陳永順，杜士明，董永成

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 十堰 442000)

漢黃芩素(wogonin)為唇形科植物黃芩的主要活性成分之一，是一種黃酮類化合物，具有廣泛的生物活性，尤其是其抗炎和抗腫瘤活性受到了人們的廣泛關(guān)注。漢黃芩素可廣泛作用于腫瘤細(xì)胞生成的各個通路，體內(nèi)外研究證實(shí)其對腫瘤細(xì)胞具有較好的選擇性，并能增強(qiáng)耐藥腫瘤細(xì)胞對傳統(tǒng)藥物的敏感性具有較強(qiáng)的藥理活性，特別對肝癌細(xì)胞有較強(qiáng)抑制作用，對四氯化碳、β-半乳糖胺和酒精引起的肝損傷具有保護(hù)作用[1-2]，有較大深入研究價值。鑒于目前尚未見有關(guān)其確切安全劑量的文獻(xiàn)報道，本試驗(yàn)對漢黃芩素的急性毒性做了研究，采用口服灌胃和腹腔注射兩種給藥途徑來對其急性毒性進(jìn)行評價，為安全使用漢黃芩素提供安全依據(jù)。

1 材料

漢黃芩素(上海同田生物技術(shù)有限公司，純度不小于98.5%，批號為20101208);丙二醇(廣州凌飛化工有限公司，批號為20100325)。動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重(20±2.0)g(湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心)，動物合格證號為SCYY(鄂)2002-0016。

2 方法與結(jié)果

2.1 口服急性毒性試驗(yàn)[3－4]

小鼠灌胃給予漢黃芩素，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)找其最大致死劑量為13.56 g/(kg·d)，最小致死劑量為4.29 g/(kg·d)。將小鼠50只，按體重隨機(jī)分5組，每組10只，雌雄各半。以13.56 g/kg為最高劑量，按1∶0.75比例，分別給5組小鼠一次性口服漢黃芩素，給藥量分別為 13.56，10.17，7.63，5.72 ，4.29 g/(kg·d)，供試液以40%丙二醇水溶液配置成不同濃度，給藥容量為20 mL/kg。給藥前禁食不禁水12 h，給藥后3 h內(nèi)禁食，飼養(yǎng)觀察14 d，密切觀察各小鼠的進(jìn)食、飲水情況及14 d內(nèi)可能出現(xiàn)的異常肌肉運(yùn)動、對外反應(yīng)、瞳孔改變、大小便異常、眼球凸出、呼吸異常、皮膚顏色改變等毒性反應(yīng)和死亡情況。若有小鼠死亡，則將死亡小鼠解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、小腸等臟器的改變，14 d觀察期結(jié)束后，將每組存活的小鼠處死進(jìn)行解剖，按照上述同樣方法對主要臟器大體病理變化進(jìn)行肉眼觀察。記錄小鼠毒性反應(yīng)及死亡情況，用Bliss法計算半數(shù)致死量(LD50)[5]。

漢黃芩素灌胃后不同時間累積死亡小鼠數(shù)見表1，灌胃不同劑量漢黃芩素小鼠死亡率見表2。小鼠灌胃給藥后自發(fā)活動減少，隨著時間的增加，小鼠出現(xiàn)行動遲緩，異步態(tài)、心率加快、呼吸急促、連續(xù)性抽搐等;小鼠死亡多發(fā)生于24 h之內(nèi)，存活小鼠多于24 h后上述癥狀減輕，24～72 h逐漸恢復(fù)正常;活動、攝食飲水等多在給藥2～3 d后基本恢復(fù)正常。死亡小鼠解剖，肉眼下觀察心、肝、脾、肺、腎等重大臟器的變化，發(fā)現(xiàn)胃底表面黏膜顏色蒼白，肝臟有病變，其余重要臟器未見明顯異常。劑量越高出現(xiàn)越早，癥狀越明顯。

2.2 腹腔注射急性毒性試驗(yàn)

小鼠腹腔給予漢黃芩素，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)其最大致死劑量為9.86 g/(kg·d)，最小致死劑量為 4.46 g/(kg·d)。以 9.86 g/(kg·d)為最高劑量，按1∶0.82比例依次設(shè)置5組，給藥量分別為9.86，8.09，6.63，5.44，4.46 g/(kg·d)，分別給小鼠一次腹腔注射，同2.1項(xiàng)下方法連續(xù)觀察14 d，每日記錄小鼠毒性反應(yīng)及死亡數(shù)，用Bliss法計算 LD50。

小鼠腹腔注射漢黃芩素后不同時間累積死亡小鼠數(shù)見表3，注射不同劑量小鼠死亡率見表2。小鼠腹腔注射漢黃芩素后，其中毒癥狀與口服給藥相似，均出現(xiàn)行動遲緩，異步態(tài)、心率加快、呼吸急促、連續(xù)性抽搐等，但其中毒發(fā)生時間比灌胃給藥發(fā)生得更早。對死亡小鼠進(jìn)行解剖，肉眼下觀察心、肝、脾、肺、腎等重大臟器的變化，肝臟有病變并腫大，其余重要臟器未見明顯異常。比較灌胃與腹腔注射兩種給藥途徑的 LD50，可見灌胃的 LD50比腹腔注射時的 LD50大，表明漢黃芩素的不同給藥途徑毒性大小不一樣。

表1 漢黃芩素小鼠灌胃后不同時間的累積死亡數(shù)(只)

表2 灌胃不同劑量漢黃芩素的小鼠死亡率

表3 漢黃芩素小鼠腹腔注射后不同時間的累積死亡數(shù)(只)

表4 腹腔注射不同劑量漢黃芩素的小鼠死亡率

3 討論

漢黃芩素為臨床常用中藥之一，應(yīng)用廣泛，療效確切。目前對漢黃芩素的研究較少，本試驗(yàn)提取了漢黃芩素，通過灌胃及腹腔注射給藥兩種途徑對其急性毒性進(jìn)行了觀察和評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素小鼠灌胃的 LD50值為7.62 g/(kg·d)，腹腔注射的LD50為6.08 g/(kg·d)，與其常用劑量相比其安全性比較高。

急性毒性試驗(yàn)不等于 LD50測定，急性毒性試驗(yàn)結(jié)果僅提供LD50值是不夠的，試驗(yàn)期間應(yīng)詳細(xì)記錄動物的毒性反應(yīng)情況和死亡動物分布，尤其是中毒和死亡的發(fā)生時間、毒性反應(yīng)的持續(xù)時間和恢復(fù)時間。本試驗(yàn)通過灌胃及腹腔注射給藥兩種途徑觀察了漢黃芩素的毒性反應(yīng)及死亡動物分布情況，發(fā)現(xiàn)其急性毒性主要表現(xiàn)為行動遲緩、異步態(tài)、心率加快、呼吸急促、連續(xù)性抽搐等，死亡小鼠解剖后可見胃底表面黏膜顏色蒼白，肝臟有病變，其余重要臟器未見明顯異常。劑量越高出現(xiàn)越早，癥狀越明顯。此外，通過其死亡分布可見死亡多發(fā)生于24 h之內(nèi)，存活小鼠多于24 h后上述癥狀減輕，24～72 h逐漸恢復(fù)正常。

[1]楊 莉，尤啟冬，楊 勇，等.漢黃芩素抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2009，40(6):576-579.

[2]任曉東，符 偉，張曉蕓，等.天然產(chǎn)物漢黃芩素的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2011，20(9):777-783.

[3]趙曉風(fēng)，吳友良，彭 堯，等.展舒膠囊急性毒性試驗(yàn)[J].中國藥師，2010(1):65-66.

[4]韋桂寧，周 軍，何 飛.抗復(fù)感顆粒對脾虛小鼠抗應(yīng)急和急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥師，2010，13(8):1 098-1 100.

[5]陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:112-114.