張全溫 馮云

實時定量方法與酶聯(lián)免疫吸附試驗方法對皰疹病毒的檢驗效果對比分析

張全溫 馮云

目的 探討實時定量方法(PCR)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法對皰疹病毒的檢驗效果，并做出對比分析。方法 選取我院2008年6月至2011年3月來皮膚性病門診確診的患者190例，其中單純皰疹病毒感染患者140例分為觀察組，分別采用實時定量方法和酶聯(lián)免疫吸附試驗方法對患者的血液以及分泌物、皰液進行檢測，得出兩種方法的結(jié)果陽性檢查率。結(jié)果 140例患者分泌物、皰液中檢測出的陽性率實時定量方法為87.2%，ELISA為44.8%，在血液標(biāo)本中檢測出的陽性率PCR為30.4%，ELISA為59.5%。對照組為50例，屬于非皰疹病毒感染患者。結(jié)論 PCR在分泌物中檢測出的結(jié)果比ELISA的檢測率更高，PCR更具臨床使用價值，不僅節(jié)省了時間，為皰疹病毒的診斷贏得了治愈的良好時機，其特異性好、敏感性強的優(yōu)勢值得在臨床上廣泛使用。另外需要注意的是，PCR不適合在血液中檢測。

實時定量方法;酶聯(lián)免疫吸附試驗方法;皰疹病毒;對比

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組實驗者為我院2008年6月至2011年3月來皮膚性病門診確診的患者190例，單純皰疹病毒感染140例，年齡為18～65歲，癥狀有皰疹性口腔炎、唇皰疹、皮膚皰疹，生殖器皰疹、女性宮頸炎等。對照組50例患者，年齡17～59歲，均為我院皮膚性病科的非皰疹病毒感染者。

1.2 檢測儀器、試劑

PCR檢測儀為上海采購的全自動實時熒光監(jiān)測儀，并使用相應(yīng)的檢測試劑、陰陽性質(zhì)控物。ELISA由丹麥公司提供，分為可拆式。

1.3 檢測方法

1.3.1 事先準(zhǔn)備好預(yù)測棉拭子，處于半干狀態(tài)，直接取患者患處的分泌物、皰液，然后將其放進1 ml的磷酸鹽緩沖液中，送去檢驗。

1.3.2 將腦脊液、血液取出清液，作為備用。

1.4 ELISA檢測方法

將樣品根據(jù)傳統(tǒng)的方法，開始ELISA檢測方法，培養(yǎng)，完成鑒定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

本次實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，其中計量資料對比采用t檢驗，計數(shù)資料對比采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對觀察組150例單純皰疹病毒進行PCR與ELISA試驗方法進行檢測，與對照組50例進行分析。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.01)，具體情況見表1。

表1 190例患者進行PCR與ELISA試驗方法的檢測結(jié)果比較(例，%)

90例培養(yǎng)性標(biāo)本采用PCR檢測方法，得出其中有89例為陽性，其檢測準(zhǔn)確率為98.9%。

3 討論

皰疹病毒是屬于人皰病毒所引發(fā)的病毒性感染，通常會對人體的口舌、嘴唇以及皮膚跟粘膜，包括嗅覺神經(jīng)、三叉神經(jīng)造成破壞，若病毒躥入中樞神經(jīng)，就會誘發(fā)腦炎的產(chǎn)生［1］。另外，對人體的生殖系統(tǒng)與新生兒感染也存在著很大的關(guān)系［2］。目前，臨床上并無特效藥治療該癥狀，只有通過及早準(zhǔn)確檢測，進行前期的預(yù)防和治療。

本組研究顯示，對本院190例患者采用實時定量方法和酶聯(lián)免疫吸附試驗方法對患者的血液以及分泌物、皰液進行檢測，90例培養(yǎng)性標(biāo)本采用PCR檢測方法，得出其中有89例為陽性，其檢測準(zhǔn)確率為98.9%。特異性直接為100%，診斷出的敏感度為87.2%，其檢測結(jié)果比ELISA檢測結(jié)果更具準(zhǔn)確性。利用ELISA檢測方法存在一定時間和空間的限制，其檢測時間需要抗體產(chǎn)生一段時期，再加之設(shè)備、技術(shù)的不完善，很容易出現(xiàn)錯誤，非常不適合皰疹病毒的早期檢測。PCR在進行皰疹病毒的檢測時，不僅節(jié)省了時間，為皰疹病毒的診斷贏得了治愈的良好時機，而且不需要通過培養(yǎng)和病菌鑒定，其特異性好、敏感性強的優(yōu)勢值得在臨床上廣泛使用。

［1］王發(fā)根，喬尚謙.成功救治重型單純皰疹病毒性腦炎1例報告.中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14(9)：287.

［2］付玉梅，張曉坤，楊曉儀，等.單純皰疹病毒抗體檢測在生殖器皰疹斷中的應(yīng)用.廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(22)：2970-2971.

454001 焦作市第二人民醫(yī)院檢驗科

1.3.3 全部取出的標(biāo)本，可以直接用模板制備，取出其中100 μl標(biāo)本液，然后再取 1000 μl磷酸鹽，相互均勻混合，每分鐘5000r，離心5 min，將清液去上，撈出其中的沉淀物，開始模板制備。

1.3.4 準(zhǔn)備1000 μl磷酸鹽，與沉淀物均勻混合，煮沸，持續(xù)20 min，每分鐘5000r，離心5 min，將清液去上。

1.3.5 嚴(yán)格按照試劑盒上的操作說明或者操作說明書，進行試劑取量使用，引物的濃度為50pmol/L，模板用量10 μl，完成后開始使用PCR檢測儀檢測，程序為：91℃30 s變性，56℃30 s復(fù)性，71℃60 s引物延伸，總共循環(huán)40次，待反應(yīng)結(jié)束后，得出CT值以及DNA的數(shù)量。