楊文娟，徐選福，郭傳勇

(1.同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院急診科，上海 200072;2.同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院肝病科，上海 200072)

非甾體類抗炎藥(non－steroidal anti－inflammatory drugs，NSAIDs)是臨床最常用的藥物之一。然而，NSAIDs導(dǎo)致的消化道損傷常常限制了它的使用。而對(duì)上皮細(xì)胞的局部刺激和抑制細(xì)胞保護(hù)性前列腺素合成是NSAIDs引起胃十二指腸損傷的主要原因。非甾體類抗炎藥主要通過(guò)抑制環(huán)氧化酶活性，從而抑制了具有細(xì)胞保護(hù)作用的胃黏膜前列腺素的合成，誘發(fā)黏膜病變或促進(jìn)消化性潰瘍的發(fā)生。塞來(lái)昔布是一種新型非甾體抗炎藥，本研究比較了塞來(lái)昔布與傳統(tǒng)非甾體類抗炎藥(消炎痛)及使用胃黏膜保護(hù)藥西咪替丁后消炎痛對(duì)老齡大鼠(老齡大鼠胃黏膜對(duì)損傷的敏感性較高)［1］GMBF，胃黏膜組織 6－keto－PGF1α、TXB2水平的影響，并觀察了胃黏膜光鏡和掃描電鏡下形態(tài)學(xué)改變，以評(píng)價(jià)其胃腸道安全性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague－Dawley雄性健康老齡大鼠，月齡18～20個(gè)月。(上海西普爾—必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)。

1.1.2 藥品與試劑 TXB2、6－keto－PGF1α放免藥盒(北京東亞免疫技術(shù)研究所);塞來(lái)昔布(輝瑞制藥有限公司);消炎痛(上海九福藥業(yè)公司);西咪替丁(中美天津史克制藥有限公司)。

1.1.3 儀器設(shè)備 LDF－3激光多普勒血流計(jì)及計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)(天津南開大學(xué));SN－682放射免疫γ計(jì)數(shù)器(中國(guó)科學(xué)院上海核研究所日環(huán)儀器廠);S－450掃描電鏡(日本Hitachi公司)。

1.2 方法

1.2.1 分組與操作 取健康純種SD老齡大鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只。各組大鼠禁食18 h、禁水1 h后，分別予生理鹽水、0.1%消炎痛、2%塞來(lái)昔布、10%西咪替丁5 ml/kg灌胃，西米替丁組1 h后復(fù)予0.1%消炎痛5 mg/kg灌胃。4 h后，以2%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉，剖腹，沿賁門前胃剪開，測(cè)定胃黏膜血流;剪開胃大彎，冰生理鹽水沖洗胃腔，肉眼觀胃黏膜改變;每組任取2只，于胃后壁取黏膜組織一塊(0.5 cm ×0.5 cm)，2.5%戊二醛固定后送掃描電鏡;其余8只于相同部位取胃黏膜組織一塊(0.5 cm×0.5 cm)即刻置液氮中保存待測(cè) 6－keto－PGF1α、TXB2含量;余胃以 10% 中性緩沖福爾馬林固定，制作病理組織切片，根據(jù)光鏡下組織病理學(xué)改變計(jì)算胃黏膜損傷指數(shù)。

1.2.2 損傷指數(shù)(LI)判定 參考 Eric等的0～4分方案進(jìn)行判定。

胃壁全層未見明顯病變?yōu)?分;病變限黏膜層，上皮細(xì)胞變性，黏膜充血水腫，少許出血糜爛，黏膜淺層炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為1分;病變達(dá)黏膜下層，明顯點(diǎn)片狀出血糜爛，毛細(xì)血管擴(kuò)張，黏膜層及黏膜下層中性白細(xì)胞浸潤(rùn)為2分;病變累及黏膜肌層為3分。

1.2.3 6－keto－PGF1α、TXB2放射免疫測(cè)定程序

1.2.3.1 樣品處理 待測(cè)標(biāo)本由液氮置4℃冰箱復(fù)溫?？焖俜Q取胃黏膜約20 mg置微型勻漿器中，加無(wú)水乙醇0.1 ml研磨，再加生理鹽水0.9 ml充分研磨制成勻漿，4℃離心(3 500 r/min，15 min)取上清。

1.2.3.2 6－keto－PGF1α測(cè)定采用非平衡法 各取200 μl樣品上清液置聚苯乙烯管中，另取7只聚苯乙烯管，編號(hào) S1～S7，依次加入不同濃度(25、50、100、200、400、800、1 600)pg/ml，標(biāo)準(zhǔn)液各200 μl;再分別加入抗血清100 μl，振蕩混勻，放37℃ 6 h后于各管加入 125I－6－keto－PGF1α100 μl，混勻，放 4 ℃24 h，最后加 PR 試劑各 500 μl，充分混勻，室溫15 min，4 ℃ 離心，3 500 r/min，20 min，任取其中 2管測(cè)cpm計(jì)算平均總放射強(qiáng)度(T);吸干上清，測(cè)各管沉淀cpm，得非特異結(jié)合值(NSB)，最大結(jié)合值(B0)和各管特異性結(jié)合值(B)。

1.2.3.3 TXB2測(cè)定采用平衡法 各取 200 μl樣品上清液置聚苯乙烯管中，另取7只聚苯乙烯管，編號(hào) S1 ～ S7，依次加入不同濃度(12.5、25、50、100、200、400、800)pg/ml，標(biāo)準(zhǔn)液各 200 μl;再分別加入抗血清及 125I－TXB2各 100 μl，振蕩混勻，放 4 ℃24 h，最后加 PR 試劑各 500 μl，充分混勻，室溫15 min，4 ℃ 離心，3 500 r/min，20 min，任取其中 2管測(cè)cpm計(jì)算平均總放射強(qiáng)度(T);吸干上清，測(cè)各管沉淀cpm，得非特異結(jié)合值(NSB)，最大結(jié)合值(B0)和各管特異性結(jié)合值(B)。

1.2.3.4 以B/B0計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測(cè)樣品結(jié)合百分率，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出樣品濃度，再根據(jù)稱取組織量，計(jì)算出每 mg 大鼠胃黏膜組織中 6－keto－PGF1α、TXB2的相應(yīng)含量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均使用 SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。各組數(shù)據(jù)以(ˉx±s)表示，各組間差異采用單因素方差A(yù)NOVA檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 胃黏膜組織病理學(xué)改變

生理鹽水對(duì)照組大鼠胃黏膜色澤紅潤(rùn)，未見損傷性改變，光鏡下細(xì)胞形態(tài)良好。塞來(lái)昔布組黏膜上皮少量變性，黏膜層可見散在中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);消炎痛組胃黏膜充血明顯，廣泛點(diǎn)片狀出血糜爛灶，散在潰瘍，光鏡下黏膜上皮細(xì)胞變性普遍，毛細(xì)血管廣泛擴(kuò)張充血，黏膜層可見片狀或灶狀出血，黏膜下層亦見;并可見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及水腫改變。西咪替丁組胃黏膜散在針尖樣出血及點(diǎn)片狀糜爛，潰瘍偶見。

2.2 掃描電鏡觀察

對(duì)照組大鼠胃黏膜在掃描電鏡下光滑而略有起伏，上皮細(xì)胞排列規(guī)則，被覆一薄層連續(xù)的黏液;高倍鏡下可見細(xì)胞表面粗糙，顆粒(細(xì)胞分泌的糖蛋白)和黏液絲多見。塞來(lái)昔布組胃黏膜凝膠層較厚，黏液絲多見，上皮細(xì)胞排列基本整齊，散在破潰細(xì)胞，偶見出血。消炎痛組掃描電鏡下可見黏液層變薄，不連續(xù)，黏膜表層細(xì)胞破損，腺體細(xì)胞脫落，部分區(qū)域上皮細(xì)胞廣泛剝脫，其下組織暴露或細(xì)胞排列零亂，可見明顯出血現(xiàn)象。西咪替丁組胃黏膜被覆黏液層較厚，黏液絲豐富，上皮細(xì)胞排列基本整齊，偶見破潰、脫落或出血。

2.3 胃黏膜組織損傷指數(shù)(LI)

塞來(lái)昔布組大鼠胃黏膜 LI為(0.21 ±0.23)，與消炎痛組及西咪替丁組相比差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.05);與生理鹽水對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。消炎痛組大鼠胃黏膜LI為(2.17±0.32)，與生理鹽水對(duì)照組相比差異有顯著性(P＜0.01)，與西咪替丁組(1.08 ±0.34)相比，差異也有顯著性(P＜0.01)。

2.4 黏膜血流改變(GMBF)

塞來(lái)昔布組GMBF為(4.02±0.52)，減少較消炎痛組(1.64 ±0.29)及西咪替丁組(3.12 ±0.31)為弱(P＜0.01，P＜0.05);與生理鹽水對(duì)照組(4.59 ±0.27)相比，差異也有顯著性(P＜0.01)。消炎痛組GMBF較生理鹽水對(duì)照組及西咪替丁組亦明顯降低(均P＜0.01)。

2.5 胃黏膜組織 6－keto－PGF1α、TXB2 含量變化

生理鹽水對(duì)照組大鼠胃黏膜 6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為158.80 ±45.22、107.09 ±16.07 pg/mg 濕重。消炎痛組 6－keto－PGF1α、TXB2水平顯著下降至(31.16 ±12、83)、(17.79 ±3.28)pg/mg 濕重，較生理鹽水對(duì)照組抑制率分別為80.38%和83.39%，差異有顯著性(P＜ 0.01);塞來(lái)昔布組6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為(150.51 ± 35.38)、(95.10±15.43)pg/mg濕重，較對(duì)照組抑制率僅分別為5.22% 和11.20%(P＞0.05)，與消炎痛組相比有明顯差別(P＜0.01)。西米替丁組 6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為(69.87 ±57.35)、(27.97 ±26.39)pg/mg濕重，塞來(lái)昔布組與之相比，兩者差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。西咪替丁雖能減少胃黏膜6－keto－PGF1α、TXB2水平的下降，但與消炎痛組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組GMBF，6-keto-PGF1α、TXB2水平和損傷指數(shù)Tab.1 The GMBF and 6-keto-PGF1α，TXB2level and LI of each group ±s)

表1 各組GMBF，6-keto-PGF1α、TXB2水平和損傷指數(shù)Tab.1 The GMBF and 6-keto-PGF1α，TXB2level and LI of each group ±s)

*與生理鹽水組P＜0.01，＊＊與消炎痛組P＜0.01，＊＊＊與塞來(lái)昔布組P＜0.05

分組 GMBF(V) 6－keto－PGF1α(pg·mg－1)TXB2(pg·mg－1)LI生理鹽水組 4.59 ±0.27 158.80 ±45.22 107.09 ±16.07 0消炎痛組 1.64 ±0.29* 31.16 ±12.83* 17.79 ±3.28* 2.17 ±0.32*塞來(lái)昔布組 4.02±0.52＊＊ 150.51±35.38＊＊ 95.10±15.43＊＊ 0.21±0.23＊＊西咪替丁組 3.12±0.31＊＊＊ 69.87±57.35＊＊＊ 27.97±26.39＊＊＊ 1.08±0.34＊＊＊

3 討 論

非甾體類抗炎藥是一大類不含皮質(zhì)激素而具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用的藥物，臨床應(yīng)用非常廣泛。但是其致胃腸道潰瘍出血的嚴(yán)重副作用也限制了該類藥物的使用情況［2］。

研究發(fā)現(xiàn)NSAID的致胃十二指腸潰瘍因素主要為對(duì)上皮細(xì)胞的局部刺激作用和抑制PGs合成［3－4］。傳統(tǒng)的NSAID局部刺激主要指降低胃內(nèi)膠態(tài)黏液層的疏水性，破壞胃黏膜屏障，增強(qiáng)胃酸誘發(fā)損傷。而PGs合成的抑制主要是由于傳統(tǒng)NSAID在發(fā)揮抗炎作用時(shí)抑制了環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)，干擾了花生四稀酸代謝，從而阻止外周和中樞前列腺素(PGs)的合成，增強(qiáng)了胃腸蠕動(dòng)能力，削弱胃腸黏膜的防御機(jī)制［5］。前列環(huán)素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)均是花生四烯酸代謝的活性產(chǎn)物，其穩(wěn)定代謝產(chǎn)物分別是 6－keto－PGF1α和 TXB2。COX 有兩 種同 功酶:COX－1)和 COX－2。COX－1 可誘導(dǎo)性差，主要調(diào)節(jié)細(xì)胞保護(hù)性前列腺素(PGI2，PGE1，PGE2)和TXA2的合成，保護(hù)胃黏膜不受胃酸侵蝕及調(diào)節(jié)胃黏膜的血流狀態(tài)。COX－2在受到炎癥因素刺激后高表達(dá)而COX－1對(duì)這種刺激幾無(wú)反應(yīng)［6］。而傳統(tǒng)的 NSAID對(duì)COX－1和COX－2均有抑制作用，只是抑制程度不同。因此，在不影響COX－1的前提下最大程度地抑制COX－2則意味著在保持療效的基礎(chǔ)上獲得最佳的安全性。

塞來(lái)昔布是一種COX－2抑制劑，通過(guò)抑制COX－2來(lái)抑制PG，且在人體正常治療濃度下對(duì)COX－1無(wú)抑制作用，所以對(duì)細(xì)胞保護(hù)性前列腺素及TXB2的合成影響較小［7］，從而能夠不導(dǎo)致消化道潰瘍、出血或影響血小板功能。同時(shí)塞來(lái)昔布的血漿蛋白結(jié)合率約為97%，口服對(duì)胃黏膜無(wú)直接刺激作用，吸收過(guò)程中對(duì)胃黏膜無(wú)明顯的直接毒性作用，并在肝臟經(jīng)完全而快速的代謝。本實(shí)驗(yàn)中塞來(lái)昔布組6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為(150.51 ± 35.38)、(95.10 ±15.43)pg/mg濕重，與對(duì)照組相比，抑制率分別為5.22% 和12.30%(P＞0.05)，GMBF(4.02 ±0.52)，與消炎痛組相比有顯著差異性(P＜0.01)，與生理鹽水對(duì)照組相比也有差異(P＜0.01)，表明塞來(lái)昔布對(duì)胃黏膜血流有一定影響，但對(duì)PGI2、PGE2及TXA2合成無(wú)明顯抑制［8］。光鏡及電鏡下觀察塞來(lái)昔布組胃黏膜損傷亦輕，損傷指數(shù)(0.21±0.23)，顯著低于消炎痛組(P＜0.01)。而消炎痛組 6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為(31.16 ±12.83)、(17.79 ±3.28)pg/mg，抑制率高達(dá)80.380%/83.39%，嚴(yán)重影響了胃黏膜前列腺素如 PGI2、PGE2及 TXA2的合成，GMBF 1.64 ±0.33，較對(duì)照組顯著降低(P＜0.01)，光鏡及電鏡下觀察胃黏膜損傷亦重。

西米替丁是一種H2受體拮抗劑，對(duì)胃酸分泌具有強(qiáng)大的抑制作用，還能緩解胃腸終末血管痙攣狀態(tài)從而增加胃黏膜的血流量，有利于胃黏膜屏障的重建，加強(qiáng)胃黏膜的保護(hù)作用［9］。預(yù)防使用西米替丁后，消炎痛對(duì)胃黏膜的損傷也有減小，GMBF、6－keto－PGF1α、TXB2水平分別為(3.12 ± 0.31)、(69.87 ±57.35)、(27.97 ±26.39)，損傷指數(shù)也有減少，但與塞來(lái)昔布相比，差別仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。并且在光鏡及電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)塞來(lái)昔布組胃黏膜損傷較預(yù)防使用西米替丁組胃黏膜損傷輕，由此可表明塞來(lái)昔布的相對(duì)胃腸道安全性。

PGs及TXA2合成的減少，導(dǎo)致胃酸分泌增多，胃黏膜表面黏液層變薄，H+反滲入胃黏膜;胃黏膜血管舒張狀態(tài)不能維持，黏膜血流減少，“黏液帽”內(nèi)pH下降，基底膜因酸受損;受損黏膜對(duì)胃酸的防御能力減弱，反滲胃酸使得黏膜局部酸度增加，增強(qiáng)了對(duì)藥物的吸收，進(jìn)而加重胃黏膜損害。塞來(lái)昔布特異性抑制COX－2而不影響COX－1顯示了其較傳統(tǒng)NSAID的胃腸道安全性［10］。

［1］Seo PJ，Kim N，Kim JH，et al.Comparison of Indomethacin，Diclofenac and Aspirin－Induced Gastric Damage according to Age in Rats［J］.Gut Liver，2012，6(2):210 －217.

［2］Lanas A，Sope?a F.Nonsteroidal anti－inflammatory drugs and lower gastrointestinal complications［J］.Gastroenterol Clin North Am，2009，38(2):333 －352.

［3］Fornai M，Colucci R，Antonioli L，et al.Effects of esomeprazole on healing of nonsteroidal antiinflammatory drug(NSAID)－induced gastric ulcers in the presence ofa continued NSAID treatment:Characterization of molecular mechanisms［J］.Pharmacol Res，2011，63(1):59 －67.

［4］Beppu K，Osada T，Shibuya T，et，al.Pathogenic mechanism of NSAIDs－induced mucosal injury in lower gastrointestinal tract［J］.Nihon Rinsho，2011，69(6):1083－1087.

［5］Takeuchi K.Pathogenesis of NSAID－induced gastric damage:importance of cyclooxygenase inhibition and gastric hypermotility ［J］. World J Gastroenterol，2012，18(18):2147 －2160.

［6］Fukuda S，Hosaka S，Ozawa N，et al.Gastric injury caused by low－dose aspirin therapyin consecutive Japanese patients:a prospective study［J］.Gen Thorac Cardiovasc Surg，2012，60(5):275 －279.

［7］Chan FK，Lanas A，Scheiman J，et al.Celecoxib versus omeprazole and diclofenac in patients with osteoarthritis and rheumatoid arthritis(CONDOR):a randomised trial［J］. Lancet，2010，376(9736):173－179.

［8］ZhaoH， Wang Y， Feng Y，etal. Effect of cycloxygenase 2 inhibitor on levels of prostaglandin E2 in plasma and in local infiltrated fluid after functional endoscopic sinus surgery［J］.Beijing Da Xue Xue Bao，2011，43(2):255 －258.

［9］沈迎春，袁肖海，楊文娟，等.三種胃黏膜保護(hù)藥物對(duì)消炎痛引起的老齡大鼠胃黏膜損傷的防護(hù)研究［J］.中華消化雜志，2008，28(3):203 －204.

［10］Menozzi A，Pozzoli C，Poli E，et al.Effects of nonselective and selective cyclooxygenase inhibitors on small intestinal motility in the horse［J］.Res Vet Sci，2009，86(1):129 －135.