宮鐵紅，付淑華，牛嗣云，高福祿△，李 然(.河北醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，河北石家莊 05007;.承德市第五醫(yī)院婦產科;.河北大學基礎醫(yī)學院;.承德縣醫(yī)院)

衰老是指在正常狀況下生物體發(fā)育成熟后，隨年齡增加自身機能減退，內環(huán)境穩(wěn)定能力與應激能力下降，結構、組分逐步退行性變不可逆轉的現象[1]。隨著年齡的增長，睪丸亦呈現退行性變，如間質細胞數目減少、功能不足等。睪酮由睪丸間質細胞分泌，是體內最主要的雄激素，可促進精子發(fā)生和雄性生殖器官的發(fā)育，維持雄性第二性征。臨床上常用睪酮水平判斷睪丸的生精功能;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)是反應機體抗氧化能力的重要指標。本研究通過檢測衰老大鼠睪丸組織SOD、MDA和血清睪酮含量的變化，觀察衰老大鼠模型睪丸的衰老變化情況，進一步探討機體衰老的機制及變化。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物及分組:選用SPF級8周齡雄性SD大鼠20只(合格證號:1005050)，隨機分為正常組和D-半乳糖致衰組(模型組)，每組10只大鼠;18月齡自然衰老雄性SD大鼠10只(自然衰老組，合格證號:1112043)，均由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.1.2 主要試劑:D-半乳糖(批號:0914B70)，北京化學試劑公司;SOD、MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所;睪酮放免試劑盒，北京北方生物技術研究所。

1.2 實驗方法

1.2.1 衰老動物模型的建立:模型組大鼠以6% D-半乳糖(300mg/kg/d，60d)連續(xù)腹腔注射建立亞急性衰老動物模型;正常組和自然衰老組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，時間同模型組。

1.2.2 血清睪酮含量的測定:大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉，經內眥于眶后靜脈取血約1.5ml，離心取血清，采用放射免疫法檢測血清睪酮含量。

1.2.3 SOD、MDA含量的測定:大鼠取血后斷頭處死，每只大鼠取單側新鮮等體積的部分睪丸組織(約100mg)，用濾紙吸干水分后迅速冰浴，加入預冷的生理鹽水制備成10%的組織勻漿，3000rpm/min離心15min，取勻漿上清，再用預冷生理鹽水稀釋成所需濃度。嚴格按照試劑盒說明書操作，用酶標儀測定睪丸組織蛋白的含量及SOD、MDA含量。

2 結果

與正常組大鼠比較，模型組和自然衰老組大鼠血清睪酮含量、睪丸組織SOD含量明顯降低，睪丸組織MDA含量明顯升高，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);三個指標模型組和自然衰老組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見附表。

附表 各組大鼠血清睪酮含量和睪丸組織SOD、MDA含量(±s，n=10)

附表 各組大鼠血清睪酮含量和睪丸組織SOD、MDA含量(±s，n=10)

與正常組比較:*P＜0.01，與自然衰老組比較:#P＞0.05

組別 睪酮(mg/ml) SOD(U/mg prot) MDA(U/mg prot)正常組 4.13±0.11 121.5±10.1 2.35±0.24模型組 1.02±0.53*# 105.3±11.4*# 5.21±0.13*#自然衰老組 1.63±0.46* 93.39±9.22* 4.54±0.98*

3 討論

自由基是人體正常的代謝產物，正常情況下人體內的自由基處于不斷產生與消除的動態(tài)平衡。但隨著年齡的增長，機體抗氧化防御物質合成和活性下降，清除自由基能力降低，機體產生和清除自由基的平衡被破壞自由基累積增多，清除率下降，損傷生物膜，造成組織損傷和器官退行性變化[2]。Inal[3]的研究也證實，SOD活性下降與衰老密切相關。氧在代謝過程中產生的多種性質活潑的自由基能使生物膜發(fā)生脂質過氧化，最終可以分解產生MDA，MDA可以引發(fā)多種生化毒性反應，造成機體衰老和多種疾病。

睪丸間質細胞分泌的睪酮可與生精細胞的雄激素受體結合，促進精子發(fā)生;睪酮也可以促進精母細胞轉化為精子細胞，Nayemia等[4]發(fā)現粗線期精母細胞和減數分裂均依賴于睪酮的存在;Henkel等[5]發(fā)現，附睪精子成熟和精子活動力的誘導均需要有生物活性的睪酮的作用。因此，血清睪酮水平能很好的反應睪丸的功能。本研究發(fā)現，與正常組大鼠比較，自然衰老大鼠和D-半乳糖致衰大鼠血清睪酮含量明顯降低，睪丸組織SOD含量顯著降低、MDA含量顯著升高，而自然衰老大鼠與D-半乳糖致衰大鼠比較無顯著差異。因此表明，衰老大鼠睪丸抗氧化能力明顯降低，睪丸間質細胞分泌睪酮的功能發(fā)生障礙，且D-半乳糖致衰老模型是自然衰老的很好再現。

[1]鄒承魯.當代生物學[M].北京:中國致公出版社，2000.394-396.

[2]Vihra BP, Sharma SP, Kansal VK. Age-dependent variation in mitochondrial and cytosolic antioxidant enzymes and lipi peroxidation in different regions of central nervous system o guinea pigs[J]. Indian J Biochem Biophys, 2001, 38(5):321-326.

[3]Inal ME, Kanbak G, Sunal E. Antioxidant enzyme activities and malondialdehyde levels related to aging [J]. Clin Chim Acta,2001, 305(1-2):75-78.

[4]Nayernia K, Vauti F, Meinhardt A, et al. Inactivation of a testis-specific Lis1 transcript in mice prevents spermatid differentiation and causes male infertility[J]. J Biol Chem, 2003,278(48): 48377-48385.

[5]Henkel R, Maass G, Schuppe HC, et al. Molecular aspects of declining sperm motility in older men[J]. Fertil Steril, 2005,84(5):1430-1437.