張 青，婁月芬，唐躍年（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院藥劑科，上海 2 0 0 0 9 2）

系數(shù)倍率法測(cè)定免洗手消毒液中醋酸氯己定的含量

張 青＊，婁月芬，唐躍年（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院藥劑科，上海 2 0 0 0 9 2）

目的：測(cè)定免洗手消毒液中醋酸氯己定的含量。方法：采用系數(shù)倍率法，樣品不經(jīng)分離直接測(cè)定免洗手消毒液中醋酸氯己定的含量，測(cè)定波長(zhǎng)為2 6 0、2 8 0nm。結(jié)果：醋酸氯己定檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為8～1 2μg·mL－1（r＝0.9 9 99），平均回收率為1 0 0.6 6%（RSD＝0.2 1%）。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

免洗手消毒液；醋酸氯己定；含量測(cè)定；系數(shù)倍率法

免洗手消毒液作為外用消毒劑，用于快速手清潔和消毒，是我院常用制劑，其主要由醋酸氯己定、卡波姆9 4 0、甘油、乙醇等制成。鑒于卡波姆9 4 0在紫外區(qū)有吸收，會(huì)干擾主藥醋酸氯己定的測(cè)定，筆者根據(jù)系數(shù)倍率法的原理，不經(jīng)分離直接測(cè)定醋酸氯己定的含量。結(jié)果表明本方法操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

HP-8 4 5 3紫外分光光度儀（美國(guó)惠普公司）。

免洗手消毒液（自制，批號(hào)：0 9 0 4 1 6、0 9 0 5 1 4、0 9 0 9 2 3，規(guī)格：5 0 0 mL∶0.2 5 g）；醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0 1 8 3-9 4 0 1，純度：≥9 9%）；醋酸氯己定原料藥（錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：0 7 0 3 0 2，純度：≥9 7.5%）；卡波姆9 4 0（青島美生源生物科技有限公司，批號(hào)：2 0 0 8 1 2 0 4）；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 波長(zhǎng)對(duì)的選擇

精密稱(chēng)取1 0 5℃干燥至恒重的醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品約5 0 mg，置于1 0 0 mL量瓶中，加9 5%乙醇溶解并稀釋至刻度，得溶液Ⅰ，搖勻。按處方比例，精密稱(chēng)取1 0 5℃干燥至恒重的卡波姆9 4 0約0.3 g，置于1 0 0 mL量瓶中，加入適量水，溶脹過(guò)夜，加甘油1.5 g、9 5%乙醇6 8 mL，用適量三乙醇胺調(diào)節(jié)后，加水至刻度，搖勻，得溶液Ⅱ。精密量取溶液Ⅰ、Ⅱ各1.0mL，分別加6 0%乙醇稀釋至5 0 mL。以6 0%乙醇作參比，在2 0 0～3 5 0 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，紫外吸收光譜見(jiàn)圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖1.醋酸氯己定；2.輔料Fig 1 UV spectrogram 1.chlorhexidine acetate；2.excipients

從圖1可見(jiàn)，溶液Ⅰ的最大吸收波長(zhǎng)為2 6 0 nm（即醋酸氯己定的最大吸收波長(zhǎng)），溶液Ⅱ無(wú)最大吸收峰，但在2 6 0 nm波長(zhǎng)也有吸收，可干擾醋酸氯己定的測(cè)定，故采用系數(shù)倍率法以消除干擾。根據(jù)系數(shù)倍率法的要求[1]：吸光度之差ΔA要盡可能大、吸收光譜盡可能在曲線(xiàn)平坦處和倍率系數(shù)（K值）接近1。因此選擇2 6 0、2 8 0 nm為測(cè)定和參比波長(zhǎng)。

2.2 K值的測(cè)定

精密量取溶液Ⅱ0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2mL分別置于5 0 mL量瓶中，各加冰醋酸1 mL，加6 0%乙醇稀釋至刻度，搖勻。以6 0%乙醇作參比，每種溶液均在2 6 0、2 8 0 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A260、A280，按倍率系數(shù)K＝A260/A280計(jì)算平均值K＝

1.1 2 9 8，RSD＝0.5 0%（n＝7）。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

精密量取溶液Ⅰ0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 mL分別置于5 0 mL量瓶中，加6 0%乙醇稀釋至刻度，搖勻。以6 0%乙醇作參比，每種溶液均在2 6 0、2 8 0 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A260、A280，并計(jì)算吸光度差值ΔA＝A260－KA280，可得ΔA與濃度（c）的回歸方程：ΔA＝0.0 2 9 8 2 c+0.0 0 2 4 3（r＝0.9 9 9 9，n＝5）。結(jié)果顯示，醋酸氯己定檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為8～1 2μg·mL－1。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一樣品溶液適量，共5份，平行測(cè)定。結(jié)果顯示，醋酸氯己定含量的RSD＝0.3 8%（n＝5），表明該方法精密度良好，能滿(mǎn)足含量測(cè)定的要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液適量，分別于0、2、4、8、2 4h依次測(cè)定。結(jié)果顯示，醋酸氯己定含量的RSD＝0.5 5%（n＝5），表明在室溫下樣品溶液在2 4 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿(mǎn)足含量測(cè)定的要求。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取1 0 5℃干燥至恒重的醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品適量，按處方比例制備模擬溶液，精密量取0.8、1.0、1.2mL分別置于5 0 mL量瓶中，各加冰醋酸1 mL，加6 0%乙醇稀釋至刻度，搖勻。以6 0%乙醇作參比，在2 6 0、2 8 0 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A260、A280，計(jì)算ΔA，并代入回歸方程計(jì)算濃度及回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.7 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，精密量取1.0 mL分別置于5 0 mL量瓶中，各加冰醋酸1 mL，加6 0%乙醇稀釋至刻度，搖勻。以6 0%乙醇作參比，在2 6 0、2 8 0 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A260、A280并計(jì)算ΔA，代入回歸方程計(jì)算醋酸氯己定含量，結(jié)果3批樣品中醋酸氯己定含量分別為標(biāo)示量的1 0 2.6 6%、1 0 1.2 8%、1 0 2.0 3%。

3 討論

應(yīng)用等吸收雙波長(zhǎng)消去法時(shí)，干擾組分的吸收光譜中至少需要有1個(gè)吸收峰/谷，這樣才有2個(gè)波長(zhǎng)處存在等吸光度值。如干擾組分的吸收光譜中找不出等吸收波長(zhǎng)，就不能用此法，而系數(shù)倍率法可克服這一困難[2]。在應(yīng)用系數(shù)倍率法時(shí)，應(yīng)注意對(duì)K值的選擇，防止因K值過(guò)大而使信噪比減小，影響ΔA的穩(wěn)定性。同時(shí)選擇2個(gè)波長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)避免在光譜曲線(xiàn)的“陡坡”上測(cè)定，并使2個(gè)波長(zhǎng)保持合理的距離[1]。

卡波姆為丙烯酸鍵合丙基蔗糖或季戊四醇烯丙醚的高分子聚合物，分子中有大量的羧酸基，為引濕性很強(qiáng)的白色疏松狀粉末。在試驗(yàn)初期的樣品處理過(guò)程中筆者發(fā)現(xiàn)，按處方比例，將各組分逐一用6 0%乙醇溶解、稀釋、紫外掃描，各組分在2 6 0 nm波長(zhǎng)下的吸光度之和不等于樣品在2 6 0 nm波長(zhǎng)下的吸光度，且有較大的誤差，這是與吸光光度法的基本定律“朗伯-比爾定律”相背離的。在排除操作上可能存在的問(wèn)題后，發(fā)現(xiàn)溶液中的溶質(zhì)卡波姆可因濃度改變而有離解、締合、與溶劑間發(fā)生作用等原因而發(fā)生偏離定律的現(xiàn)象[2]；且卡波姆所形成的膠體亦可引起入射光的散射，對(duì)透射光的強(qiáng)度有直接影響，進(jìn)而使吸光度產(chǎn)生偏差。

于是將樣品稀釋液進(jìn)行超聲處理后，但仍未見(jiàn)明顯效果?？紤]到可能是因?yàn)樘幏街械娜掖及芬咽箍ú返慕Y(jié)構(gòu)發(fā)生改變，即羧酸基已被反應(yīng)，超聲未能增加其解離或溶解。于是采用化學(xué)降解的方法[3]，加入適量酸類(lèi)降解試劑冰醋酸，發(fā)現(xiàn)能有效解決上述現(xiàn)象。需要注意的是，不能加入鹽酸作為酸類(lèi)降解試劑，因?yàn)槎邥?huì)反應(yīng)生成鹽酸氯己定，而后者是極微溶于水和乙醇的，會(huì)更大地影響樣品的紫外吸收。而且主藥本身就是氯己定的醋酸鹽，加入冰醋酸不會(huì)對(duì)主藥產(chǎn)生任何物理和化學(xué)上的改變。

卡波姆在水中溶脹的過(guò)程中，可適當(dāng)攪拌以促進(jìn)溶脹，但是由于其較大的黏度以及疏水性，會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡。制劑制備時(shí)可采用“酸堿法”[4]，即先將其調(diào)節(jié)為pH 2.5以下，膠體黏度降低成液體，氣泡則自動(dòng)消失，再調(diào)節(jié)為pH 6～1 1時(shí)成凝膠，可提高制劑質(zhì)量，使凝膠更加細(xì)膩。該制劑處方中添加的甘油可促進(jìn)卡波姆浸潤(rùn)溶脹，且具有保濕作用[5]。

本方法將除醋酸氯己定以外的其他組分均作為一個(gè)整體去確定K值，直接消除吸收干擾，無(wú)需進(jìn)行分離，有一定的創(chuàng)新意義；且操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 馬廣慈.藥物分析方法與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，1 9 9 9：2 4 9-2 5 1.

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[3] 高素蓮，周寧國(guó).現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)——在高分子材料研究中的應(yīng)用[M].合肥：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，2 0 0 7：2 4 2-2 4 3.

[4] 梅清華，勵(lì)石寒，高 玲.卡波姆凝膠制備的新方法[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2 0 0 6，2 6（1）：8 2.

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Content Determination of Chlorhexidine Acetate in Wash-free Antiseptic Lotion by Coefficient Multiplying Ratio Spectrophotometry

ZHANG Qing，LOU Yue-fen，TANG Yue-nian
（Dept.of Pharmacy，Xinhua Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 2 0 0 0 9 2，China）

OBJECTIVE：To determine the content of chlorhexidine acetate in Wash-free antiseptic lotion.METHODS：The content of chlorhexidine acetate was directly determined at 2 6 0nm and 2 8 0nm by coefficient multiplying ratio spectrophotometry without preliminary separation.RESULTS：The linear range of chlorhexidine acetate was 8～1 2μg·mL－1（r＝0.9 9 99）with an recovery of 1 0 0.6 6%（RSD＝0.2 1%）.CONCLUSION：The method is proved to be simple，rapid，accurate and applicable for the quality control of wash-free antiseptic lotion.

Wash-free antiseptic lotion；Chlorhexidine acetate；Content determination；Coefficient multiplying ratio spectrophotometry

R9 2 7.2；R9 7 9.7

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）3 3-3 1 2 9-0 2

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.3 3.2 2

2 0 1 1-0 9-1 0

2 0 1 2-0 2-1 0）