劉月強(qiáng)，趙素貞，孟凡民，崔明珠

河南省人民醫(yī)院麻醉科 鄭州 450003

腦缺血是人類第三大死因和致殘的首位原因，而近10%的接受人造瓣膜植入術(shù)、頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)等手術(shù)的患者處于腦缺血危險(xiǎn)中[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[2]證實(shí)，麻醉劑可誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)作用，有助于降低手術(shù)期間腦缺血的發(fā)病率及病死率。丙泊酚是一種新型靜脈麻醉劑，具有起效快、蘇醒迅速而完全、持續(xù)輸注后無蓄積等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于手術(shù)麻醉[3]。研究[4]表明，丙泊酚可減輕腦缺血再灌注損傷。但Fudickar等[5]發(fā)現(xiàn)丙泊酚持續(xù)輸注時(shí)間超過48 h和(或)劑量大于4 mg/(kg·h)時(shí)，患者可能突發(fā)心動(dòng)過緩合并代謝性酸中毒、高脂血癥、肝脂肪浸潤(rùn)、橫紋肌溶解、肌紅蛋白尿，出現(xiàn)繼發(fā)性急性腎衰竭，甚至發(fā)展為難治性心力衰竭，即丙泊酚輸注綜合征。同時(shí)，麻醉劑量的丙泊酚可致老年大鼠短期性認(rèn)知功能障礙，反復(fù)注射丙泊酚可引起新生大鼠遠(yuǎn)期認(rèn)知功能減退[6-7]。作者觀察了單次低劑量丙泊酚與肢體缺血后處理聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠腦缺血再灌注的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 100只健康雄性成年SD大鼠，體質(zhì)量240～260 g，由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)。MDA、SOD、GSH-Px試劑盒(南京建成生物工程研究所)，TNF-α、IL-6 ELISA試劑盒(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，AR-2140型萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，TGL 16M離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司)，多功能酶標(biāo)儀(Sigma公司)。丙泊酚(AstraZeneca公司，意大利)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 100只大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、丙泊酚組、肢體缺血后處理組和聯(lián)合治療組，每組20只，10只進(jìn)行神經(jīng)功能檢測(cè)和腦梗死面積測(cè)定，另10只進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)。腦缺血再灌注模型的制備:模型組大鼠采用40 mg/kg的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，于頸部正中切開皮膚，分離并夾閉左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，于頸總動(dòng)脈分叉下方約1.0 mm處開一小口，將直徑為2.6 mm的魚線插入頸內(nèi)動(dòng)脈直至遇到阻力，插入深度為19～20 mm;縫合動(dòng)物頸部皮膚并維持體溫;2 h后抽出魚線，恢復(fù)血液供應(yīng)[8]。假手術(shù)組大鼠僅分離組織與血管，不留置魚線。丙泊酚組大鼠于缺血前10 min腹腔注射4 mg/kg丙泊酚;肢體缺血后處理組在缺血1.5 h后，用彈性止血帶于雙后肢中、上1/3部位結(jié)扎大鼠雙后肢，以后肢遠(yuǎn)端表面皮膚溫度降低，顏色呈絳紫色為判斷后肢缺血是否成功的標(biāo)準(zhǔn)，每次結(jié)扎5 min，再灌注5 min，重復(fù)3次;聯(lián)合治療組大鼠既給予4 mg/kg丙泊酚，又進(jìn)行肢體缺血后處理。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)

1.3.1 神經(jīng)功能檢測(cè) 參照Longa等[9]的方法，在恢復(fù)血供22 h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分。0分:無神經(jīng)功能缺陷癥狀;1分:右側(cè)前肢屈曲;2分:向右側(cè)旋轉(zhuǎn);3分:向?qū)?cè)傾倒;4分:不能行走或昏迷。

1.3.2 腦梗死面積 動(dòng)物處死后，迅速取出腦組織，去除嗅球、小腦、低位腦干，置于切片槽中，間隔2 mm行連續(xù)冠狀切片;將腦片放入10 g/L的紅四氮唑溶液中，于37℃恒溫避光溫育30 min。取出，用40 g/L的多聚甲醛固定1 h后，拍照，采用圖像分析儀測(cè)定腦梗死面積。

1.3.3 腦組織 MDA、SOD、GSH-Px 活性及 TNF-α和IL-6水平 另取缺血側(cè)腦組織，置于冰生理鹽水中清洗后，用濾紙吸干表面水分，放入組織勻漿器中制備10%的組織勻漿，3000 r/min離心10 min，取上清液。用比色法測(cè)定腦組織中MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性、蛋白質(zhì)含量，用ELISA法檢測(cè)腦組織中TNF-α和IL-6水平(以每g蛋白里上述指標(biāo)的含量表示)，按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0處理數(shù)據(jù)。應(yīng)用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)比較5組間以上指標(biāo)的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

各組大鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積的比較見表1，假手術(shù)組上述兩指標(biāo)均為0。各組大鼠MDA含量、SOD活性和GSH-Px活性的比較見表2。各組大鼠TNF-α和IL-6水平的比較見表3。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積的比較(n=10)

表2 各組大鼠MDA含量、SOD活性和GSH-Px活性的比較(n=10)

表3 各組大鼠TNF-α和IL-6水平的比較(n=10) ng/g

3 討論

作者采用經(jīng)典的線栓法制備了腦缺血再灌注損傷模型，探討單次腹腔注射低劑量丙泊酚聯(lián)合肢體缺血后處理能否協(xié)同抗腦缺血再灌注損傷。有研究者[10-11]選擇于缺血前10 min腹腔注射丙泊酚，而腦缺血后使用丙泊酚有可能增強(qiáng)缺血后炎癥反應(yīng)，所以作者在缺血前10 min腹腔注射4 mg/kg丙泊酚。

該研究結(jié)果顯示，單次低劑量丙泊酚或肢體缺血后處理可部分改善所觀察指標(biāo)如降低腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分，減小腦梗死面積，降低腦組織中氧化產(chǎn)物MDA含量，增強(qiáng)抗氧化物酶SOD、GSH-Px活性，同時(shí)降低炎癥因子TNF-α和IL-6水平，而二者聯(lián)用，以上指標(biāo)均有明顯改善。二者聯(lián)用可能通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)減輕腦缺血再灌注損傷。原因可歸結(jié)于以下方面:丙泊酚可干擾脂質(zhì)過氧化奪氫過程，酚基與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)形成一個(gè)更穩(wěn)定的無活性產(chǎn)物，阻斷脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng);又可從轉(zhuǎn)錄水平抑制各種炎癥因子的表達(dá)及炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，減輕組織炎性損傷[12-13]。肢體缺血后處理則能誘導(dǎo)內(nèi)源性-κ-阿片激動(dòng)劑釋放，激活線粒體ATP敏感性鉀通道，減輕線粒體內(nèi)鈣超載，抑制線粒體滲透性轉(zhuǎn)換孔發(fā)生滲透性轉(zhuǎn)換，產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用;還能促進(jìn)腦缺血區(qū)熱休克蛋白70表達(dá)，抑制腦缺血再灌注小鼠腦皮層神經(jīng)元凋亡[14-15]。

總之，單次低劑量丙泊酚和肢體缺血后處理聯(lián)用可改善腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺陷，減小腦梗死面積，同時(shí)避免大劑量和(或)多次丙泊酚注射所引起的不良反應(yīng)。

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