孫明江 楊 光 代 龍 譚 穎 呂旭瀟 肖艷芳 田 華

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南，250355;2濰坊市立醫(yī)院;3煙臺(tái)中亞藥業(yè)有限責(zé)任公司)

接骨七厘散原劑型為小劑量貴重藥處方，由乳香、沒藥、當(dāng)歸、土鱉蟲、骨碎補(bǔ)、硼砂、血竭、自然銅、大黃構(gòu)成［1］，主要功能是活血化瘀，接骨止痛。用于跌打損傷，續(xù)筋接骨，血瘀疼痛。臨床療效確切，但是骨折患者用藥療程長(zhǎng)，用藥量大，且該散劑含有大量的貴重藥材(血竭)，藥源短缺。為切實(shí)提高處方藥材的生物利用度，從而提高療效，減少藥材應(yīng)用，節(jié)約藥源和生產(chǎn)成本，采用新工藝制成軟膠囊［2］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)該方劑促進(jìn)大鼠骨折、軟組織損傷愈合等進(jìn)行了比較研究。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠(SPF級(jí))，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(魯)20030004。

1.2 主要試驗(yàn)器材 Schench－Rsa250型電子萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)(德國(guó))。

1.3 受試藥物的配置 接骨七厘軟膠囊為部頒標(biāo)準(zhǔn)藥物劑型改革而來(lái)，臨床上，人日用量為3g(1.5g/次，2次/日)。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，鎮(zhèn)痛試驗(yàn)和血流變?cè)囼?yàn)證實(shí)，接骨七厘軟膠囊的等效劑量約為原劑型(接骨七厘散)的1/2。本實(shí)驗(yàn)中，接骨七厘散設(shè)計(jì)為臨床等效劑量，即0.5g/kg，接骨七厘軟膠囊小劑量為接骨七厘散劑量減半(0.25g/kg)，中劑量和散劑等同(0.5g/kg)，大劑量加倍1g/kg。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 外傷性骨折動(dòng)物模型的建立 取Wistar大鼠60只，雄性，隨機(jī)分成5組，對(duì)照組(模型對(duì)照組)、接骨七厘散組(陽(yáng)性對(duì)照組)、接骨七厘軟膠囊小劑量組、中劑量組、大劑量組。將大鼠用乙醚淺麻，剪開前右肢皮膚、肌肉，分離橈骨，在橈骨旋前圓肌止點(diǎn)遠(yuǎn)端1/3處用骨科剪剪斷橈骨，造成骨折［3］。縫合肌肉、皮膚，并注射青霉素預(yù)防感染，連續(xù)5天。手術(shù)后第2天起，每天灌胃給藥，連續(xù)30天，并分別于第14天、30天各處死一半大鼠，解剖取骨折部位前肢，剝離皮膚、肌肉，以手術(shù)刀片分離橈骨，以蘸有生理鹽水的紗布包裹，放入－70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 藥后30天大鼠橈骨生物力學(xué)的影響(±s)

表1 藥后30天大鼠橈骨生物力學(xué)的影響(±s)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

2.2 骨折大鼠生物力學(xué)測(cè)定 測(cè)試方法:以Schench－Rsa250型電子萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)，選用三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)測(cè)定橈骨的力學(xué)性能。將大鼠橈骨置于三點(diǎn)彎曲器具，橈骨前側(cè)向上，最大載荷選20N，跨度為18mm，上壓頭以20mm/min的速率加載。計(jì)算機(jī)下沖力及位移自動(dòng)采控，采樣頻率30Hz。測(cè)力精度為3%，用TSG－3光柵線位移傳感器(精確到0.02mm)測(cè)定:1)載荷:作用于骨的外力大小，相對(duì)反應(yīng)骨的載荷能力;2)撓度:骨斷面在外力作用下骨長(zhǎng)軸方向的位移，反應(yīng)骨的韌性、抗彎能力。橈骨做生物力學(xué)試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，大鼠的橈骨本身承受力較輕，而骨折部位，特別是未完全愈合的部位承受能力更差，藥后14天無(wú)法進(jìn)行生物力學(xué)的測(cè)定，故測(cè)定藥后30天的生物力學(xué)，試驗(yàn)結(jié)果見表1。

從試驗(yàn)中可以看出，接骨七厘軟膠囊給藥30天后，能夠明顯提高大鼠抗骨折能力，最大載荷力對(duì)照組為16.2N，中劑量、大劑量可提高到20N以上，小劑量、中劑量組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，大劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);接骨七厘軟膠囊小劑量組(0.25g/kg)抗骨折能力(最大載荷力)與接骨七厘散(0.5g/kg)相當(dāng)。從撓度上看，接骨七厘軟膠囊能夠明顯提高骨骼的韌性，與對(duì)照組比較，小劑量、中劑量組及接骨七厘散組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，大劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.3 接骨七厘軟膠囊對(duì)大鼠骨折后14天、30天骨痂形態(tài)學(xué)分析 給藥后第14天，在外骨痂及橋梁骨痂中軟骨細(xì)胞明顯減少，代之以骨小梁為主的結(jié)構(gòu)。對(duì)照組部分大鼠骨折處有水腫，有大量的纖維母細(xì)胞增生和部分透明軟骨形成;小劑量組骨折處有少量纖維增生和部分透明軟骨形成，部分透明軟骨被新生骨代替;大劑量組大部分透明軟骨被新生骨代替;中劑量與接骨七厘散組介于兩者對(duì)照和大劑量之間。藥后30天，缺損處均為新生骨小梁，并交織成網(wǎng)，部分新生的骨小梁依照骨的長(zhǎng)軸重新排列，并緊密靠攏，原有的間隙變成了細(xì)小的裂隙，形成骨皮質(zhì)雛形，部分骨折部位中央部出現(xiàn)骨腔再通。對(duì)照組部分大鼠新生骨出現(xiàn)，但有較多軟骨組織，可見成骨層細(xì)胞明顯增多，部分新生骨逐漸向外取代纖維軟骨組織，此時(shí)組織內(nèi)可見不同成熟程度的骨小梁，骨折愈合較好。大劑量組絕大部分軟骨被新生骨所取代，骨折部位中央多數(shù)出現(xiàn)骨腔再通。骨折部位愈合程度和對(duì)照組比較具有明顯的差異性，大劑量組骨折部膨大明顯縮小，骨皮質(zhì)連續(xù)性好，大部分外形已接近正常橈骨形態(tài)及大小，明顯好于對(duì)照組和接骨七厘散組。

3 接骨七厘軟膠囊對(duì)大鼠軟組織損傷的影響

取體重250g左右，健康大鼠50只，雄性，所有大鼠固定，以50g砝碼自20cm高度自由落下撞擊大鼠右后肢外側(cè)，連續(xù)3次。然后將大鼠隨機(jī)分成基質(zhì)對(duì)照組、接骨七厘軟膠囊小、中、大劑量組及對(duì)照藥接骨七厘散組5組，每組10只，每天灌胃1次，連續(xù)9天。每日觀察大鼠右后肢瘀血情況，第10天給藥后1h，所有大鼠腹腔注射烏來(lái)糖麻醉，處死，取右后肢做病理檢查。肉眼觀察給藥組與對(duì)照組比較，給藥組瘀血減輕較為明顯。病理學(xué)檢查:對(duì)照組肌纖維水腫明顯，并伴有瘀血;間質(zhì)纖維增生明顯，并有成團(tuán)的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。中劑量、陽(yáng)性對(duì)照藥組肌纖維水腫明顯減輕，瘀血多數(shù)吸收;間質(zhì)纖維增生減輕，并有少量的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。大劑量組，肌纖維無(wú)水腫，瘀血全部吸收;間質(zhì)纖維幾無(wú)增生，未見慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。病理實(shí)驗(yàn)可以看出接骨七厘軟膠囊能夠明顯促進(jìn)纖維母細(xì)胞增生，促進(jìn)骨折的愈合，接骨七厘軟膠囊也能明顯減輕大鼠軟組織損傷，減輕瘀血程度，縮短瘀血時(shí)間。

4 討論

瘀血阻絡(luò)是骨折的主要病機(jī)，血循行于脈中，運(yùn)行不息，濡養(yǎng)全身。損傷后，必傷血，故有“跌打損傷之癥，專從血論”之說。脈絡(luò)受損，血液外溢，流于臟腑、肌腠，聚而為瘀;外力傷及經(jīng)脈，血行受阻于經(jīng)髓之中，或由氣滯不行，血液受阻。若因傷折，內(nèi)動(dòng)經(jīng)絡(luò)，血行之道不得宣通，瘀積則為腫為痛。治宜除去惡瘀，使氣血流通，瘀血不去，新血難生。

創(chuàng)傷骨折的早、中期臨床表現(xiàn)主要為血瘀、腫脹、疼痛。因此，活血祛瘀、消腫止痛、續(xù)筋接骨是其治療原則。接骨七厘散主要成分為乳香、沒藥、土鱉蟲、自然銅、血竭、骨碎補(bǔ)、當(dāng)歸、大黃等。方中以土鱉蟲破血療傷，接筋續(xù)骨，為君藥;骨碎補(bǔ)活血療傷，接筋續(xù)骨，當(dāng)歸活血養(yǎng)血，通經(jīng)止痛，血竭活血散瘀止痛，共為臣藥;乳香、沒藥、大黃活血散瘀止痛，自然銅活血定痛，接骨療傷，硼砂清熱解毒，消腫止痛，上藥共助活血接骨，消腫止痛之力，為佐使藥。諸藥合奏活血化瘀，接骨止痛之功。適用于骨折損傷三期的治療。早期宜活血化瘀，消腫止痛［4］(藥用乳香、沒藥、血竭、當(dāng)歸、大黃);中期宜和營(yíng)生新，舒筋活絡(luò)，接骨續(xù)筋(藥用自然銅、土鱉蟲);晚期宜強(qiáng)筋壯骨，補(bǔ)氣養(yǎng)血(藥用骨碎補(bǔ)、當(dāng)歸)。

根據(jù)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，含生藥量為原散劑一半的接骨七厘軟膠囊與原劑型療效相當(dāng)，從而大大提高藥材的生物利用度，提高療效，藥材減量應(yīng)用，節(jié)約藥源和生產(chǎn)成本，為新劑型的開發(fā)提供可行方法。

［1］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.骨傷科分冊(cè)［S］.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編，2002:327.

［2］孔令提，代龍.接骨七厘散軟膠囊內(nèi)容物加PEG400濕法超微粉碎工藝研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(11):2810 －2811.

［3］李儀奎.中藥藥理試驗(yàn)方法學(xué)［M］.第二版.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:846.

［4］申喜生.中西醫(yī)結(jié)合治療踝關(guān)節(jié)骨折32例.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(16):2006 －2008.