王林 張國(guó)平 李雪英

筆者在工作中發(fā)現(xiàn)2例正反定型不符的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本，經(jīng)一系列血型血清學(xué)檢查，證實(shí)為罕見的B(A)表型，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 均來源于本市街頭無償獻(xiàn)血者，其中女性1名，曾有獻(xiàn)血史，獻(xiàn)血檔案記錄為B型；男性1名，為初次獻(xiàn)血者。

1.2 材料

1.2.1 試劑 單克隆抗-A、抗-B(分別由國(guó)內(nèi)甲、乙、丙3個(gè)試劑生產(chǎn)廠家提供，均經(jīng)中國(guó)食品藥品鑒定研究院鑒定合格并有合格標(biāo)簽)；人源抗-A、人源抗-B、抗-A1、抗-H(均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供)；A2、A2B細(xì)胞是本室制備的冰凍解凍紅細(xì)胞；A1、B、O紅細(xì)胞是本室使用當(dāng)天自配的新鮮紅細(xì)胞。

1.2.2 儀器設(shè)備 KA-2200血球洗滌離心機(jī)(日本KUBOTA公司)；SBHW2-1型電熱恒溫水浴箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠有限責(zé)任公司)。

1.3 方法

1.3.1 ABO正反定型 分別用3個(gè)試劑生產(chǎn)廠家的單克隆抗血清和自配的A1、B、O紅細(xì)胞進(jìn)行正反定型[1]。結(jié)果見表1。

1.3.2 亞型檢測(cè) (1)和多克隆人源抗-A 、抗-B反應(yīng)；(2)和抗-H反應(yīng)并觀察其反應(yīng)強(qiáng)度；(3)觀察和抗-A1的反應(yīng)情況；(4)觀察和A2細(xì)胞及A2B細(xì)胞的反應(yīng)情況。結(jié)果見表2。

1.3.3 血漿中抗-A1和抗-A效價(jià)測(cè)定 (1)取2名獻(xiàn)血者血漿各0.3 ml，分別和0.15 ml A2細(xì)胞混合，置4 ℃冰箱吸收40 min，當(dāng)吸收后的血漿和A2細(xì)胞的反應(yīng)呈陰性時(shí)，血漿中所?？贵w即為抗-A1。(2)取獻(xiàn)血者吸收后的血漿0.1 ml，用生理鹽水倍比稀釋，加入等量2% A1紅細(xì)胞測(cè)定抗-A1的凝集效價(jià)；(3)取獻(xiàn)血者未吸收的血漿0.1 ml，用生理鹽水倍比稀釋，加入等量2% A2紅細(xì)胞測(cè)定抗-A的凝集效價(jià)。結(jié)果見表2。

1.3.4 基因檢測(cè) 將獻(xiàn)血者標(biāo)本快遞至上海市血液中心，由血型參比實(shí)驗(yàn)室協(xié)助進(jìn)行基因檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 血型血清學(xué)結(jié)果 由表1、表2看，2名獻(xiàn)血者的血清學(xué)反應(yīng)格局可歸納為以下3點(diǎn)：(1)紅細(xì)胞A抗原減弱，B抗原正常；(2)H抗原明顯增強(qiáng)，與O細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度相當(dāng)；(3)血清凝集A1細(xì)胞，也凝集A2細(xì)胞，即血清中既存在抗-A1，又存在抗-A，均符合B(A)表型的血型血清學(xué)特點(diǎn)[2]，所以初步確定為B(A)表型。

2.2 基因檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)上海市血液中心血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行基因檢測(cè)，2名獻(xiàn)血者分別具有B(A)﹡02和B(A)﹡04等位基因，所以進(jìn)一步證實(shí)為B(A)表型。

表1 2名獻(xiàn)血者ABO正反定型反應(yīng)格局

表2 2名獻(xiàn)血者亞型檢測(cè)反應(yīng)格局及血漿中抗-A1、抗-A效價(jià)測(cè)定結(jié)果

3 討論

ABO亞型在血型血清學(xué)試驗(yàn)中是導(dǎo)致正反定型不一致的主要原因之一。其中B(A)表型是AB型中非常少見的亞型，在人群中的發(fā)生頻率大約在1/17萬～1/58萬[3]。其形成的機(jī)制，在文獻(xiàn)[4]中有這樣的描述：(1)A和B糖基轉(zhuǎn)移酶在選擇催化供體底物時(shí)并不是十分精確的，A和B的基因產(chǎn)物可能存在少部分的重疊，在合適的條件下，高活性的B轉(zhuǎn)移酶能夠催化N－乙酰氨基半乳糖到一種低分子質(zhì)量的H類似物(2′-巖藻糖)，形成一種具有A活性的結(jié)構(gòu)。(2)在某些個(gè)體的分子遺傳學(xué)研究結(jié)果顯示，與上述高活性B轉(zhuǎn)移酶能夠產(chǎn)生A抗原的理論并不一致。有2例的核苷酸序列與正常B基因相比具有一個(gè)有意義的突變，Ser235Gly，他們是B(A)/O雜合子，他們的父親是A1B，基因型A1/B(A)，因而B(A)表現(xiàn)型更像是由于底物特異性的酶轉(zhuǎn)變所致，而不是由于顯著增強(qiáng)的B轉(zhuǎn)移酶活性所致。

無論B(A)表型的形成是哪一種機(jī)制，其血型血清學(xué)均表現(xiàn)為弱的A抗原，而血清中卻含有比較強(qiáng)的抗-A和抗-A1抗體，極易被誤定為B型而輸注給B型患者，從而導(dǎo)致輸血不良反應(yīng)，給臨床安全輸血帶來極大隱患。筆者對(duì)2例獻(xiàn)血者血漿中的抗體活性及效價(jià)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果證實(shí)，兩者均含有在37 ℃有反應(yīng)活性的抗-A抗體，所以，當(dāng)其作為受血者時(shí)，只能輸注O型或B型紅細(xì)胞，而不能輸注AB型紅細(xì)胞，但需要輸注血漿類制品時(shí)，則只能輸注AB型，否則，同樣發(fā)生輸血不良反應(yīng)。由此進(jìn)一步證明，正確鑒定獻(xiàn)血者的B(A)表型以及對(duì)其輸血安全問題進(jìn)行指導(dǎo)的重要性。本文中的女性獻(xiàn)血者，在以往獻(xiàn)血時(shí)即被誤定為B型，可能因本站原來初、復(fù)檢均使用丙廠家生產(chǎn)的單克隆試劑所致。這種試劑可能是針對(duì)一種血型抗原的單個(gè)抗原決定簇的單克隆細(xì)胞技術(shù)生產(chǎn)的單一抗體試劑，抗原抗體反應(yīng)極為單一[5]，當(dāng)某一血型抗原的基因表位上哪怕是一個(gè)功能基團(tuán)或原子不同、位置差異和立體構(gòu)象變化，均可能不被識(shí)別而漏檢[6]。本站采用系列參考品，選擇凝集效價(jià)高、親和力強(qiáng)、亞型標(biāo)本檢出率高的甲、乙兩個(gè)生產(chǎn)廠家的單克隆抗體試劑，分別用于體采科初檢和檢驗(yàn)科復(fù)檢，從而避免了漏檢情況的再次發(fā)生。另外，由于該血型具有遺傳性，本站征得獻(xiàn)血者同意，將組織相關(guān)人員對(duì)其家系進(jìn)行調(diào)查，以觀察B(A)基因在家族中的傳遞情況，并進(jìn)一步就獻(xiàn)血、用血以及遺傳等相關(guān)問題給予具體指導(dǎo)，確實(shí)保證兩個(gè)家系家庭成員的輸血安全。由此也體現(xiàn)了本站良好的獻(xiàn)血服務(wù)及科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度。

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