趙 濤 王月茹 盧 露 張曉紅 謝 偉 南景一

(1陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，陜西省咸陽(yáng)市渭陽(yáng)西路西延段123號(hào)，712000;2陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院)

魚(yú)金清解口服液是由魚(yú)腥草、金銀花兩味藥材經(jīng)提取制成的口服液體制劑，在“魚(yú)金注射液”［WS3－B－326－98］的處方基礎(chǔ)上改變工藝、改變劑型，改變給藥途徑供口服給藥的液體制劑。其臨床療效確切，主要用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱等病癥。本研究主要對(duì)魚(yú)金清解口服液中綠原酸含量的測(cè)定建立初步的方法，為該制劑臨床應(yīng)用的有效性、安全性提供質(zhì)量控制的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC－10ATvp輸液泵;SPD－10Avp紫外檢測(cè)器，ANASTAR工作站);SB3200DT超聲波清洗機(jī);梅特勒電子天平。

1.2 試藥 綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。魚(yú)金清解口服液制劑由陜西步長(zhǎng)制藥有限公司生產(chǎn)提供。

2 方法與結(jié)果［1－3］

2.1 方法條件 1)色譜條件:色譜柱Hypersil BDS C18柱(4.6mm ×150mm，5μm);流動(dòng)相甲醇 － 水 － 冰醋酸(15∶85∶1);檢測(cè)波長(zhǎng)327nm;流速1.0mL/min;柱溫35℃;色譜柱的理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備:精密量取本品溶液1mL，置20mL量瓶中，加50%甲醇制成溶液，即得。4)測(cè)定法:精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.2 干擾性試驗(yàn) 按處方比例稱(chēng)取魚(yú)腥草藥材，按制備工藝項(xiàng)下的方法制備陰性樣品，按供試品制備方法制得陰性對(duì)照溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μL，結(jié)果在綠原酸對(duì)照品色譜峰的相應(yīng)位置上，有很小的色譜峰出現(xiàn)，經(jīng)查文獻(xiàn)，表明魚(yú)腥草藥材中含有一定量綠原酸，經(jīng)測(cè)定魚(yú)腥草中綠原酸的含量為0.04%，金銀花中的綠原酸含量《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得少于1.5%，故認(rèn)為本品綠原酸的含量測(cè)定主要測(cè)定金銀花藥材中的綠原酸。另按處方比例稱(chēng)取輔料制得缺魚(yú)腥草和金銀花的雙陰性樣品，照供試品制備方法制得雙陰性對(duì)照溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μL，結(jié)果在綠原酸對(duì)照品色譜峰的相應(yīng)位置上，沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明本品中的輔料對(duì)綠原酸的含量測(cè)定不產(chǎn)生干擾。

2.3 線性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含0.52mg的溶液，精密吸取適量，加50%甲醇配成不同濃度的溶液，精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量X(μg)對(duì)峰面積Y繪制曲線圖，計(jì)算回歸方程為:Y=3143023X+20152，R=1.0000。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在0.104～2.608μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份對(duì)照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于0、4、8h，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。本品不同時(shí)間測(cè)定，其峰面積的RSD為0.82%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)樣品1.0mL，共5份，按供試品溶液制備方法法制備，并按以上色譜條件測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表3。本品5份樣的RSD%為0.73，表明本方法的重復(fù)性較好。

表3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表4 回收率測(cè)定結(jié)果

表5 3批樣品的含量測(cè)定結(jié)果

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品6份，每份約1.0mL，再分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液(0.5215mg/mL)的溶液2.0mL，按供試品溶液制備方法制備，共制備6份樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表4。6份樣的平均回收率為100.3%，證明本方法的準(zhǔn)確性較高。

2.8 樣品中綠原酸含量測(cè)定 精密量取本品3批樣品各1.0mL，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表5。以上3批樣品測(cè)定結(jié)果表明，本品每1mL含綠原酸在1.0～1.3g之間，考慮到藥材的差異性，故根據(jù)測(cè)定結(jié)果規(guī)定本品每1mL含金銀花以綠原酸計(jì)，不得低于1.0mg。

3 討論

中藥復(fù)方制劑是中醫(yī)藥理論的高度濃縮，承載著傳遞中醫(yī)理論與臨床治療的重要角色，是中醫(yī)藥走出國(guó)門(mén)、走向世界的有力武器。傳統(tǒng)中藥制劑的“粗、大、黑”形象，以及國(guó)外藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)的“量化”要求，一直以來(lái)成為中藥制劑出口的瓶頸，于是中醫(yī)藥被“西化”的思想越來(lái)越成為時(shí)下發(fā)展的焦點(diǎn)。其中，關(guān)于如何確保中藥制劑質(zhì)量、用何指標(biāo)去控制及怎樣控制等環(huán)節(jié)已經(jīng)成為這一問(wèn)題的核心矛盾。本文中對(duì)魚(yú)金清解口服液中金銀花藥材的活性成分綠原酸，采用高效液相法進(jìn)行含量的測(cè)定，并對(duì)該測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)的考察，這將對(duì)該中成藥的質(zhì)量控制起到一定的參考作用。此外，我們還對(duì)制劑中魚(yú)腥草的活性成分甲基正壬酮采用GC法進(jìn)行含量測(cè)定，最終暫定魚(yú)金清解口服液的質(zhì)量由綠原酸和甲基正壬酮二者綜合的權(quán)重標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制，這將會(huì)是近期中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制的研究方向之一。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［2］李欣榮，曹志勝，柏茗.中藥制劑中綠原酸測(cè)定樣品預(yù)處理方法研究.中國(guó)中藥雜志，1997，22(04):220 －221.

［3］李春紅，何兵，田吉.川渝產(chǎn)山銀花中綠原酸和總綠原酸的測(cè)定.華西藥學(xué)雜志，2009，(01).