林 泉 成先桂 鐘永明 陳 岳 黃春霞

1 廣西陸軍預(yù)備役步兵師，廣西南寧市 530221； 2 解放軍第303醫(yī)院皮膚科 3 解放軍第303醫(yī)院呼吸科

神經(jīng)纖維瘤病Ⅰ型（NeurofibromatosisⅠ，NFⅠ）占神經(jīng)纖維瘤病的85%～90%，其發(fā)生率較高，可累及神經(jīng)、內(nèi)分泌、循環(huán)、泌尿、運(yùn)動(dòng)等多個(gè)系統(tǒng)，受到較多的關(guān)注［1，2］。人類白細(xì)胞抗原（Human leukocyte antigen，H LA）是人類的主要組織相容性抗原，其基本作用是調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，與包括多種惡性腫瘤在內(nèi)的很多疾病密切相關(guān)。根據(jù)功能的不同，可分為H LA－Ⅰ、HLA－Ⅱ兩大類。H LA－Ⅰ基因區(qū)包括H LA－A、B等11個(gè)位點(diǎn)，H LA－Ⅱ基因區(qū)包括H LA－DR、DQ和DP三個(gè)亞區(qū)。而又以 HLA－DR中的DRB1基因的功能最為重要和復(fù)雜多變。為探討廣西壯族人群NFⅠ與H LA－A、B、DRB1等位基因分型的相關(guān)性，筆者進(jìn)行了研究。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2009年9月－2011年9月在中國人民解放軍第303醫(yī)院就診的NFⅠ壯族患者25例。其中男9例，女16例；年齡（30.2±9.2）

歲。所有患者診斷均符合美國國立衛(wèi)生研究院診斷標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)選取98例同期到該院體檢的健康壯族個(gè)體設(shè)為對(duì)照組，平均年齡（31.1±10.5）歲。對(duì)照組男女各半。所有被試者間均無血緣關(guān)系。

1.2 研究方法 所有研究對(duì)象取空腹靜脈血4ml置4～6℃冰箱冷藏備用。用酚／氯仿法提取研究對(duì)象基因組DNA，再將析出的DNA溶入適量滅菌純水中，使吸光度 A260／A280比例在1.8～2.0，以符合基因測(cè)序反應(yīng)要求。使用ABIPRISM3700DNA自動(dòng)分析儀進(jìn)行PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，測(cè)序反應(yīng)條件為：96℃10s；96℃10s，50℃10s，60℃2min，共20個(gè)循環(huán)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各位點(diǎn)等位基因頻率利用arlequin軟件（Version2.000）軟件進(jìn)行計(jì)算?；颊呓M與對(duì)照組基因頻率比較使用SPSS軟件15.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。若結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則計(jì)算兩組間的比值比（OR值）。統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 在病例組中，鑒定出H LA－A的等位基因的有21個(gè)、H LA－B位點(diǎn)43個(gè)、H LA－DRBI 33個(gè)，符合Hardy－Weinbers平衡。

2.2 在對(duì)照組中，鑒定出HLA－A的等位基因的有21個(gè)、H LA－B位點(diǎn)43個(gè)、H LA－DRBI 33個(gè)，符合Hardy－Weinbers平衡。

2.3 病例組的 A＊2601、B＊1518、DRB1＊0406、DRB1＊1032的頻率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。其余等位基因頻率在兩組間無明顯差異（P＞0.05）。兩組間有差異的等位基因的位點(diǎn)、OR值、OR值95%可信區(qū)間、P值見表1。

表1 兩組HLA－A，B，DRB1基因多態(tài)性分布

3 討論

H LA系統(tǒng)是人類的主要組織相容性抗原，其基本作用是調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，與包括多種惡性腫瘤在內(nèi)的很多疾病密切相關(guān)。編碼H LA的基因位于第6號(hào)染色體短臂6p21.3區(qū)域，是人類基因組中最復(fù)雜的遺傳多態(tài)系統(tǒng)。H LA等位基因多態(tài)性影響免疫應(yīng)答和抗原遞呈，H LA與某些疾病的易感性密切相關(guān)，是研究疾病易感性最不可忽視的遺傳因素。根據(jù)功能的不同，H LA可分為H LA－Ⅰ、H LA－Ⅱ兩大類。H LA－Ⅰ基因區(qū)包括 HLA－A、B等11個(gè)位點(diǎn)，H LA－Ⅱ基因區(qū)包括H LA－DR、DQ和DP三個(gè)亞區(qū)，而又以H LA－DR中的DRB1基因的功能最為重要和復(fù)雜多變［3］。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的H LA基因多態(tài)性被發(fā)現(xiàn)。截至2012年8月，已發(fā)現(xiàn)HLA存在的等位基因超過8 000個(gè)，還在不斷有新的等位基因被發(fā)現(xiàn)［4］。

NFⅠ的致病基因位于常染色體17q11.2［5］。該病的表現(xiàn)度差異很大。在單一家族中，即使在該致病基因上有相同的突變，其臨床表現(xiàn)也可輕重不等。故此推斷，影響NFⅠ表型的因素除了NFⅠ基因的突變類型外，還包括了調(diào)控NFⅠ基因表達(dá)的基因、神經(jīng)纖維素翻譯后調(diào)節(jié)、機(jī)體的免疫系統(tǒng)反應(yīng)等生理生化過程。

通過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)病例組的A＊2601、B＊1518、DRB1＊0406、DRB1＊1032的頻率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），提示其基因突變可能更易發(fā)生于攜帶這種基因的患者。這與這些基因在某些癌癥患者中的情況類似［6］。但在本實(shí)驗(yàn)中，兩組間大部分的等位基因頻率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，較相關(guān)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的易感基因少，也未能發(fā)現(xiàn)與易感性負(fù)相關(guān)的基因。這可能與樣本數(shù)量較少有關(guān)。H LA－A、B、DRB1在神經(jīng)纖維瘤病的發(fā)病過程中的確切影響尚需進(jìn)一步探討。

廣西壯族NFⅠ患者 H LA的A＊2601、B＊1518、DRB1＊0401、DRB1＊0402、DRB1＊1201的頻率顯著高于廣西壯族正常人群。

［1］ 章建林，江華.神經(jīng)纖維瘤病的研究進(jìn)展〔J〕.中國實(shí)用美容整形外科雜志，2005，16（4）：240－242.

［2］ 王桂龍，羅志勇，向陽.Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病的診斷與治療〔J〕.癌癥進(jìn)展雜志，2007，5（4）：362－365.

［3］ Nepom GT，Erlich H.MHC class－Ⅱ molecules and autoimmunity〔J〕.Annu Rev Immunol，1991，9：493－525.

［4］ MGT.IMGT／HLA database：Statistics［DB／OL］.2012－04［2012－05－01］.http：／／www.ebi.ac.uk／imgt／hla／stats.html.

［5］ Yagle MK，Parruti G，Xu W，et al.Genetic and physical map of the von Recklinghausen neurofibromatosis（NF1）region on chromosome 17〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，1990，7（18）：7255－7259.

［6］ 楊磊，王麗君，時(shí)廣利，等.HLA－A、HLA－B、DRB1等位基因多態(tài)性與中國北方漢族肺癌患者遺傳易感性相關(guān)性的研究〔J〕.免疫學(xué)雜志，2010，26（7）：612－619.