劉紅娟 （齊魯動(dòng)物保健品有限公司 山東 濟(jì)南 250100）

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濃縮對(duì)禽流感(H9N1型)病毒液中滅活劑甲醛含量的影響

劉紅娟 （齊魯動(dòng)物保健品有限公司 山東 濟(jì)南 250100）

采用UV法測(cè)定了不同甲醛濃度滅活后禽流感(H9N1)病毒液濃縮前、中、后的甲醛含量。結(jié)果表明：濃縮對(duì)病毒液中甲醛含量影響不大。

甲醛是生物制品研究與制造中最主要的滅活劑，適當(dāng)濃度的甲醛可使微生物喪失增殖力或毒性，保持抗原性和免疫原性。濃縮是疫苗生產(chǎn)中提高病毒含量通常采用的方法。尤其是多聯(lián)滅活疫苗的研制成功，更使得濃縮成為不可缺少的生產(chǎn)步驟。甲醛已經(jīng)被WHO定為致癌和致畸物質(zhì)，必須對(duì)制品中甲醛含量進(jìn)行限制。《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2010年版)第三部中規(guī)定禽用滅活疫苗中甲醛含量應(yīng)不超過(guò)0.2%(含40%甲醛)。為了確定濃縮對(duì)病毒液中甲醛含量的影響，為生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)支持，本文以禽流感(H9N1)病毒液為例，按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2010年版)第三部中甲醛殘留量測(cè)定方法對(duì)濃縮前后病毒液中甲醛含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 試藥與儀器 甲醛(含量36.0%)；醋酸、醋酸銨、乙酰丙酮、無(wú)水乙醇、UV2501分光光度計(jì)(島津公司)。中空纖維超濾膜截留分子量10KD(北京旭邦膜設(shè)備有限責(zé)任公司)。

1.2 樣品 禽流感(H9N1)病毒液三批：20110203、20110204、20110205，分別加0.1%、0.2%、0.3%病毒液滅活后，用北京旭邦截留分子量為10KD的中空纖維超濾膜進(jìn)行4倍濃縮，取濃縮前、濃縮中、濃縮后、流出液前段、流出液中、流出液后共18個(gè)樣品。

2 試驗(yàn)方法

（1）試驗(yàn)原理：甲醛與乙酰丙酮及氨作用，生成黃色化合物二乙?；溥拎ず螅?10nm下進(jìn)行分光光度比色定量。（2）供試品溶液：用5.0ml移液管取供試品5.0ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取含量為35.9%的甲醛溶液0.2786g置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。（3）測(cè)定法：精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.5ml，分別加醋酸-醋酸銨緩沖液10ml，置60℃恒溫水浴15min，冷水冷卻5min，放置20min后，在410nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按照下式計(jì)算：

3 試驗(yàn)結(jié)果

見(jiàn)附表。

附表 H9N1病毒液中滅活劑 (%)

批號(hào)濃縮前濃縮中濃縮后流出液前流出液中流出液后 201000160.110.130.120.140.110.12 201000170.190.210.220.210.230.20 201000180.300.320.310.290.310.31

4 討論

中空纖維超濾膜是超濾技術(shù)中最為成熟與先進(jìn)的一種技術(shù)?？讖揭阅芙亓粑镔|(zhì)的分子量表達(dá)，截留分子量可達(dá)幾千至幾十萬(wàn)。被過(guò)濾液在中空纖維外側(cè)或內(nèi)腔加壓流動(dòng)，分別構(gòu)成外壓式與內(nèi)壓式。超濾是動(dòng)態(tài)過(guò)濾過(guò)程，被截留物質(zhì)可隨濃縮排除，不致堵塞膜表面，可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)行。廣泛用于凈水、溶液分離和濃縮等領(lǐng)域。

甲醛分子量為30，和水分子量相差不多，均屬于小分子物質(zhì)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于10KD的截留分子量，和水分子一樣在溶液中呈隨機(jī)分布：一部分留在濃縮液中，一部分隨流出液排出。因此濃縮前后甲醛含量差異不大。

5 結(jié)論

濃縮前后病毒液中甲醛含量基本不變。濃縮不會(huì)造成病毒液中甲醛含量大幅上升，對(duì)于高倍濃縮疫苗或多聯(lián)苗的制備有很好的指導(dǎo)意義。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典編委會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010.

（2012–05–24）

S852.65

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1007-1733(2012)09-0021-01