劉 樅，韓榮春，徐保利，李先寬，王 冰

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

短梗五加［Acanthopanax sessilifloms(Rupr.et Maxim.)Seem.］，又名無(wú)梗五加，為五加科(Araliaceae)五加屬多年生落葉灌木，其嫩莖俗稱(chēng)“刺?hào)拾簟?，是遼東和吉東山區(qū)人傳統(tǒng)食用數(shù)百年的野蔬珍品?！侗静菥V目》中對(duì)五加載述:“五加無(wú)毒，久服延年益老，功難盡述”。［1］本草記載:短梗五加的根皮具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、活血脈等功效。用于治療風(fēng)寒濕痹、腰膝疼痛、筋骨痿軟、小兒行遲、體虛贏(yíng)弱等病癥［2］。

民間多把短梗五加干燥根和根莖或莖當(dāng)作刺五加正品混用，刺五加及短梗五加中含有大量的苷類(lèi)物質(zhì)，其中刺五加苷B、E和異嗪皮啶為主要的活性成分［3］。刺五加苷B又稱(chēng)紫丁香苷，具有很強(qiáng)的止血作用，是一種強(qiáng)抗肝毒藥物，其恢復(fù)微粒體酶系統(tǒng)的酶活性及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用可以促進(jìn)肝毒代謝并改善肝功能使之正?；６愢浩む?7－羥基－6，8－二甲氧基香豆素)是藥典中刺五加藥材起鎮(zhèn)靜安神作用的物質(zhì)基礎(chǔ)［4］。刺五加苷E是具有明顯的抗應(yīng)激反應(yīng)的作用。本實(shí)驗(yàn)利用HPLC對(duì)刺五加及短梗五加根皮中的3種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD檢測(cè)器(G1314A)，四元泵(G1311A)(美國(guó) Agilent公司)，色譜柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm×150 mm);電子天平(瑞士 Mettler Toledo AG285、AE240);KQ－250型超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑

甲醇為色譜純和分析純，重蒸餾水。

1.3 對(duì)照品

刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶(均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)分別為20110824、20110824及20111024)。

1.4 實(shí)驗(yàn)材料

刺五加根采于遼寧千山中溝向陽(yáng)山坡，短梗五加根采于遼寧千山北溝背陰山腳。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm ×150 mm);流動(dòng)相:甲醇(A)－水(B)，梯度洗脫:(0～15 min:20A;15～20 min:21A;20～35 min:30A);檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm;流速:0.8 mL·min－1;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取干燥至恒重的刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶對(duì)照品，制備成刺五加苷B:160 μg·mL－1、刺五加苷 E:204 μg·mL－1、異嗪皮啶:38 μg·mL－1的對(duì)照品溶液，備用。

2.3 供試品制備

取刺五加及短梗五加根皮樣品粉末(40目)約2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液，即得刺五加苷B、E及異嗪皮啶供試品溶液［5］，進(jìn)樣量 10 μL，色譜圖見(jiàn)圖 1。

圖1 A:混合標(biāo)準(zhǔn)品;B:刺五加根皮HPLC圖譜;C:短梗五加根皮HPLC圖譜

2.4 線(xiàn)性關(guān)系的考察

分別精密吸取2、4、6、8、10 μL 刺五加皂苷 B、E及異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)品溶液，注入液相色譜器儀中，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得刺五加皂苷B的線(xiàn)性回歸方程為 y=367.24x－15.115，r=0.9995，在 0.3240 ～1.6200 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。刺五加苷E回歸方程為 y=72.127x－3.9780，r=0.9998。在0.4080 ～2.0400 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。異嗪皮啶回歸方程為 y=306.17x－150.97，r=0.9998。在 0.0760 ～0.3800 μg 范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。…

2.5 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，按前述色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定色譜峰面積，得RSD值分別為1.1%，1.4%和1.4%。測(cè)定結(jié)果表明，本試驗(yàn)精密度試驗(yàn)符合規(guī)定。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

供試品配制后分別按 2、4、6、8、10 h 的時(shí)間間隔進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，得刺五加苷B的RSD為1.54%，刺五加苷E的RSD為1.08%，異嗪皮啶的RSD為1.64%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試液制備后10 h測(cè)定，色譜峰面積無(wú)明顯變化，在此時(shí)間內(nèi)，待測(cè)組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱(chēng)取刺五加根皮粉末6份，按2.3項(xiàng)方法制備，精密吸取樣品液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣分析，測(cè)定刺五加苷B的RSD為1.2%，刺五加苷E的RSD為1.8%，異嗪皮啶的RSD為0.7%。試驗(yàn)結(jié)果表明，待測(cè)組分重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，分別取已知含量的刺五加根皮樣品6份，各0.125 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入刺五加苷B、E及異嗪皮啶對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)方法制備，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定刺五加苷B的RSD為0.7%，刺五加苷E的RSD為1.3%，異嗪皮啶的RSD為0.6%。

3 含量測(cè)定結(jié)果

精密吸取刺五加及短梗五加樣品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，每一樣品重復(fù)進(jìn)樣3次，測(cè)定色譜峰面積，測(cè)定結(jié)果平均值見(jiàn)表1。

表1 刺五加及短梗五加根皮有效成分含量(mg·g－1)

4 結(jié)果與討論

4.1 本試驗(yàn)優(yōu)化了藥典中等度洗脫的色譜檢測(cè)方法，采用甲醇︰水梯度洗脫的方法對(duì)刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及異嗪皮啶進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果顯示所建立的方法簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確度高，可用于刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及異嗪皮啶含量的測(cè)定。

4.2 本試驗(yàn)結(jié)果表明，刺五加根皮樣品中3種指標(biāo)成分的含量多大于文獻(xiàn)［6－12］中的報(bào)道，短梗五加根皮樣品中刺五加苷B和刺五加苷E的含量明顯低于刺五加根皮中這兩種指標(biāo)成分的含量，而異嗪皮啶的含量則只是略低于刺五加根皮中含量。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道指標(biāo)成分異嗪皮啶有鎮(zhèn)靜安神的作用，故推測(cè)短梗五加根皮在鎮(zhèn)靜安神方面有一定的療效。鑒于國(guó)內(nèi)外對(duì)短梗五加的研究較少，有關(guān)結(jié)論還有待于近一步深入研究。

［1］曹先蘭，李珠蓮.刺五加國(guó)外實(shí)驗(yàn)研究［J］.中草藥，1980，11(6):277－283.

［2］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草［M］.上海:上?？萍汲霭嫔?，1251.

［3］吳立軍，鄭健，姜寶虹，等.刺五加莖葉化學(xué)成分［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999，34(4):294.

［4］張麗萍，陳麗穎，孫棫久，等.刺五加果化學(xué)成分的分析［J］.東北師大自然科學(xué)版，1992，21(1):123－247.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部［M］.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:192.

［6］勞鳳云，李小娜，邢朝斌，等.HPLC法測(cè)定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷 E的含量［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，35(12):2280－2281.

［7］張萍.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)年限刺五加藥材中異嗪皮啶［J］.藥物分析雜志，2010，30(12):2433－2435.

［8］姜文紅，劉靜，仲昭慶，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定刺五加浸膏中3種有效成分的含量［J］.藥物分析雜志，2010，30(6):1145－1147.

［9］吳少杰，邢朝斌，勞鳳云，等.不同產(chǎn)地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色譜測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(8):1854－1855.

［10］張晶，劉芳芳，薛起，等.HPLC法測(cè)定刺五加不同部位刺五加苷 B、E含量［J］.藥物分析雜志.2008，28(12):2018－2020.

［11］張崇喜，王桐玉，田芯，等.不同采收期野生和仿生刺五加根與莖中紫丁香苷和總黃酮含量測(cè)定［J］.中成藥，2009，31(1):82－85.

［12］胡廣東，胡新海，宋鐵兵，等.刺五加中刺五加苷E的含量測(cè)定［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2009，32(5):19－20.