陳小珍 謝冬梅 王群

注射用頭孢硫脒細菌內(nèi)毒素檢查方法探討

陳小珍 謝冬梅 王群

目的 對注射用頭孢硫脒進行鱟試劑檢查法實驗，以替代熱原檢查，建立注射用頭孢硫脒細菌內(nèi)毒素檢查。方法 參照《中國藥典》2010版(二)部附錄細菌內(nèi)毒素檢查法及其指導原則進行試驗。結(jié)果 注射用頭孢硫脒稀釋至2.5 g/L及以下時可消除對鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應的干擾。結(jié)論

注射用頭孢硫脒可以通過細菌內(nèi)毒素檢查法來控制細菌內(nèi)毒素的含量。

注射用頭孢硫脒;細菌內(nèi)毒素檢查法;鱟試劑;干擾試驗

注射用頭孢硫脒(cefathiamidine for injection)是第一代頭孢菌素類藥物，本品作用機制為抑制敏感菌的細胞壁合成而產(chǎn)生殺菌作用，對革蘭氏陽性菌及部分陰性菌有抗菌活性，對革蘭氏陽性菌的作用較強，一般應用于敏感菌所引起呼吸系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)、五官、尿路感染及心內(nèi)膜炎、敗血癥。

筆者通過計算機檢索系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)目前尚無有注射用頭孢硫脒細菌內(nèi)毒素檢查法的報道，參照《中國藥典》2010版(二)部附錄XIE細菌內(nèi)毒素檢查法［1］應用鱟試劑方法對該制劑進行了研究，為該品種細菌內(nèi)毒素檢測方法的建立提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

注射用頭孢硫脒，廣州白云山天心制藥股份有限責任公司，批號：110923，111029，120118 規(guī)格2.0 g/支。

1.2 試劑

鱟試劑：批號 110330，規(guī)格：0.1 ml，λ=0.25 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司;批號：101217，規(guī)格：0.1 ml，λ=0.125 EU/ml湛江博康海洋生物有限公司。細菌內(nèi)毒素工作標準品：批號：2010-3，效價120EU，規(guī)格：1 ml/支，中國藥品生物制品檢定所;細菌內(nèi)毒素檢查用水，以下簡稱(BET)，批號：1107150，規(guī)格：5 ml/支，湛江安度斯生物有限公司，其余實驗材料均經(jīng)250℃烘烤30 min。

1.3 儀器

XW_80A旋渦混旋器，上海醫(yī)科大學儀器廠;HH.214電熱恒溫水浴鍋，江蘇醫(yī)療器械廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復核

按2010版《中國藥典》(二部)細菌內(nèi)毒素檢查法進行鱟試劑靈敏度復核試驗，結(jié)果所用鱟試劑靈敏度均符合規(guī)定，結(jié)果見表1。

表1 鱟試劑靈敏度復核試驗結(jié)果

2.2 供試品細菌內(nèi)毒素限制L確定

根據(jù)公式L=K/M計算L值，其中K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時可接受的內(nèi)毒素最大劑量，注射液的K為5 EU/(kg·h)。M為人每公斤體重每小時給藥的最大劑量，臨床注射用頭孢硫脒使用的最大劑量是2000 mg所以M為2000 mg·60 kg/h。通過計算得到L為0.15 EU/mg。綜合考慮本品臨床用藥特點，為了達到臨床用藥的安全性，將細菌內(nèi)毒素限值確定為0.1 EU/mg。

2.3 供試品最小有效稀釋濃度C的確定

選用靈敏度是0.25 EU/ml和0.125 EU/ml鱟試劑，最小有效稀釋濃度依照C=λ/L計算，鱟試劑靈敏度是0.125 EU/ml的最小有效稀釋濃度時1.25 g/L，鱟試劑靈敏度是0.25 EU/ml的最小有效稀釋濃度時2.5 g/L。

2.4 供試品的干擾預試驗

將供試品用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成濃度是0.625，1.25，2.5，5.00 g/L的系列溶液，記此系列溶液為NPC系列;同時另做加含2λ的內(nèi)毒素工作標準品平行系列溶液，記此系列溶液為PPC系列，采用相應靈敏度的鱟試劑分別和NPC，PPC兩個系列的供試品反應，按照檢查法項下試驗。結(jié)果表明，注射用頭孢硫脒的稀釋濃度為1.25 g/L時，采用靈敏度是0.125EU/ml的鱟試劑，對試驗無干擾作用。結(jié)果見表2。

2.5 供試品干擾試驗

用細菌內(nèi)毒素檢查用水和注射用頭孢硫脒分別將細菌內(nèi)毒素工作標準品制成含細菌內(nèi)毒素工作標準品2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ 四種濃度的細菌內(nèi)毒素溶液。用細菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品制成每一濃度平行做4支，另取細菌內(nèi)毒素檢查用水和注射用頭孢硫脒溶液各做2支陰性對照管。靈敏度為0.125 Eu/ml的鱟試劑與上述兩個系列的內(nèi)毒素溶液反應。結(jié)果見表3，Es在0.5λ～2.0λ之間，Et在0.5Es～2.0Es之間，說明供試品在0.125 g/L時，對細菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用。因此對本品可以用細菌內(nèi)毒素法代替家兔法。

表3 供試品干擾實驗結(jié)果

2.5 供試品細菌內(nèi)毒素檢查實驗

取3批熱原檢查合格的注射用頭孢硫脒按2010版《中國藥典》(二部)要求，考察其細菌內(nèi)毒素限值，擬定注射用頭孢硫脒的內(nèi)毒素限值為0.1Eu/ml。結(jié)果見表4，陰性對照管(NC)均為陰性，供試品陽性管(PPC)和陽性對照管(PC)均為陽性，試驗有效;供試品管(NPC)均為陰性，表明供試品中未檢出細菌內(nèi)毒素，3批注射用頭孢硫脒的細菌內(nèi)毒素檢出均符合規(guī)定。

表4 供試品細菌內(nèi)毒素檢查實驗結(jié)果

3 討論

按照2010年版《中國藥典》(二部)附錄細菌內(nèi)毒素檢查法進行細菌內(nèi)毒素檢查法研究，結(jié)果表明注射用頭孢硫脒在稀釋濃度是0.125 g/L時，采用凝集法，用靈敏度是0.125 Eu/ml鱟試劑可以進行細菌內(nèi)毒素檢查。由于細菌內(nèi)毒素法具有操作簡單，檢測周期短，靈敏度高，結(jié)果準確等優(yōu)點，因此可替代家兔法對注射用頭孢硫脒進行安全質(zhì)量檢查［2，3］以達到安全用藥的目的。本文先通過干擾預試驗確定供試品的有效稀釋濃度，再由干擾試驗進一步驗證，從而減少干擾試驗的盲目性。

［1］國家藥典委員會.中國藥典(二部).北京：化學工業(yè)出版社，2010：附錄 XIE99-102.

［2］謝冬梅.甲鈷胺注射液細菌內(nèi)毒素檢查法的研究.中國實用醫(yī)藥，2010，5(2)：69-71.

［3］李薇，劉肅，何華紅，等.三磷酸腺苷原料藥的細菌內(nèi)毒素檢查法可行性的研究.中國藥房，2010，21(17)：1592-4.

On bacterial endotoxin inspection for cefathiamidine injection

CHEN Xiao-zhen，XIE Dong-mei，WANG

Qun.Department of Pharmary，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233004，China

Objective To establish bacterial endotoxin test method of the extraction of cefathiamidine injection.Methods According to the Chp 2010 Edt，inhibition or enhancement test for bacterial endotoxin test was carried out of oxiractam injection.Results The interference could be eliminated when cefathiamidine injection was diluted by 2.5 g/L.Conclusion Bacterial endotoxin test can be used for the extraction of bonemelon injection.

cefathiamidine injection;Bacterial endotoxin test(BET);Tachypleus amebocyte lysate(TAL);interference test

233004 蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥劑科

表2 供試品的干擾預實驗結(jié)果

靈敏度EU/ml 系列 稀釋濃度g/L 5.0 2.5 1.25 0.625NC PC 0.25 NPC -- -- -- -- --PPC -- -- ++ ++ ++0.125 NPC -- -- -- -- --PPC -- ++ ++ ++ ++