潘成學(xué)，魏俊杰，王彩芳，武天坤

(1.鄭州大學(xué) 藥學(xué)院，河南 鄭州450001;2.鄭州人民醫(yī)院 藥劑科，河南 鄭州450003)

0 引言

角柱花(Ceratostigma Plumbaginoides Bunge)是白花丹科(藍(lán)雪科)角柱花屬植物，別名藍(lán)雪花、七星箭，我國(guó)特產(chǎn).民間用于治療腫瘤、白血病、跌打損傷、脘腹疼痛、風(fēng)濕、創(chuàng)傷、腮腺炎等疾病，具有行氣活血止痛、抗菌、解痙，鎮(zhèn)痛等作用［1］.白花丹科補(bǔ)血草屬和角柱花屬植物常藥用.其中有許多種類都可入藥，補(bǔ)血草屬植物的根含各種黃酮，如楊梅樹(shù)皮甙(Myricetrin)、四羥基黃酮(Tetrahydroxyflavone)等，許多種類是聞名的鞣料植物和染料植物;角柱花屬等多含磯松素(Plumbagin，又名藍(lán)雪醌、白花丹素).由于角柱花化學(xué)成分的系統(tǒng)性研究國(guó)內(nèi)外少有文獻(xiàn)報(bào)道，為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用中藥資源、尋找活性成分，建立角柱花的藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，為臨床用藥安全和新藥研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，筆者在對(duì)角柱花生藥學(xué)特征進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，對(duì)角柱花化學(xué)成分進(jìn)行了研究.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料、儀器和試劑

角柱花藥材采自河南省濟(jì)源市太行山區(qū).主要的實(shí)驗(yàn)儀器包括安靈三用紫外儀(上?？等A生化儀器制造廠);DPX-400型超導(dǎo)核磁共振譜儀(400 MHz)(瑞士布魯克(Bruker)公司);Waters Q-TOF Micro質(zhì)譜儀(美國(guó)沃特斯(Waters)公司);JHBE-100A型中試型閃式提取器(河南金鼐科技發(fā)展有限公司);RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);KQ-500DE型數(shù)控超波聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);薄層色譜硅膠和柱色譜硅膠(青島海洋化工廠);Sephadex-LH20(GE公司)及 MCI GEL柱填料(YMC公司).試劑規(guī)格均為分析純或色譜純.

1.2 醇浸膏的制備

將角柱花藥材10.5 kg用95%的乙醇(8倍量)浸泡0.5 h，用JHBE-100A型中試型閃式提取器提取三次，每次3 min，用紗布過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮回收溶劑至最小體積得總浸膏1 058.9 g.

1.3 不同極性部位的制備

將角柱花的乙醇提取物的總浸膏(1 058.9 g)加水(6 000 mL)分散成混懸液，分成3份依次轉(zhuǎn)移到3個(gè)分液漏斗中，加入同等量的石油醚(2 000 mL)后進(jìn)行混懸，靜置分層，分出石油醚層，然后再分別用石油醚萃取數(shù)次(直至萃取的石油醚液在薄層板上點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色后主斑點(diǎn)不明顯為止)，合并萃取液，減壓濃縮回收溶劑至最小體積得石油醚部位165.0 g.同樣方法用乙酸乙酯、正丁醇分別萃取并減壓濃縮至最小體積得乙酸乙酯部位 185.2 g、正丁醇部位 240.5 g.

1.4 石油醚部位的分離純化過(guò)程

對(duì)石油醚部位采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、MCI柱色譜(CHP 20P)等一系列方法進(jìn)行分離純化，從石油醚部位中分離鑒定出5種化合物.

將石油醚部位過(guò)硅膠柱(0.075～0.150 mm)，依次用石油醚和乙酸乙酯體積比為40∶1，30∶1，20∶1，15∶1，10∶1，5∶1，1∶1、乙酸乙酯、甲醇洗脫，按25 mL一份收集，經(jīng)薄層色譜檢測(cè)，合并相同的洗脫液.對(duì)石油醚部位浸膏采用硅膠柱色譜、MCI、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、重結(jié)晶等一系列方法進(jìn)行分離純化，共鑒定出5種化合物.

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ：橘黃色針晶.三氯化鐵－鐵氰化鉀顯色為淺綠色.1H-NMR(400 MHz，CDOD3)δ：2.12(3H，s，2-CH3)，6.81(1H，s，H-3)，7.21(1H，m，H-6)，7.54(1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7)，7.62(1H，t，J=8.0，1.2 Hz，H-8)，11.96(1H，s，OH).13C-NMR(100 MHz，CDOD3)δ：16.4(2-CH3)，185.8(C-1)，151.0(C-2)，136.4(C-3)，191.7(C-4)，162.2(C-5)，124.8(C-6)，137.3(C-7)，119.9(C-8)，133.5(C-9)，116.3(C-10).將化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［2］報(bào)道對(duì)照數(shù)據(jù)一致，確認(rèn)其結(jié)構(gòu)為藍(lán)雪醌(plumbagin).結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1(a).

化合物Ⅱ：白色粉末(石油醚和乙酸乙酯體積比為10∶1).易溶于甲醇，乙酸乙酯等.用石油醚和乙酸乙酯體積比為10∶1的溶液作為展開(kāi)劑進(jìn)行薄層色譜展板Rf值=0.5，紫外燈254 nm熒光下顯暗斑，碘顯色明顯，磷鉬酸微顯色.1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.99(12H，d，J=6.8 Hz，3H-10，3H-10’，3H-11，3H-11’)，2.03(2H，m，H-9，9’)，4.07(4H，d，J=6.4 Hz，2H-8，2H-8’)，7.61(2H，dd，J=5.6，3.2 Hz，H － 4，5)，7.73(2H，dd，J=5.6，3.2 Hz，H-3，6).碳譜數(shù)據(jù)13CNMR(CD3OD，100 MHz)δ：171.8(C-1’，1’’)，136.2(C-4，5)，134.9(C-1，2)，132.4(C-3，6)，75.4(C-2’，2’’)，31.5(C-3’，3’’)，22.1(C-4’，5’，4’’，5’’).將化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道對(duì)照數(shù)據(jù)一致，確定該化合物為鄰苯二甲酸二異丁酯(dis(2-methylpropyl)ester).結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1(b).

化合物Ⅲ：淡黃色點(diǎn)狀結(jié)晶.茴香醛－濃硫酸顯色為桔紅色，三氯化鐵－鐵氰化鉀顯色呈淡綠色.1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.55(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，7.52(1H，s，H-2)，6.95(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，3.96(3H，s，H-9)，2.57(3H，s，H －8).13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：196.9(C-7)，150.4(C-4)，146.6(C-3)，130.2(C-1)，124.0(C-6)，113.7(C-5)，109.7(C-2)，56.1(C-9)，26.2(C-8).結(jié)合文獻(xiàn)中化合物Ⅰ的碳譜數(shù)據(jù)及化合物香草乙酮的氫譜數(shù)據(jù)［4］，確定該化合物為香草乙酮(acetovanillone).結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1(c).

化合物Ⅵ：白色針狀結(jié)晶.茴香醛－濃硫酸顯色為紫色斑點(diǎn).1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.68(3H，s，CH3-18)，1.01(3H，s，CH3-19)，0.93(3H，d，CH3-21)，0.83(3H，d，CH3-26)，0.81(3H，d，CH3-27)，0.84(3H，t，CH3-29)，5.36(1H，d，H－6)為環(huán)內(nèi)雙鍵上的烯碳質(zhì)子峰，3.52(1H，m，H-3)為多重峰，應(yīng)為CH與O相連，并且左右都連有CH2與之耦合所致.13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：37.2(C-1)，31.6(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.7(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7)，31.9(C-8)，50.1(C-9)，36.5(C-10)，20.0(C-11)，39.7(C-12)，42.3(C-13)，56.7(C-14)，24.3(C-15)，28.2(C-16)，56.0(C-17)，12.0(C-18)，19.4(C-19)，36.1(C-20)，18.6(C-21)，33.9(C-22)，26.0(C-23)，45.8(C-24)，29.1(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.0(C-28)，11.8(C-29).將化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道對(duì)照數(shù)據(jù)一致，確定化合物Ⅱ?yàn)?β-谷甾醇(β-sitosterol).結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1(d).

化合物Ⅴ：白色無(wú)定型粉末，磷鉬酸顯色呈藍(lán)色.1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：6.50(d，J=8.0，H-7)，6.24(d，J=8.0，H-6)，5.16(dd，J=15.2，7.2，H-22)，5.10(dd，J=15.2，7.2，H －23).13C － NMR(CDCl3，100 MHz)δ：34.7(C-1)，30.1(C-2)，66.4(C-3)，36.9(C-4)，82.2(C-5)，135.2(C-6)，132.3(C-7)，79.4(C-8)，51.1(C-9)，36.9(C-10)，23.4(C-11)，39.3(C-12)，44.6(C-13)，51.7(C-14)，20.6(C-15)，29.7(C-16)，56.2(C-17)，12.9(C-18)，18.2(C-19)，39.7(C-20)，20.9(C-21)，135.3(C-22)，132.3(C-23)，42.8(C-24)，33.1(C-25)，19.6(C-26)，20.0(C-27)，28.7(C-28)，17.6(C-29).將化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6－7］報(bào)道對(duì)照數(shù)據(jù)一致，確定化合為6，22-dien-3-OH-5，8-epidioxy-(3β，5α，8β，22E，24R)-stigmasta.結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1(e).

圖1 5種化合物結(jié)構(gòu)式Fig.1 The chemical structure of the five compounds

3 結(jié)論

本研究對(duì)角柱花全草95%乙醇提取物的石油醚部位進(jìn)行色譜分離，從中分離得到5種化合物，確定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為為藍(lán)雪醌，鄰苯二甲酸二異丁酯，香草乙酮，β-谷甾醇，6，22-dien-3-hydroxy-5，8-epidioxy-(3β，5α，8β，22E，24R)-stigmasta.以上化合物除藍(lán)雪醌外均為首次從角柱花中分離得到.該研究為建立角柱花的藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與應(yīng)用研究打下了良好的基礎(chǔ).

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