽溫度（℃）發(fā)芽率（%）初次計數(shù)時間（d）末次計數(shù)時間（d）1594.7±1.2a 8202088.7±5.0ab 7232583.3±2.3b 9303087.3±5.0b 928

由表3可以看出，在15～30℃區(qū)間，隨著溫度的升高，發(fā)芽率逐漸降低，發(fā)芽持續(xù)時間加長，并且25℃發(fā)芽后期，種子發(fā)霉、腐爛現(xiàn)象增多，但30℃發(fā)芽率比25℃時略有升高。15℃時的發(fā)芽率與25℃和30℃的發(fā)芽率相比差異顯著，發(fā)芽率高且發(fā)芽持續(xù)時間最短。

3.3.2 不同發(fā)芽床對遼藁本種子發(fā)芽的影響 見表4。

表4結(jié)果表明，TP、TS和S 3種發(fā)芽床的發(fā)芽

表4 不同發(fā)芽床對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.4 Effect of germinating bed on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

表4 不同發(fā)芽床對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.4 Effect of germinating bed on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

發(fā)芽床 發(fā)芽率（%）初次計數(shù)時間（d）末次計數(shù)時間（d）TP 94.7±2.3a 620 BP 72.0±3.5b 720 TS 84.7±1.2a 619 S 83.3±12.2ab 1019

率差異不顯著，S發(fā)芽初次計數(shù)時間晚于TS。TP和TS的發(fā)芽率顯著高于BP的發(fā)芽率，TP和TS發(fā)芽床發(fā)芽率雖然差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但TP發(fā)芽率高于TS。

3.3.3 光照對遼藁本種子發(fā)芽的影響 見表5。

表5 光照與否對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.5 Effect of illumination on seed germination percentage L.jeholense（±s，n＝3）

表5 光照與否對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.5 Effect of illumination on seed germination percentage L.jeholense（±s，n＝3）

光照條件 發(fā)芽率（%）初次計數(shù)時間（d）末次計數(shù)時間（d）部分光照 76.7±7.6a 723黑暗 77.3±5.0a 721

表5結(jié)果表明，遼藁本種子在有光照和黑暗條件下均能發(fā)芽，且發(fā)芽率接近，發(fā)芽持續(xù)時間也相近。但黑暗條件下遼藁本幼苗出現(xiàn)黃化和徒長現(xiàn)象，苗纖弱于有光照條件下的幼苗。

3.3.4 不同貯藏溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響 見表6。

表6 不同貯藏溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.6 Effect of storage temperature on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

表6 不同貯藏溫度對遼藁本種子發(fā)芽的影響（±s，n＝3）Tab.6 Effect of storage temperature on seed germination percentage of L.jeholense（±s，n＝3）

貯藏溫度（℃）發(fā)芽率（%）初次計數(shù)時間（d）末次計數(shù)時間（d）206.0±2.0b 1223474.7±8.3a 723-2070.0±6.0a 823

由表6可見，20℃貯藏10個月后，遼藁本種子活力降低嚴(yán)重，發(fā)芽緩慢且發(fā)芽率極低；4℃和-20℃貯藏下的種子發(fā)芽率差異不顯著，且發(fā)芽整齊一致。

3.3.5 遼藁本種子發(fā)芽技術(shù)方法 綜合以上發(fā)芽實驗各研究結(jié)果，初步確立遼藁本種子發(fā)芽方法，見表7。

3.4 質(zhì)量測定 見表8。

由表8可見，采用百粒法和千粒法測定的千粒重差異無統(tǒng)計學(xué)意義，因此，百粒法和千粒法均可以用來進(jìn)行遼藁本種子的質(zhì)量測定。

表7 遼藁本種子發(fā)芽方法Tab.7 The method of germination on seed of L.jeholense

4 討論

發(fā)芽實驗結(jié)果表明，溫度是影響種子萌發(fā)的重要外界因素[7]，低溫有利于遼藁本種子發(fā)芽。15℃時的發(fā)芽率與25℃和30℃的發(fā)芽率相比差異顯著，發(fā)芽率高且發(fā)芽持續(xù)時間最短，因此15℃是遼藁本種子發(fā)芽的適宜溫度。由于BP透氣性不如TP和TS，造成種子發(fā)霉多，幼苗爛苗現(xiàn)象嚴(yán)重。TP和TS發(fā)芽床發(fā)芽率雖然沒有顯著差異，但TP發(fā)芽率高于TS，且實際操作簡便，因此TP發(fā)芽床適宜遼藁本種子發(fā)芽。光照實驗結(jié)果表明，光照或黑暗對遼藁本種子萌發(fā)沒有顯著影響，但對子葉轉(zhuǎn)綠有顯著影響，所以光照不是遼藁本種子萌發(fā)所必須的。遼藁本種子不能進(jìn)行常溫貯藏，低溫才能保證種子活力。百粒法和千粒法均可以用來進(jìn)行遼藁本種子質(zhì)量測定。

綜合上述結(jié)果，初步制定了遼藁本的種子質(zhì)量檢驗方法，包括扦樣、凈度分析、發(fā)芽試驗和質(zhì)量測定，為規(guī)范遼藁本種子市場，對種子質(zhì)量進(jìn)行評價提供了技術(shù)支持。

農(nóng)作物種子質(zhì)量檢驗方法比較成熟，而絕大部分中藥材種子還沒有相應(yīng)的國家檢驗標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，無法對市場上的中藥材種子質(zhì)量進(jìn)行檢驗和有效控制。這使得中藥材種子檢驗工作無標(biāo)準(zhǔn)可依，種子質(zhì)量控制受到極大的制約[8]。因此，開展中藥材種子檢驗規(guī)程和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究是中國中藥材規(guī)范化生產(chǎn)急需解決的重要問題[9]。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]張金蘭,于德泉,周志華.遼藁本化學(xué)成分的研究[J].藥學(xué)學(xué)報,1996,31(1):33-37.

[3]國際種子檢驗協(xié)會(ISTA).1996國際種子檢驗規(guī)程[S].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1999.

[4]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T3543-1995.農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1995.

[5]張春慶,王建華.種子檢驗學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2006.

[6]閆志剛,馬小軍,董青松,等.青蒿種子檢驗規(guī)程研究[J].中國種業(yè),2011(1):37-40.

[7]羅夫來,郭巧生.百蕊草種子適宜萌發(fā)條件的研究[J].中草藥,2012,43(3):588-591.

[8]于福來,王文全,方玉強,等.甘草種子質(zhì)量檢驗方法研究[J].中國中藥雜志,2011,36(6):750.

[9]郭巧生,張賢秀,王艷茹,等.夏枯草種子品質(zhì)檢驗及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究[J].中國中藥雜志,2009,34(7):815.