姜立波， 趙亞冬， 周興隆， 沈慧敏

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，蘭州 730070）

常用殺螨劑與頂孢霉Ahy1菌株的相容性及協(xié)同作用

姜立波， 趙亞冬， 周興隆， 沈慧敏＊

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，蘭州 730070）

為了篩選與頂孢霉菌株相容的化學(xué)殺螨劑，本文采用孢子萌發(fā)法和菌絲生長(zhǎng)速率法，測(cè)定了噠螨靈、蟲(chóng)螨腈和螺螨酯對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的影響及協(xié)同效應(yīng)。結(jié)果表明：噠螨靈、甲氰菊酯、四螨嗪、氟蟲(chóng)脲、螺螨酯、蟲(chóng)螨腈、螺蟲(chóng)乙酯在不同濃度下對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯與頂孢霉混用對(duì)二斑葉螨有一定的協(xié)同作用。噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯在高濃度下（25μg／mL、0.83μg／mL、60μg／mL），對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)的抑制率分別為27.67%、27.83%和29.22%，對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率分別為20%、18%和18%，抑制作用較低，有較好的相容性；25μg／mL噠螨靈、0.83μg／mL蟲(chóng)螨腈、60μg／mL螺螨酯與含孢量為1×106個(gè)／mL頂孢霉復(fù)配處理二斑葉螨11d，對(duì)二斑葉螨的致死效果明顯大于單用頂孢霉的處理，3種藥劑與頂孢霉復(fù)配劑對(duì)二斑葉螨的半數(shù)致死時(shí)間（LT50）分別為5.38、5.41、5.79d，較單用半數(shù)致死時(shí)間縮短了4.19、4.16、3.78d，提高了頂孢霉的殺螨速度。

頂孢霉； 殺螨劑； 相容性； 協(xié)同作用

農(nóng)業(yè)害螨的防治長(zhǎng)期依賴于化學(xué)殺螨劑，但由于農(nóng)藥殘留污染、螨類害蟲(chóng)的抗藥性等問(wèn)題使農(nóng)業(yè)害螨的防治面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。利用真菌生產(chǎn)殺蟲(chóng)劑，不僅可以解決單純依賴使用化學(xué)農(nóng)藥帶來(lái)的一系列環(huán)境問(wèn)題，而且也是克服害蟲(chóng)對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題的有效途徑［1－3］。但生防真菌制劑的有效成分是嚴(yán)格意義的侵染體，其殺蟲(chóng)效果因侵染體存在潛伏期而使其藥效緩慢。因此篩選與蟲(chóng)生真菌生物學(xué)相容的化學(xué)殺蟲(chóng)劑與微生物制劑混用，使化學(xué)藥劑的速效性與真菌制劑持效性相結(jié)合，可大幅降低化學(xué)藥劑的施用量及快速、有效控制害蟲(chóng)為害［4－5］。在生防真菌制劑的研究中，雖然化學(xué)殺蟲(chóng)劑的相容性受到重視和利用，但化學(xué)殺螨劑的相容性問(wèn)題卻研究甚少，是真菌殺螨劑開(kāi)發(fā)中必須解決的重要問(wèn)題。

頂孢霉（Acremoniumhansfordii），屬于半知菌亞門絲孢綱（Hyphomycetes），叢梗孢目（Moniliales），采自甘肅省榆中縣黃家莊桃蚜上，由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室鑒定。在對(duì)Ahy1菌株生物學(xué)特性［7］、培養(yǎng)條件［8－9］、對(duì) 蚜 蟲(chóng) 和 二 斑 葉 螨 侵 染力［10］以及侵染 途 徑、侵 染 機(jī) 理［11－12］和 加 工 制 劑［13］研究的基礎(chǔ)上，為了提高頂孢霉對(duì)二斑葉螨速效性，減少殺螨劑對(duì)頂孢霉菌株的影響，本文對(duì)7種常用化學(xué)殺螨劑與頂孢霉的相容性及菌藥協(xié)同作用進(jìn)行研究，以期為菌藥復(fù)配防治農(nóng)業(yè)害螨提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌種：頂孢霉菌株Ahy1由采自榆中黃家莊自然感病的桃蚜尸上分離獲得，經(jīng)純化保存于4℃冰箱中。

供試螨：二斑葉螨種群于2007年4月底采自甘肅蘭州國(guó)家級(jí)森林公園興隆山，采用雌雄單系繁殖飼養(yǎng)而成。

培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基，SDY培養(yǎng)液。

供試藥劑：7種供試藥劑按田間使用濃度，設(shè)高、中、低3個(gè)濃度：①高濃度：田間使用濃度；②中濃度：田間使用濃度稀釋5倍；③低濃度：田間使用濃度稀釋10倍。供試殺螨劑及濃度見(jiàn)表1。

表1 供試殺螨劑品種來(lái)源及其有效成分使用濃度

1.2 7種殺螨劑對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)影響的測(cè)定方法

采用孢子萌發(fā)法。將活化的頂孢霉接入含0.05%Tween－80的SDY培養(yǎng)液中，充分振蕩混勻，并將孢子懸浮液濃度調(diào)到1.0×106個(gè)／mL，培養(yǎng)液中首先加入各濃度的供試殺螨劑。將各殺螨劑不同濃度處理的孢子懸液在（28±1）℃下振蕩（100r／min）培養(yǎng)24h，用移液器取樣，在血球計(jì)數(shù)板上鏡檢孢子萌發(fā)情況，按下式計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率［14］，每種處理重復(fù)3次，以不加殺螨劑的孢子懸浮液為對(duì)照。

1.3 7種殺螨劑對(duì)頂孢霉菌絲生長(zhǎng)影響的測(cè)定方法

采用生長(zhǎng)速率法。每培養(yǎng)皿倒入16mL的PDA培養(yǎng)基，每種藥劑各濃度的藥量按表2加入培養(yǎng)基中制成含毒培養(yǎng)基。

表2 7種殺螨劑在含毒培養(yǎng)基中加入劑量

將藥劑加入培養(yǎng)皿中搖勻待冷卻，將培養(yǎng)好的頂孢霉制成直徑0.5cm的菌餅，接入上述各含毒培養(yǎng)皿中間，每處理重復(fù)3次，以不加藥劑為對(duì)照。7d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，按下式計(jì)算生長(zhǎng)抑制率。

1.4 3種殺螨劑與頂孢霉混配對(duì)二斑葉螨協(xié)同作用生物測(cè)定方法

將篩選出的與頂孢霉相容性好的3種殺螨劑分別與頂孢霉菌株（含孢量為1.0×106個(gè)／mL）1∶1配制成菌藥混合劑，每種殺螨劑設(shè)高、中、低3個(gè)濃度處理，設(shè)不加藥的孢子懸浮液處理和蒸餾水空白對(duì)照，共11個(gè)處理。

在葉螨飼養(yǎng)臺(tái)上的菜豆葉片上，挑取二斑葉螨雌成螨30頭，用微型噴霧器，從空白對(duì)照、低濃度至高濃度依次噴霧處理供試二斑葉螨，每個(gè)處理重復(fù)3次。處理后將培養(yǎng)皿置于光照培養(yǎng)箱（25℃，12L∥12D，濕度75%）中培養(yǎng)觀察，分別于處理后第3、5、7、9天和11天定時(shí)觀察記錄二斑葉螨的死亡蟲(chóng)數(shù)。檢查方法為：用毛筆輕觸螨體，以螨足不動(dòng)者為死亡。按照下面公式計(jì)算不同處理中的螨校正死亡率。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺螨劑對(duì)頂孢霉Ahy1孢子萌發(fā)的影響

7種殺螨劑對(duì)頂孢霉Ahy1孢子萌發(fā)的影響測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。7種殺螨劑對(duì)頂孢霉Ahy1孢子具有不同程度的抑制作用。噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯對(duì)頂孢霉Ahy1孢子抑制作用較低，有良好的相容性，3個(gè)藥劑在高濃度下（25、0.83、60μg／mL），對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)的抑制率分別為27.67%、27.83%和29.22%，抑制作用較低；甲氰菊酯、四螨嗪、氟蟲(chóng)脲和螺蟲(chóng)乙酯抑制作用顯著（p＞0.05）。噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯在低濃度下（2.5、0.08、6μg／mL）對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率分別為22.22%、20.22%、24.11%，抑制作用不明顯；螺蟲(chóng)乙酯在3種濃度下對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率分別為67.38%，63.78%，57.67%，有較高的抑制作用，說(shuō)明與頂孢霉Ahy1相容性較差。

結(jié)果表明：噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)影響較小，高濃度下抑制率均在30%以下，有較好的相容性；螺蟲(chóng)乙酯、四螨嗪和氟蟲(chóng)脲對(duì)頂孢霉孢子萌發(fā)影響較大，低濃度下抑制率均在30%以上，相容性較差。

表3 7種殺螨劑不同濃度對(duì)頂孢霉Ahy孢子萌發(fā)的影響1）

表4 7種殺螨劑對(duì)頂孢霉Ahy生長(zhǎng)速率的影響1）

2.2 7種殺螨劑對(duì)頂孢霉Ahy1菌絲生長(zhǎng)的影響

從表4中看出，供試7種殺螨劑對(duì)頂孢霉菌株的菌絲生長(zhǎng)均有不同程度抑制作用。噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯在高濃度下（25、0.83、60μg／mL），抑制率分別為20%、18%、18%，抑制作用較低，有好的相容性；甲氰菊酯、氟蟲(chóng)脲、螺蟲(chóng)乙酯在高濃度下（100、50、48μg／mL），抑制率分別為 29%、39%、50%，抑制作用顯著，與頂孢霉的相容性差；噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯在低濃度下（2.5、0.08、6μg／mL），抑制率分別為15%、11%、16%，抑制作用不明顯，有良好的相容性；甲氰菊酯、氟蟲(chóng)脲、螺蟲(chóng)乙酯在低濃度（10、5、4.8μg／mL）下對(duì)頂孢霉菌絲生長(zhǎng)抑制率分別為27%、34%、44%，相容性較差。

結(jié)果表明：蟲(chóng)螨腈、螺螨酯、噠螨靈、四螨嗪對(duì)頂孢霉菌絲生長(zhǎng)影響較小，高濃度下抑制率均在23%以下，有較好的相容性；螺蟲(chóng)乙酯、氟蟲(chóng)脲和甲氰菊酯對(duì)頂孢霉菌絲生長(zhǎng)影響較大，低濃度下抑制率均在27%以上，相容性較差。

2.3 3種殺螨劑與頂孢霉的協(xié)同作用測(cè)定結(jié)果

3種殺螨劑與頂孢霉混配后對(duì)二斑葉螨的協(xié)同作用測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5和表6。由表5可知，頂孢霉（Ahy1）含孢量為1×106個(gè)／mL與25μg／mL噠螨靈、0.83μg／mL蟲(chóng)螨腈、60μg／mL螺螨酯復(fù)配處理第11天后，對(duì)二斑葉螨的校正死亡率分別為66.67%、58.33%、58.33%，較單用頂孢霉藥效分別提高65%、60.00%、60.00%。

表5 3種殺螨劑與頂孢霉Ahy復(fù)配對(duì)二斑葉螨協(xié)同作用測(cè)定結(jié)果

由表6可知，頂孢霉（Ahy1）含孢量為1×106個(gè)／mL與25μg／mL噠螨靈、0.83μg／mL蟲(chóng)螨腈、60μg／mL螺螨酯復(fù)配致死時(shí)間（LT50／d）分別為5.38、5.41、5.79d，較單用頂孢霉致死時(shí)間縮短4.19、4.16、3.78d，明顯提高了殺螨速度。

結(jié)果表明：25μg／mL噠螨靈、0.83μg／mL蟲(chóng)螨腈、60μg／mL螺螨酯與含孢量為1×106個(gè)／mL頂孢霉復(fù)配處理11d，對(duì)二斑葉螨致死效果要明顯大于單用頂孢霉的處理，從LT50的測(cè)定結(jié)果來(lái)看，25μg／mL噠螨靈，0.83μg／mL蟲(chóng)螨腈，60μg／mL螺螨酯與頂孢霉復(fù)配，明顯縮短了致死時(shí)間，顯示了良好的增效作用。

表6 頂孢霉Ahy與殺螨劑復(fù)配對(duì)二斑葉螨的致死時(shí)間

3 討論

蟲(chóng)生真菌與常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥的相容性是害蟲(chóng)微生物防治實(shí)踐中的關(guān)鍵性問(wèn)題。有的研究側(cè)重于農(nóng)藥對(duì)殺蟲(chóng)真菌的增效作用［15］，有些則注重保護(hù)殺蟲(chóng)真菌制劑免受化學(xué)農(nóng)藥的負(fù)面作用［16］。在相關(guān)研究報(bào)道中，發(fā)現(xiàn)真菌孢子對(duì)化學(xué)農(nóng)藥的反應(yīng)隨菌種、農(nóng)藥種類及使用濃度不同而有所差異且無(wú)規(guī)律可循［17］。因此蟲(chóng)生真菌與化學(xué)農(nóng)藥混用前，需要我們不斷地試驗(yàn)蟲(chóng)生微生物與化學(xué)農(nóng)藥的相容性，才能避免盲目地進(jìn)行混用，有效地提高防治效果。

本研究所用菌株是采自甘肅省榆中縣黃家莊的頂孢霉，關(guān)于該菌株的殺蟲(chóng)活性在國(guó)內(nèi)報(bào)道較少，宋麗雯的研究證實(shí)了頂孢霉菌株對(duì)桃蚜有很強(qiáng)的致病力，以8.006×104個(gè)孢子／mm2處理桃蚜，累積死亡率達(dá)到40.32%［11］；尚軼的研究證實(shí)了頂孢霉對(duì)二斑葉螨25℃下平均侵染率達(dá)到18.63%［13］。為了進(jìn)一步提高頂孢霉對(duì)二斑葉螨的侵染率，作者進(jìn)行了頂孢霉與常用殺螨劑相容性與協(xié)同作用研究。研究表明噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯在高濃度下對(duì)頂孢霉抑制作用較低，明顯縮短了致死時(shí)間，表現(xiàn)了較好的相容性和協(xié)同作用。通過(guò)合理的混用，可減少化學(xué)殺螨劑的使用劑量。本研究?jī)H做了化學(xué)殺螨劑與頂孢霉短時(shí)間接觸的影響試驗(yàn)，對(duì)于較長(zhǎng)時(shí)間保存后菌藥的相容性問(wèn)題還有待進(jìn)一步研究。對(duì)于相容性較差的農(nóng)藥種類及其濃度，應(yīng)進(jìn)一步研究引起不相容的原因，因?yàn)檗r(nóng)藥中的助劑也可能抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)［18］。本試驗(yàn)僅用含孢量為1×106個(gè)／mL的頂孢霉與噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯的3種劑量以1∶1比例混合，有必要進(jìn)一步研究噠螨靈、蟲(chóng)螨腈、螺螨酯與頂孢霉其他比例混用的效果，以期獲得菌藥混用的最佳配比和增效作用。

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Biocompatibility betweenAcremoniumhansfordiiand common acaricides and the synergistic effect

Jiang Libo， Zhao Yadong， Zhou Xinglong， Shen Huimin
（CollegeofGrasslandSciences，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China）

In order to screen chemical acaricides of comparatively high compatibility withA.hansfordii，the effects of pyridaben，chlorfenapyr and spirodiclofen on conidial germination and mycelial growth ofAcremonium hansfordiiand synergistic effect were determined by spore germination and mycelium growth rate method.The results showed that pyridaben，fenpropathrin，clofentezine，flufenoxuron，spirodiclofen，chlorfenapyr and spirotetramat inhibited the spore germination and mycelium growth ofA.hansfordiiat different concentrations，and the inhibition was shown to different extents.Pyridaben，chlorfenapyr and spirodiclofen had a synergistic effect withA.hansfordiiagainst two－spotted spider mite.Pyridaben，chlorfenapyr and spirodiclofen had an inhibiting action on conidial germination ofA.hansfordii，and their inhibiting efficiencies were 27.67%，27.83%and 29.22%，respectively，at higher concentration.They had an inhibiting action on mycelial growth ofA.hansfordii，and their inhibiting efficiencies were 20%，18%and18%，respectively.Their inhibition on some isolates was significantly reduced，and they had a better compatibility withA.hansfordii.The results of bioassays showed that it had obvious synergism against two－spotted spider mite，whenA.hansfordii（1×106spores／mL）was mixed with pyridaben（25μg／mL），chlorfenapyr（0.83μg／mL）and spirodiclofen（60μg／mL）after 11 days.The LT50of the three kinds of acaricides mixed withA.hansfordii（1×106spores／mL）were 5.38 d，5.41 d and 5.79 d，respectively，4.19 d，4.16 d and3.78 d shorter，respectively，than that ofA.hansfordii（1×106spores／mL）used alone.

Acremoniumhansfordii； acaricides； compatibility； synergistic effect

S 482.2.92；S 482.52

A

10.3969／j.issn.0529－1542.2012.05.014

2012－01－11

2012－04－25

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201103020）

＊ 通信作者E－mail：ndshm＠gsau.edu.cn