方若儀,邵曉梅

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,杭州 310053;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)針灸神經(jīng)生物學(xué)研究室,杭州 310053)

現(xiàn)今,風(fēng)濕痹證是臨床常見(jiàn)病癥,由于患者感受寒邪、陽(yáng)氣不足,寒濕瘀阻的痛痹尤為顯著,包括類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等疾病。一般表現(xiàn)以肢體關(guān)節(jié)疼痛為主、病程長(zhǎng)、關(guān)節(jié)功能障礙等為特點(diǎn),因而又稱痛痹或寒痹。由于西藥治療以非甾體類(lèi)抗炎藥治療為主,但多伴有嚴(yán)重的副反應(yīng)。中醫(yī)藥已廣泛用于治療痛痹,治療原則有“活血化瘀”法、“行氣止痛”法、“清熱化痰”法、“溫經(jīng)通絡(luò)”法等,但基于“寒則溫之”的溫通法治療痛痹仍缺少足夠的研究,因此在痛痹的治療中難以充分發(fā)揮“寒則溫之”的治療特色與優(yōu)勢(shì)。本研究通過(guò)建立痛痹大鼠關(guān)節(jié)炎模型,觀察在不同中醫(yī)治法和療法下,對(duì)實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎的炎癥和疼痛程度等的影響,探討“寒則溫之”在實(shí)驗(yàn)性痛痹治療中的應(yīng)用效果與優(yōu)勢(shì),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與處理

46只 Wistar大鼠雄性,[(130±10)g]隨機(jī)分為空白組、模型組、消炎痛組、中藥組、艾灸組,空白組10只,其余各組均9只。消炎痛組在造模3 d后給予消炎痛灌胃,劑量3 mg/2 mL/只;中藥組在造模3 d后給予中藥(附子桂枝湯方)灌胃,劑量 2 mg/ 2 mL/只;艾灸組造模3 d后開(kāi)始艾條溫和灸治療,艾條直徑0.5 cm,取大椎、命門(mén)穴,艾灸距離2 cm,艾灸時(shí)間20 min/穴。每日治療1次,共治療7 d。空白對(duì)照組和模型組大鼠不作任何處理。

1.2 造模方法

將實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)于室溫22℃、濕度65%的環(huán)境1星期,并于每日下午置冰浴[(2±1)℃]1 h,空白組大鼠不作冰浴處理;1星期后,將弗氏完全佐劑(Complete Freund's Adjuvant,CFA,美國(guó)Sigma公司)注射至大鼠右側(cè)后足爪足跖皮下(0.1 mL/只),繼續(xù)置于同樣實(shí)驗(yàn)環(huán)境中3 d,建立實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎痛痹模型。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 足跖腫脹

本研究在造模前、造模后、治療3 d后、治療7 d后分別檢測(cè)各組大鼠的足跖腫脹度。以容積測(cè)定法測(cè)定CFA大鼠足跖腫脹度。以大鼠足跖掌側(cè)毛際處作為浸入水中的標(biāo)記線,固定大鼠,將足爪浸入足跖容積測(cè)量?jī)x內(nèi),測(cè)量并記錄大鼠足跖部浸入水中的體積(mL)。造模后不同時(shí)期測(cè)定的足跖體積與造模前測(cè)定的足跖體積之間的差值即為足跖腫脹度。

1.3.2 機(jī)械痛閾

采用動(dòng)態(tài)足底測(cè)量?jī)x檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)大鼠造模前、造模后、治療3 d后、治療7 d后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的患側(cè)縮腿閾(PWTs)作為大鼠機(jī)械痛閾的指標(biāo)。測(cè)量前,實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)環(huán)境2 d;測(cè)量時(shí),待大鼠安靜后,將類(lèi)似Von Frey絲的金屬絲(直徑0.5 mm)置于大鼠患側(cè)足底中央,以2.5 g/s的速率遞增,直至引發(fā)大鼠逃逸反應(yīng)(縮腿),這時(shí)儀器顯示的數(shù)字為大鼠的 PWTs,最大刺激力量50 g;連續(xù)測(cè)量4次,每次間隔3 min,取平均值。

1.3.3 熱疼痛縮足閾潛伏期

采用足底測(cè)試儀檢測(cè)造模前、造模后、治療 3 d后、治療7 d后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組實(shí)驗(yàn)大鼠足底對(duì)紅外熱刺激的反應(yīng)。測(cè)量前,大鼠適應(yīng)性訓(xùn)練2 d。測(cè)量時(shí),待大鼠安靜后,聚焦紅外光源于動(dòng)物足底(32I.R.intensity),按下開(kāi)關(guān),等待動(dòng)物縮回受測(cè)爪,儀器自動(dòng)記錄紅外光強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間(以 s計(jì)),即為熱疼痛縮足閾潛伏期。連續(xù)測(cè)量3次,每次間隔3 min,取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。方差齊性者,采用單因素方差分析,方差不齊者,比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)和Dunnett-t檢驗(yàn)。均以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 研究結(jié)果

2.1 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠足跖腫脹度的影響

采用足跖容積測(cè)量法檢測(cè)各組大鼠造模前、造模后、治療3 d后、治療7 d后的足跖腫脹度。由表1可見(jiàn),與空白組比較,造模后、治療3 d后和治療7 d后各組足跖腫脹度明顯增高,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療7 d后,中藥組大鼠足跖仍明顯腫脹,消炎痛組和艾灸組與中藥組比較明顯下降,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠足跖腫脹度的影響 (s,mL)

表1 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠足跖腫脹度的影響 (s,mL)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與中藥組比較2)P＜0.05;與模型組比較3)P＜0.05

組別 n 造模前 造模后 治療3 d后 治療7 d后空白組 10 0.79±0.05 0.92±0.04 1.09±0.04 1.08±0.04模型組 9 0.81±0.04 1.41±0.081) 1.65±0.131) 1.49±0.081)消炎痛組 9 0.82±0.05 1.48±0.201) 1.61±0.231) 1.46±0.171)2)中藥組 9 0.84±0.06 1.53±0.091) 1.73±0.101) 1.69±0.091)3)艾灸組 9 0.84±0.04 1.53±0.161) 1.63±0.151) 1.52±0.101)2)

2.2 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠機(jī)械痛的影響

本研究采用機(jī)械痛閾測(cè)量法檢測(cè)了各組大鼠造模前、造模后、治療3 d后、治療7 d后的機(jī)械痛。由表 2可見(jiàn),在造模前,各組機(jī)械痛組間比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。造模后,各組機(jī)械痛明顯高于空白組,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療3 d后,與模型組比較,中藥組和艾灸組明顯增高,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),中藥組明顯高于消炎痛組和艾灸組,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療7 d后,與模型組比較,消炎痛組、中藥組和艾灸組明顯增高,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其中中藥組明顯高于消炎痛組,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠機(jī)械痛的影響 (s,g)

表2 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠機(jī)械痛的影響 (s,g)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與同組造模前比較2)P＜0.05;與中藥組比較3)P＜0.05;與模型組比較4)P＜0.05

組別 n 造模前 造模后 治療3 d后 治療7 d后空白組 10 9.75±1.49 10.39±1.40 9.89±2.34 10.23±3.02模型組 9 9.70±1.38 4.46±0.971) 4.45±1.361)2) 5.15±1.671)2)消炎痛組 9 9.63±2.94 4.40±1.111) 5.76±0.671)2)3) 7.61±1.201)3)4)中藥組 9 9.89±1.00 4.75±0.821) 8.85±1.731) 10.36±0.924)艾灸組 9 9.10±2.30 3.49±1.061)3) 6.67±1.091)2)3)4) 8.58±1.534)

2.3 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠熱痛的影響

由表3可見(jiàn),造模后,各組熱疼痛縮足閾潛伏期明顯低于空白組,組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療3 d后顯示,與模型組比較,消炎痛組的縮足閾潛伏期明顯增高,組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),中藥組和溫灸組有增高趨勢(shì)。治療 7 d后,消炎痛組大鼠的縮足閾潛伏期仍明顯高于模型組(P＜0.05),中藥組和艾灸組大鼠有與治療3 d后比較有進(jìn)一步增高趨勢(shì)。

表3 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠熱痛的影響 (s)

表3 不同療法對(duì)寒痹模型大鼠熱痛的影響 (s)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與同組造模前比較2)P＜0.05;與中藥組比較3)P＜0.05;與模型組比較4)P＜0.05

組別 n 造模前 造模后 治療3 d后 治療7 d后空白組 10 14.67±5.02 14.62±4.15 14.62±3.53 17.04±2.87模型組 9 15.15±2.77 5.61±1.871) 7.29±1.101)2) 9.84±1.741)2)消炎痛組 9 13.94±5.24 4.00±2.071) 12.25±3.341)3)4) 14.09±2.751)3)4)中藥組 9 14.49±2.90 3.20±0.881) 9.16±2.541)2) 11.38±2.291)艾灸組 9 13.16±4.16 4.29±1.531) 9.09±1.551)2) 11.26±2.071)

3 討論

痹證是指人體肌表和經(jīng)絡(luò)感受風(fēng)、寒、濕、熱等諸邪,引起以肢體關(guān)節(jié)及肌肉酸痛、麻木、重著、屈伸不利,甚至關(guān)節(jié)腫大、灼熱等為主要表現(xiàn)的一類(lèi)病證?！督饏T翼·痹證統(tǒng)論》:“痛痹者,寒氣偏勝,陽(yáng)氣少,陰氣多也。夫宜通而塞則為痛,痹之有痛,以寒氣入經(jīng)而稽遲,注而不行也?！焙缘闹饕C(jī)為人體營(yíng)衛(wèi)氣血失調(diào),寒濕外邪侵入人體,注于經(jīng)絡(luò),留于關(guān)節(jié),痹阻氣血而發(fā)病[1]。寒為陰邪,其性凝滯,主收引,血?dú)馐芎?凝而留聚;濕性屬陰,其性重濁粘滯,阻礙氣機(jī),故以“寒則溫之”為基本治則。附子桂枝湯以附子為君藥,補(bǔ)命門(mén)真火,祛風(fēng)寒濕邪,輔以桂枝、白芍、細(xì)辛等溫通而不傷陰,達(dá)到溫經(jīng)散寒、除濕通絡(luò)的治療作用[2]。大椎和命門(mén)艾灸,補(bǔ)督脈元陰元陽(yáng),以溫陽(yáng)、祛寒、止痛。

以往對(duì)針灸治療炎癥性疼痛的研究多從對(duì)炎癥介質(zhì)的控制著手,認(rèn)為針灸通過(guò)炎癥局部前炎癥細(xì)胞因子的干預(yù)達(dá)到抗炎鎮(zhèn)痛作用[3,4]。研究證實(shí),艾灸能明顯抑制實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型炎癥局部組織的炎癥過(guò)程和炎性細(xì)胞的分泌功能,改善其炎性病理形態(tài),減輕關(guān)節(jié)滑膜的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、滑膜細(xì)胞增生,減輕炎癥腫脹[5]。但是本研究中發(fā)現(xiàn),消炎痛、中藥和艾灸3種方法對(duì)寒痹大鼠的足跖腫脹度均無(wú)明顯干預(yù),其中中藥組大鼠的腫脹更為嚴(yán)重,我們認(rèn)為這可能與本研究的寒痹模型有關(guān),我們將在后續(xù)工作中進(jìn)一步驗(yàn)證,以明確三種療法在治療炎性疼痛時(shí)的適應(yīng)證。

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