王向軍

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科鄭州450014

(2011-05-18收稿 責(zé)任編輯 徐春燕)

五味草(Corydalis taliensis Franch.)別名地錦苗(《救荒本草》)、金鉤如意草(《滇南本草》)、水金鉤如意(《昆明民間常用草藥》)、斷腸草(《貴州中草藥名錄》)、水黃連、大理紫堇(《全國(guó)中草藥匯編》)和水如意(云南)等，為彝醫(yī)習(xí)用藥材，主要分布于四川、貴州和云南等地。五味草味苦，性寒，歸肺、肝經(jīng)，具有祛風(fēng)、清熱、止痛和清肝明目等作用［1］?！度珖?guó)中草藥匯編》中記載，其可治肝炎、痢疾、腸炎、風(fēng)濕骨痛、肺熱咳嗽、牙痛及急性結(jié)膜炎等。作者觀察了五味草的醇提物和水提物預(yù)處理對(duì)四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥材的來(lái)源及處理 五味草購(gòu)于昆明市金碧路圣愛(ài)中醫(yī)館。取全草粉碎，過(guò)80目篩，用10倍量、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取3 h，再加8倍量、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取3 h，重復(fù)1次，合并3次濾液回收，得醇提物;另取五味草全草粉碎，過(guò)80目篩，用10倍量的蒸餾水同上法提取得水提物。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑與儀器 雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，SPF級(jí)，許可證號(hào):SYXK(豫)2007-0009，由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后實(shí)驗(yàn)。CCl4(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，分析純)，復(fù)方益肝靈片(吉林省博威藥業(yè)有限公司，批號(hào):20091004)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)測(cè)定試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)測(cè)定試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)測(cè)定試劑盒、還原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone，GSH)測(cè)定試劑盒及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，山梨醇脫氫酶(sorbitol dehydrogenase，SDH)酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自上海逸峰生物科技有限公司。Sartorius BP 211 D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，TG16-WS高速離心機(jī)(湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，UV-2409型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，Olympus BX-50型顯微鏡，DQP-9010石蠟冷凍切片機(jī)(上海華巖儀器設(shè)備有限公司)，ZN17-2102A型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(北京中諾遠(yuǎn)東科技有限公司)。

1.3 動(dòng)物分組及處理 昆明種小鼠108只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分成9組，每組12只，分別為正常組(灌胃生理鹽水)，模型組(灌胃生理鹽水)，益肝靈組(益肝靈200 mg/kg)，五味草醇提物低、中、高劑量組(分別相當(dāng)于生藥1、2、4 g/kg)，五味草水提物低、中、高劑量組(分別相當(dāng)于生藥 1、2、4 g/kg)，均灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后除正常組以外，各組小鼠按文獻(xiàn)［2］方法腹腔注射體積分?jǐn)?shù) 0.2%的CCl4橄欖油溶液10 mL/kg，禁食不禁水。20 h后眼靜脈采血，常規(guī)離心后分離血清備用。同時(shí)迅速剖取肝臟，取小鼠肝左葉，－4℃下制備肝組織勻漿，備用。另取肝右葉行病理組織學(xué)檢查。

1.4 病理組織學(xué)檢查 將體積分?jǐn)?shù)5%甲醛溶液固定的肝組織石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察病理組織學(xué)改變。

1.5 血清ALT、AST和SDH活性及肝組織勻漿中MDA、GSH和SOD水平測(cè)定 按所購(gòu)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行分析，應(yīng)用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)比較各組血清ALT、AST和 SDH活性及肝組織勻漿中 GSH、MDA和SOD水平的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠肝組織病理觀察 光鏡下可見，正常組肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細(xì)胞核明顯，結(jié)構(gòu)正常;模型組小鼠肝竇及中央靜脈明顯擴(kuò)張，肝細(xì)胞明顯壞死，胞質(zhì)連成一片，幾乎看不到細(xì)胞膜，周圍肝細(xì)胞發(fā)生不同程度的氣球樣變及嗜酸性變，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);五味草醇提物高劑量組相對(duì)模型組肝細(xì)胞稍有改善，而五味草水提物高劑量組壞死細(xì)胞已部分修復(fù)，中央靜脈周圍只有少量的炎性細(xì)胞(圖1)。

圖1 各組小鼠肝組織病理變化(HE，×200)A:正常組;B:模型組;C:益肝靈組;D、E、F:分別為五味草醇提物低、中、高劑量組;G、H、I:分別為五味草水提物低、中、高劑量組。

2.2 各組小鼠血清ALT、AST和SDH活性比較見表1。

2.3 各組小鼠肝組織勻漿中GSH、MDA和SOD水平比較 見表2。

表1 各組小鼠血清ALT、AST和SDH活性比較(n=12) IU/L

表2 各組小鼠肝組織勻漿中GSH、MDA和SOD水平比較(n=12)

3 討論

肝臟氧化損傷是一種非常常見和嚴(yán)重的損傷，可加重機(jī)體的衰老和病變。目前，市場(chǎng)上有許多抗肝臟氧化損傷的產(chǎn)品，但是大多數(shù)都有不易提取獲得、純度不高、有效成分不明確、價(jià)格高等缺點(diǎn)，給應(yīng)用帶來(lái)了很大的困難。開發(fā)一種來(lái)源廣、純度高、成分明確、效果好、安全的抗肝臟氧化損傷的產(chǎn)品非常迫切且具有重大的意義。

現(xiàn)有研究表明，在肝細(xì)胞的病變過(guò)程中，自由基、酶以及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等均發(fā)揮重要的作用。CCl4致小鼠肝損傷的機(jī)制［3］為:CCl4在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細(xì)胞色素分解活化，形成三氯甲基自由基和氯自由基，導(dǎo)致肝微粒體的脂質(zhì)過(guò)氧化。三氯甲基自由基通過(guò)破壞肝細(xì)胞及其內(nèi)膜機(jī)構(gòu)，損壞或殺死肝細(xì)胞，致使胞質(zhì)中的酶如ALT、AST等溢至血中。因此，血清中ALT和AST活性可敏感地反映肝臟損害的程度。另有文獻(xiàn)［4］報(bào)道，血清SDH的活性增高與肝病發(fā)病的特異性高，可作為肝功能檢測(cè)的特異性指標(biāo)。

該研究結(jié)果顯示，中、高劑量五味草水提物及高劑量五味草醇提物預(yù)處理可減輕CCl4所致的小鼠肝損傷，顯著降低 CCl4引起的血清 ALT、AST和SDH升高，降低損傷肝組織中MDA水平，升高GSH和SOD水平，顯著改善肝組織病理?yè)p傷，且以高劑量五味草水提物為佳。據(jù)此推測(cè)，五味草抗急性肝損傷作用可能與其清除自由基相關(guān)，具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。目前對(duì)五味草的研究還很少，應(yīng)對(duì)其做進(jìn)一步研究，以找到其明確的活性部位和單體。

［1］中華本草編委會(huì).中華本草·第三卷［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:641

［2］婁猛猛，李國(guó)玉，王航宇，等.四氯化碳致小鼠急性肝損傷模型的研究［J］.農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2010，32(3):196

［3］戴志強(qiáng)，俞月桂，袁幸菊，等.氧代賴氨酸抗四氯化碳所致小鼠肝細(xì)胞損壞的超微結(jié)構(gòu)觀察［J］.中國(guó)藥理學(xué)和毒理學(xué)雜志，1994，8(2):139

［4］黃伏生，周自剛，彭劍虹，等.一種特異性肝功能檢測(cè)指標(biāo)的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2004，8(4):379