林 濤 楊海燕 劉天行 辛志宏

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院1，南京 210095)

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院2，烏魯木齊 830052)

產(chǎn)油脂真菌PJX－29抗氧化活性成分研究

林 濤1楊海燕2劉天行1辛志宏1

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院1，南京 210095)

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院2，烏魯木齊 830052)

對一株紅樹林來源的產(chǎn)油脂真菌PJX－29發(fā)酵產(chǎn)物中的抗氧化成分進行分離和鑒定。利用溶劑萃取、硅膠柱色譜及制備HPLC等分離手段從發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到2個甘油酯類化合物和其他5個化合物，通過理化性質(zhì)分析及波譜學(xué)方法鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)分別為:十五碳單甘油酯，9″，12″－十七碳二烯酸，十六烷基甘油酯，6－戊基－α－吡喃酮，4，6－二羥基－9，10－二甲基苯乙酮，雙(8－8'－7羥基－4－甲氧基－5－甲基香豆素)，對羥基苯甲酸，6－氨基苯甲醛，并以DPPH法評價了化合物的抗氧化活性，結(jié)果表明化合物1，化合物2 和化合物6 具有較強的抗氧化活性，其 IC50分別為:(11.38 ±0.61)、(9.33 ±0.80)和(11.12 ±1.01) μg/mL。

產(chǎn)油脂真菌 發(fā)酵產(chǎn)物 抗氧化活性

微生物油脂(microbial oils)，也稱為單細胞油脂，是很多微生物如霉菌、細菌、酵母菌及藻類等在一定條件下產(chǎn)生的油脂，其組成大多與一般植物油脂類似，為C16、C18脂肪酸。早在20世紀(jì)40年代，微生物油脂的研究就已經(jīng)開始［1］，到80年代初，日本的研究已初現(xiàn)成果，成功的利用發(fā)酵法生產(chǎn)長鏈二元酸［2］，此后英國在1986年首先推出微生物油脂γ－亞麻酸生產(chǎn)的功能性飲料、保健食品等產(chǎn)品［3］。90年代后，各國對微生物來源的功能性油脂的研究與開發(fā)更加關(guān)注，且從真菌、細菌、酵母和藻類中陸續(xù)尋找到能產(chǎn)生活性油脂的新菌種，為功能性油脂的大量生產(chǎn)提供了技術(shù)依據(jù)［4］。然而，已發(fā)現(xiàn)的能夠產(chǎn)生油脂的微生物種類依然有限，且大多都來源于陸地，產(chǎn)量較低。近年來，隨著海洋科學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)海洋微生物能夠產(chǎn)生化學(xué)與活性多樣的化合物，其中，包括產(chǎn)生功能性油脂的藻類和微生物［5］，因此，從海洋微生物中探尋功能性油脂成為現(xiàn)代食品科學(xué)的發(fā)展方向之一，而紅樹林則是發(fā)現(xiàn)海洋微生物的重要來源之一。

紅樹林是指位于熱帶、亞熱帶海岸潮間帶的一種特殊的木本植物群落，處于陸地生態(tài)系統(tǒng)與海洋生態(tài)系統(tǒng)的過渡帶，是海岸帶極為獨特的生態(tài)景觀，孕育了豐富多樣的微生物資源，從而能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)多樣、生物活性獨特的特殊代謝產(chǎn)物［6］，如源于紅樹林的微藻破囊壺－裂殖壺菌屬(thraustochytrid－Schizochytrium)不僅產(chǎn)生三酰甘油和卵磷脂，而且還產(chǎn)生n－3多不飽和脂肪酸DHA［7］，因此，紅樹林來源的海洋微生物是盛產(chǎn)油脂的重要菌種資源。

本研究以分離自紅樹林泥土的產(chǎn)油脂真菌PJX－29為研究對象，通過大量發(fā)酵、有機溶劑提取和分離純化，得到發(fā)酵產(chǎn)物中的單體化合物，應(yīng)用現(xiàn)代波譜學(xué)手段對化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，采用DPPH法評價了這些化合物的抗氧化活性，以期為尋找具有抗氧化活性的天然功能性油脂開辟一條新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅樹林泥土:采自中國南海(海南省海口市);Sephadex LH－20:Pharmacia公司;硅膠H(100～400目):青島海洋化工廠產(chǎn)品;活性測試試劑 DPPH(1，1－diphenyl－2－picrylhydrazyl)、VC:美國 Sigma公司;常規(guī)提取分離試劑乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、氯仿等均為工業(yè)用化學(xué)純產(chǎn)品，重蒸后使用，液相色譜甲醇為色譜純。

1.2 主要儀器

Waters 600分析型高效液相色譜(Waters 996二極管陣列檢測器，Empower 2工作站，ODS－C18柱:5!m，4.6 × 250):美國Waters公司;Waters 1525 制備型高效液相色譜(Waters DAD檢測器，WatersBreeze工作站，ODS－C18柱:5!m，10 × 250):美國Waters公司;Mariner API－TOF質(zhì)譜儀:美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司;JEOL JNM－ECP600核磁共振儀:日本JEOL公司;Spectra CountTM酶標(biāo)儀:美國Packard公司;EYELAN－N旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:日本東京理化器械株式會社;TC－C－100R搖床:日本高崎科學(xué)器械株式會社;潔凈工作臺:蘇凈集團安泰公司。

1.3 菌株的分離與培養(yǎng)

1.3.1 菌株來源

真菌菌株P(guān)JX－29是本實驗室從采自中國南海(海南省?？谑?紅樹林泥土中分離得到的。

菌株分離采用PDA固體培養(yǎng)基:土豆20%，葡萄糖2%，瓊脂2%，食鹽3%，氯霉素0.1%。

菌株分離:在無菌操作臺中將泥土用無菌水潤濕成糊狀，取適量加入PDA平板上，涂布，平行3個重復(fù)，于培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)。培養(yǎng)3～5 d后，挑取菌落邊緣長出的菌絲，劃線轉(zhuǎn)接于PDA平板上，經(jīng)2～3次劃線分離，得到形態(tài)完全一致的單菌落，4℃下冰箱保藏。

1.3.2 發(fā)酵培養(yǎng)

采用真菌二號液體培養(yǎng)基:麥芽糖2%，味精1% ，KH2PO40.05%，MgSO4· 7H2O 0.03%，葡萄糖1%，酵母膏0.3%，玉米漿0.1%，甘露醇2%，CaCO32% ，pH 6.5，陳海水配制。

將冰箱保藏的菌株P(guān)JX－29接種于PDA斜面培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中活化培養(yǎng)5～8 d后，接種到盛有300 mL液體培養(yǎng)基的三角培養(yǎng)瓶中，共發(fā)酵30 L于28℃溫度下?lián)u床培養(yǎng)10 d。

1.4 發(fā)酵產(chǎn)物的提取分離

1.4.1 菌株P(guān)JX－29發(fā)酵產(chǎn)物的提取

發(fā)酵培養(yǎng)液30 L經(jīng)布氏漏斗過濾，分為菌絲體和發(fā)酵液。發(fā)酵液用等量的乙酸乙酯萃取3次，減壓濃縮至干，得到發(fā)酵液的乙酸乙酯粗提濃縮物。菌絲體用丙酮－水(8∶1)溶液浸泡提取1 h，過濾后的菌絲體再用丙酮－水(8∶1)溶液重復(fù)提取2次后，合并提取液，減壓濃縮至不含丙酮后，用等量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液并減壓濃縮至干，得到菌絲體的乙酸乙酯提濃縮物。合并發(fā)酵液與菌絲體的乙酸乙酯提濃縮物，用適量的甲醇－水(9∶1)溶解后，加入等量的石油醚萃取3次后，分別得到石油醚層和甲醇水層，分別減壓濃縮至干。

1.4.2 菌株P(guān)JX－29發(fā)酵產(chǎn)物的分離

用氯仿－甲醇(1∶1)溶解甲醇水層的濃縮粗提物(10 g)，然后拌入35 g 100～200目的硅膠，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽干溶劑后裝入已裝好200～300目硅膠的減壓柱中，以石油醚－氯仿、氯仿－甲醇為溶劑進行梯度洗脫，每個梯度用1 000 mL溶劑洗脫，收集不同組分，分別減壓濃縮至干，通過薄層色譜(TLC)將相同的組分合并，最終得到7個組分:記為 Fr.1～Fr.7。

組分 Fr.6經(jīng)過 Sephadex LH－20純化得到Fr.6 －2(200 mg)。Fr.6 －2 經(jīng)過硅膠柱分離，石油醚 －丙酮(15∶1)洗脫，再通過半制備HPLC分離(90%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物 1(15 mg、tR=17 min)和化合物2(15 mg、tR=20 min)。

組分Fr.5經(jīng)過Sephadex LH－20純化，半制備型HPLC分離(60%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物 3(50 mg、tR=10 min)。

組分 Fr.4經(jīng)過 Sephadex LH－20純化得到Fr.4 －2(340 mg)、Fr.4 －3(500 mg)。Fr.4 －2 經(jīng)過硅膠柱分離，石油醚－丙酮(15∶1)洗脫，再通過半制備型HPLC分離制備(55%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物 4(20 mg、tR=13 min);Fr.4 －3 經(jīng)過硅膠柱分離，石油醚－丙酮(10∶1)洗脫，再通過半制備型HPLC分離制備(65%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物 5(10 mg、tR=13 min)。

組分 Fr.3經(jīng)過 Sephadex LH－20純化得到Fr.3 －3(400 mg)、Fr.3 －4(450 mg)。Fr.3 －3 經(jīng)過硅膠柱分離，石油醚－丙酮(5∶1)洗脫，再通過半制備型HPLC分離(65%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物6(10 mg、tR=11 min);Fr.3 －4 經(jīng)過硅膠柱分離，石油醚－丙酮(5∶1)洗脫，再通過半制備型HPLC分離(65%甲醇－水、4 mL/min)得到化合物7(13 mg、tR=15 min)。

1.5 抗氧化活性測定

抗氧化活性測定采用DPPH法［8］。

1.5.1 抗氧化活性的測定原理

DPPH的乙醇溶液在可見光下為深紫色，在517 nm處有較強吸收，自由基清除劑能與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，且褪色程度和與其配對的電子數(shù)成比例關(guān)系，因而可用分光光度法進行定量分析其自由基清除的程度，該方法快速、簡便，是目前評價抗氧化活性的常用方法之一。

1.5.2 抗氧化活性的測試方法

分別將3 mL 1×10－4mol/L的DPPH乙醇溶液與0.1 mL不同濃度的樣品溶液混合均勻，在室溫條件下暗室反應(yīng)30 min。用乙醇作為空白對照，在517 nm下測定吸光度(A1)，同時將0.1 mL樣品溶液與3.0 mL 乙醇混合，測定吸光度(A2)，0.1 mL 乙醇與3.0 mL DPPH乙醇溶液混合，測定吸光度(A0)。陽性對照為VC。

1.5.3 抗氧化活性的評價方法

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物的結(jié)構(gòu)解析

化合物1:無色油狀物，陽離子低分辨ESI－MS在m/z 317［M+H］+處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物的相對分子質(zhì)量為316，該化合物1H－NMR譜給出丙三醇自旋體系的特征共振信號:δ 4.20(2H，m)，3.81(1H，m)，3.56(2H，m)，說明該化合物為單取代的丙三醇結(jié)構(gòu)。1H－NMR譜在高場區(qū)(δ1.13～1.68)出現(xiàn)長鏈烷烴信號，因此初步推斷該化合物為單甘油酯，結(jié)合文獻數(shù)據(jù)確定該化合物為十五碳單甘油酯［9］，結(jié)構(gòu)如圖1所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H － NMR(600 MHz，CDCl3)δ:4.20(2H，m，H －1)，3.81(1H，m，H －2)，3.56(2H，m，H －3)，2.33(2H，m，H －2')，1.68(2H，m，H －3')，1.45～ 1.17(20H，m，H － 4'～ 13')，1.14(2H，m，H －14')，0.86(3H，m，H －15')。

圖1 化合物1的結(jié)構(gòu)

化合物2:無色油狀物，陽離子低分辨ESI－MS在m/z 579［M+H］+處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物的相對分子質(zhì)量為578，由1H－NMR中 δ 4.20、3.91和3.60，并與化合物1的波譜數(shù)據(jù)進行比較，可知該化合物中也含有丙三醇結(jié)構(gòu)，1H－NMR譜在高場區(qū)(δ1.25～2.78)出現(xiàn)長鏈烷烴信號，δ5.35 處出現(xiàn)雙鍵信號，因此推測該化合物為二取代的含有雙鍵的甘油酯，根據(jù)文獻［10］并結(jié)合化合物1可確定該化合物為9″，12″－十七碳二烯酸，十六烷基甘油酯，結(jié)構(gòu)如圖2所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H － NMR(600 MHz，CDCl3) δ:0.88(3H，t，J=6.9 Hz，H － 16')，0.88(3H，t，J=6.9 Hz，H －17″)，1.31(2H，m，H －15')，1.31(2H，m，H －16″)，1.26(16H，m，H －5'～12')，1.29(14H，m，H －3'，13'，14，4″～ 7″，15″)，2.35(4H，m，H － 2'，2″)，3.61(1H，dd，J=5.8，11.4Hz，H － 3)，3.69(1H，dd，J=4.0，11.4Hz，H －3)，4.16(1H，dd，J=6.6，11.2 Hz，H－1)，4.21(1H，dd，J=4.4，11.5 Hz，H －1)，5.35(1H，m，H －2)，5.35(4H，m，H －9″，10″，12″，13″);13C － NMR(150 MHz，CDCl3)δ:14.2(C －16'，17″)，22.7(C －15'，16″)，25.7(C －3'，3″，11″)，27.3(s，C －14″)，27.8(s，C－8″)，29.2～29.7(C －4'～13'，4″～7″)，31.6(s，C －2')，34.2(s，C －2″)，63.4(s，C －3)，65.3(s，C －1)，71.9(s，C －2)，127.9(s，C －10″)，130.1(s，C －12″)，130.3(s，C －13″)，132.5(s，C － 9″)，167.8(s，C － 1″)，174.4(s，C －1')。

圖2 化合物2的結(jié)構(gòu)

化合物3:淺黃色油狀物，陽離子低分辨ESIMS在m/z 167［M+H］+處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物相對分子質(zhì)量為166，結(jié)合1H－NMR和13CNMR，確定分子式為C10H14O2，DEPT譜顯示化合物含有1個甲基、4個亞甲基、3個次甲基和2個連氧碳，碳譜中 δC166.8推測可能為羰基信號，且 δC143.9、113.0 和102.7 為芳香區(qū)域的碳，通過分子式計算不飽和度為4，可推測該化合物中可能含有1個α－吡喃酮基，再結(jié)合上面推測的1個甲基和4個亞甲基，并與文獻數(shù)據(jù)比較［11－12］，確定化合物3為6－戊基－α－吡喃酮，結(jié)構(gòu)如圖3所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H－NMR(600 MHz，CDCl3)δ:0.90(3H，t，H －5')，1.29 ～ 1.37(4H，m，H － 3'，H －4')，1.67(2H，m，H －2')，2.48(2H，t，H －1')，6.00(1H，d，J=6.6 Hz，H －5)，6.15(1H，d，J=9.4 Hz，H － 3)，7.28(1H，dd，J=6.6，9.3 Hz，H － 4);13C － NMR(150 MHz，CDCl3)δ:13.9(s，C －5')，22.3(s，C －4')，26.6(s，C －2')，31.2(s，C －3')，33.8(s，C －1')，102.7(s，C －5)，113.0(s，C －3)，143.9(s，C －4)，163.0(s，C －2)，166.8(s，C －6)。

圖3 化合物3的結(jié)構(gòu)

化合物4:無色針狀物，陰離子低分辨ESI－MS在m/z 179［M－H］－處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物相對分子質(zhì)量為180，結(jié)合1H－NMR和13CNMR，確定分子式為 C10H12O3，δH2.02、2.14 和 2.5推測為甲基信號，δH7.52 和碳譜中 δC130.8、116.4、112.6、110.8信號，結(jié)合分子式計算出不飽和度為4，提示該化合物中含有一個苯環(huán)結(jié)構(gòu)，δH9.58，12.92出現(xiàn)兩個活潑氫信號，推測為—OH信號，碳譜中δC161.2、161.1 提示為連氧碳，δC203.6 提示為羰基碳，再結(jié)合氫譜和碳譜，并與文獻數(shù)據(jù)比較［13－14］，確定化合物4為4，6－二羥基－9，10－二甲基苯乙酮，結(jié)構(gòu)如圖4所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H －NMR(600 MHz，DMSO －d6) δ:2.02(3H，s，H －9)，2.14(3H，s，H －10)，2.52(3H，s，H －1)，7.52(1H，s，H － 8)，9.58(1H，s，6 － OH)，12.92(IH，s，4 － OH);13C －NMR(150 MHz，DMSO － d6)δ:8.7(s，C － 10)，16.7(s，C － 9)，26.7(s，C － 1)，110.8(s，C －3)，112.7(s，C －5)，116.4(s，C －7)，130.8(s，C －8)，161.1(s，C －4)，161.2(s，C －6)，203.6(s，C －2)。

圖4 化合物4的結(jié)構(gòu)

化合物5:無色油狀物，陽離子低分辨ESI－MS在 m/z 411［M+H］+、433［M+Na］+、陰離子低分辨ESI－MS在m/z 409［M－H］－處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物的相對分子質(zhì)量為410。在1H－NMR中一共出現(xiàn)4個單峰，結(jié)合13C－NMR推測為1個甲基，1個甲氧基，2個芳香區(qū)域的氫，13C－NMR中一共出現(xiàn)11個碳信號，結(jié)合DEPT譜推測其分別為7個季碳，2個次甲基和2個甲基，再根據(jù)相對分子質(zhì)量推測該化合物可能為對稱結(jié)構(gòu)，分子式可能為C22H18O8，結(jié)合化合物分子質(zhì)量計算出不飽和度為14，推測該化合物中至少含有4個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在碳譜的低場部分提示含有—OH和羰基的信號，通過與文獻數(shù)據(jù)比較［15－16］，確定化合物5為雙(8－8'－7羥基－4－甲氧基－5－甲基香豆素)，結(jié)構(gòu)如圖5所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H－NMR(600 MHz，DMSO － d6) δ:2.59(3H，s，H － 12/12')，3.93(3H，s，H － 11/11')，5.56(1H，s，H － 3/3')，6.71(1H，s，6 －H/H')，10.27(1H，s，7/7'－ OH);13C －NMR(150 MHz，DMSO － d6)δ:23.3(s，C －12/12')，56.6(s，C －11/11')，86.5(s，C －3/3')，105.8(s，C －10/10')，106.1(s，C － 8/8')，115.7(s，C － 6/6')，137.1(s，C － 5/5')，154.0(s，C － 4/4')，158.7(s，C －7/7')，161.9(s，C －9/9')，169.8(s，C －2/2')。

圖5 化合物5的結(jié)構(gòu)

化合物6:無色油狀物，陽離子低分辨ESI－MS在m/z 139［M+H］+處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物的相對分子質(zhì)量為138，在1H－NMR中有一組雙二重峰 δH7.79(d，J=8.8 Hz，1H)和 6.83(d，J=8.3 Hz 1H)，提示為苯環(huán)上的對位取代，在低場δH11.3左右出現(xiàn)活潑氫信號，推測為－OH信號，結(jié)合13CNMR中低場δC167.8處有1個連氧碳信號，推測該化合物中含有一個羧基信號。在低場δC162.1處有一個碳信號，推測該碳原子位于苯環(huán)上且與羥基相連，通過與文獻數(shù)據(jù)比較［17－18］，確定化合物 6為對羥基苯甲酸，結(jié)構(gòu)如圖6所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)δ:7.79(2H，d，J=8.8 Hz，H －2，6)，6.83(2H，d，J=8.3 Hz，H － 3，5)，11.37(2H，brs，4，7 － OH);13C －NMR(150 MHz，DMSO － d6)δ:115.6(s，C －3，5)，122.1(s，C －1)，132.1(s，C － 2，6)，162.1(s，C －4)，167.8(s，C －7)。

圖6 化合物6的結(jié)構(gòu)

化合物7:淡黃色油狀物，陽離子低分辨ESIMS在m/z 122［M+H］+處給出準(zhǔn)離子峰，提示該化合物的相對分子質(zhì)量為121，1H－NMR中 δ 7.42、7.27和7.16處出現(xiàn)4個氫信號，并根據(jù)化學(xué)耦合常數(shù)判斷其為苯環(huán)上的氫，根據(jù)峰裂分情況(2個二重峰，2個三重峰)，可知其為鄰位取代的苯的衍生物，通過與文獻數(shù)據(jù)［19－20］比較，可確定該化合物為6－氨基苯甲醛，結(jié)構(gòu)如圖7所示。該化合物的詳細核磁數(shù)據(jù)如下所示:1H－NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.43(1H，d，J=8.2 Hz，H －2)，7.27(1H，m H －4)，7.18(1H，m，H － 3)，7.16(1H，d，J=7.7 Hz，H －5);13C － NMR(150 MHz，CD3OD)δ:191.4(s，C －1')，141.3(s，C －6)，130.1(s，C －4)，162.1(s，C －4)，126.9(s，C －2)，124.1(s，C －1)，121.1(s，C －3)，111.9(s，C －5)。

圖7 化合物7的結(jié)構(gòu)

2.2 化合物的抗氧化活性

采用DPPH法對菌株P(guān)JX－29發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到的7個化合物進行抗氧化活性評價，測定結(jié)果如表1所示。由表1可知，化合物1～化合物7對DPPH均具有一定的清除能力，特別是化合物1、化合物2和化合物6具有較強的抗氧化活性，其IC50分別為(11.38 ±0.61)、(9.33 ±0.80)和(11.12 ±1.01)μg/mL，說明甘油酯類化合物具有較強的抗氧化活性，這可能是由于甘油酯類化合物側(cè)鏈中含有不飽和雙鍵的緣故。

表1 7個化合物的抗氧化活性評價結(jié)果(以IC50計)

抗氧化活性物質(zhì)常常在自由基清除方面發(fā)揮著重要的作用。在正常的生理情況下，機體內(nèi)的自由基不斷的產(chǎn)生并被不斷清除，處于動態(tài)平衡，低濃度的自由基不僅可以保護機體，還具有獨特的生理功能，但在病理和日益衰老的情況下，體內(nèi)的自由基通常會代謝紊亂，產(chǎn)生量遠遠大于清除量，機體內(nèi)的動態(tài)平衡被破壞，氧化應(yīng)激過度而損傷機體，產(chǎn)生不良的生物學(xué)效應(yīng)［21－22］，如過量的自由基會破壞體內(nèi)的生物大分子脂質(zhì)、DNA、蛋白質(zhì)等，使機體發(fā)生病變［23］。研究已經(jīng)證實自由基與衰老［24］、高血壓［25］、癌癥［26］、炎癥［27］等疾病有著密切關(guān)系，因此，尋找和開發(fā)天然抗氧化劑一直是食品科學(xué)研究的重要內(nèi)容之一，而油脂，特別是不飽和油脂，作為人體日常必須攝入的一類物質(zhì)，對保護人體健康和維持機體生理功能的正常發(fā)揮非常重要。

傳統(tǒng)生產(chǎn)油脂的原料主要來源于植物的種子和果實，但受植物生長情況、產(chǎn)量與收獲季節(jié)制約，而微生物來源的油脂可通過發(fā)酵技術(shù)大量生產(chǎn)，不受原料與季節(jié)限制，已成為功能性油脂生產(chǎn)的新途徑，特別對一些具有生物活性的不飽和油脂的生產(chǎn)具有重要意義，如γ－亞油酸、花生四烯酸、DHA、EPA等。常用的產(chǎn)油脂菌主要有乳酸菌［28］、瘤胃菌［29］、丙酸菌［30］，以及其他一些通過基因改造產(chǎn)生的工程菌種等［31－33］，但是現(xiàn)有的產(chǎn)油脂微生物種類相對較少，油脂產(chǎn)量較低，且大多來源于陸地。本研究從海洋紅樹林來源真菌PJX－29的發(fā)酵產(chǎn)物中分離到7個化合物，其中2個甘油酯類化合物和1個苯的衍生物類化合物具有較強的抗氧化活性，說明紅樹林來源真菌能夠產(chǎn)生功能性油脂與活性化合物，這為尋找產(chǎn)油脂的微生物提供了重要的資源菌和新的生產(chǎn)途徑。

3 結(jié)論

利用溶劑萃取、硅膠柱色譜及制備HPLC等分離手段從一株紅樹林來源的產(chǎn)油脂真菌PJX－29發(fā)酵產(chǎn)物中分離了2個甘油酯類化合物和其他5個化合物，通過理化性質(zhì)分析及波譜學(xué)方法鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，并以DPPH法評價了化合物的抗氧化活性，結(jié)果表明化合物1，2和6具有較強的抗氧化活性，其IC50分別為(11.38 ±0.61)、(9.33 ±0.80)和(11.12 ±1.01)μg/mL，該研究結(jié)果說明紅樹林來源的海洋真菌能夠產(chǎn)生具有抗氧化活性的功能性油脂，拓寬了海洋微生物研究的新領(lǐng)域，為進一步深入研究微生物來源的功能性油脂提供了理論基礎(chǔ)。

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The Study of Antioxidant Components from Oil Producing Fungi PJX－29

Lin Tao1Yang Haiyan2Liu Tianxing1Xin Zhihong1
(College of Food Science and Technology，Nanjing Agricultural University1，Nanjing 210095)
(College of Food Science and Pharmacy，Xinjiang Agricultural University2，Wulumuqi 830052)

The antioxidant components were isolated and identified from the fermentation product of the Oil production fungus PJX －29 derived from Ocean Mangroves.Two glyceride compounds and other five compounds were isolated with solvent extraction，silica gel column chromatography and preparative HPLC and their structures were identified as monoglycerides，9″，12″－ Heptadecadienoic acid，1 － (hydroxymethyl) － 2 － ［(1 － oxohexadecyl)oxy］ethyl ester，6－Pentyl－α －pyrone，4，6－dihydroxy－9，10－dimethylacetophenone，bis［8－8'－(7－h(huán)ydroxy－4 －methoxy－5－methylcoumarin)］，Hydroxybenzoic acid，6－Aminobenzaldehyde by physicochemical properties and spectral analyses，respectively.The antioxidant activity of the compounds were evaluated by DPPH method，the result showed that compounds 1，2 and 6 have potential antioxidant activity，and their IC50are(11.38 ±0.61)，(9.33 ±0.80)and(11.12 ±1.01) μg/mL，respectively.

oil production fungus，fermentation product，antioxidant activity

TS201.2

A

1003－0174(2012)09－0053－07

國家自然科學(xué)基金(31071586)，中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項(KYZ201118)

2011－11－27

林濤，男，1987年出生，碩士，食品營養(yǎng)與化學(xué)

辛志宏，男，1974年出生，副教授，碩士生導(dǎo)師，食品營養(yǎng)與化學(xué)