崔金剛 黃怡文 金若敏▲ 齊雙巖▲ 姜 昕

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院（上海200437）

中藥藥性理論是中藥作用性質(zhì)及特征的集中概況，中藥的四性是指中藥寒熱溫涼四種不同的藥性，在人體中反映了影響其陰陽盛衰、寒熱變化作用趨勢，在實驗中則以治療不同證候的模型動物來反映和驗證中藥的藥性，那么探求中藥復(fù)方藥性是否也有必要采用這樣的方法進(jìn)行呢？左金丸與反左金丸均由黃連、吳茱萸兩味藥組成，但兩味藥用量比例正好相反，影響了復(fù)方藥物的藥性——偏寒與偏熱，本實驗采用不同證候模型動物觀察對小鼠產(chǎn)生的急性毒性及對大鼠胃粘膜損傷的作用，并進(jìn)一步分析中藥藥性－證候的相關(guān)性。

1 材料與方法 1.1 實驗材料 1.1.1 實驗動物：KM小鼠，體重18～20g，SD大鼠，體重160～180g，均雌雄各半，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，動物許可證SCXK（滬）2007～0005。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，實驗期間自由飲水、攝食，室內(nèi)溫度控制在22～24℃、通風(fēng)及濕度良好。

1.1.2 藥材及其制備：黃連Coptis chinensis Franch，毛茛科植物，產(chǎn)地：四川，批號：HY10052101；吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth，蕓 香 科 植 物，產(chǎn) 地：江 西，批 號：2010040345，藥物均購于上海雷允上中原分店。

藥物制備：左金丸（黃連∶吳茱萸＝6∶1），反左金丸（黃連∶吳茱萸＝1∶6）。取黃連及吳茱萸，水煎兩次，每次先以武火煮沸，再以文火加熱2h，過濾，合并兩次藥液，濃縮成1g生藥/mL的溶液。置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。兩種藥物制備相同。

1.1.3 主要試劑：鹽酸（F20061101），乙醚（20100419），75%乙 醇 （20110104），95% 乙 醇 （20100303），無 水 乙 醇（20100610），烏來糖（T20080530），甲醛 （20100304），二甲苯（20100304），均由中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司提供。

1.1.4 主要儀器：電子天平 ACS－6A（上海鷹牌衡器儀器有限公司），RM2235輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司），BX51/BX52型系統(tǒng)顯微鏡（日本Olympus光學(xué)株式會社）

1.1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用卡方檢驗和Ridit法進(jìn)行統(tǒng)計分析。P＜0.05為有顯著性差異。

1.2 方 法 1.2.1 對不同證候模型小鼠急性毒性試驗：取小鼠60只，雌雄各半，分為胃寒證模型或胃熱證模型組，左金丸胃寒證或胃熱證組，反左金丸胃寒證或胃熱證組。參考文獻(xiàn)[1]制備不同證候模型：胃寒證模型組小鼠灌服4℃冰水，胃熱證模型組小鼠灌服8%辣椒煎液，均為10mL/kg，1d2次，連續(xù)灌服7d后，動物禁食不禁水12h，稱重，灌服10mL/kg純水1h后胃寒證模型組每只灌服3mol/L的NaOH液1.5mL或胃熱證模型組每只灌服無水乙醇1mL。于1h后給藥組小鼠按體重分別單次灌服左金丸或反左金丸40g生藥/kg，模型組小鼠灌服等容量的純水。嚴(yán)密觀察給藥或純水后小鼠出現(xiàn)的各種急性毒性反應(yīng)癥狀，如毛色、行為、分泌物、排泄物、動物異常反應(yīng)的癥狀，以后連續(xù)觀察7d，并記錄動物死亡情況。

1.2.2 對不同證候模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響：取大鼠62只，雌雄各半，分組同1.2.1。參考文獻(xiàn)[1]分別制備不同證候模型：胃寒證模型組大鼠灌服4℃冰水，胃熱證模型組大鼠灌服8%辣椒煎液，10mL/kg，1d2次，連續(xù)灌服7d后，動物禁食不禁水1d，稱重，灌服10mL/kg純水1h后胃寒證模型組每只灌服3mol/L的NaOH液1.5mL或胃熱證模型組每只灌服無水乙醇1mL。于1h后給藥組大鼠按體重分別單次灌服左金丸或反左金丸20g生藥/kg，模型組灌服等容量的純水；1h后大鼠腹腔注射25%烏來糖溶液麻醉，取胃組織置于10%中性福爾馬林溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察胃粘膜的病理形態(tài)改變。評比標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]以胃粘膜出血、水腫損傷程度設(shè)定如下：±為少量損傷；＋為局部損傷；＋＋為較多損傷；＋＋＋為廣泛損傷。

2 結(jié) 果 2.1 對不同證候模型小鼠急性毒性試驗結(jié)果顯示，胃寒證模型組小鼠表現(xiàn)為毛發(fā)豎立，懶動、飲少、大便稀溏、量多，尾部發(fā)紫；胃熱證模型組小鼠表現(xiàn)為毛發(fā)松散，躁動、興奮、腳張立、大便量少、便質(zhì)干硬或顆粒狀，尾部發(fā)紫。給予左金丸后，胃寒證模型與胃熱證模型小鼠死亡率均為100%，與模型組比較有極顯著性差異（P＜0.01）。給予反左金丸后，反左金丸胃寒證組小鼠死亡1只，與胃寒證模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；反左金丸胃熱證組小鼠死亡7只，與胃熱證模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）；且反左金丸胃熱證組小鼠死亡率高于反左金丸胃寒證組，兩者比較，有極顯著性差異（P＜0.01），結(jié)果見表1。

表1 左金丸與反左金丸對不同證候模型小鼠急性毒性的比較研究

2.2 對不同證候模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響

2.2.1 對胃寒證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響 ：結(jié)果顯示，光鏡下可見胃寒證模型大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞有不同程度的出血、變性、水腫甚或凝固性壞死，左金丸組大鼠未見對胃粘膜粘細(xì)胞有保護(hù)作用，反左金丸組部分動物胃粘膜上皮出現(xiàn)少量輕度出血、水腫，損傷程度明顯減輕，與胃寒證模型組或與左金丸組比較均有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果見表2，圖1。

表2 左金丸與反左金丸對胃寒證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響

圖1 左金丸與反左金丸對胃寒證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響（HE染色，×100）

2.2.2 對胃熱證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響：結(jié)果顯示，光鏡下可見胃熱證模型大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞有不同程度的出血、變性、水腫甚或凝固性壞死，反左金丸組大鼠未見對胃粘膜細(xì)胞有保護(hù)作用，左金丸組部分動物胃粘膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)少量輕度出血、水腫，損傷程度明顯減輕，胃熱證模型組比較有顯著性差異（P＜0.05），但與反左金丸組比較無差異（P＞0.05）。結(jié)果見表3，圖2。

表3 左金丸與反左金丸對胃熱證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響

圖2 左金丸與反左金丸對胃熱證模型大鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)的影響（HE染色，×100）

3 討 論 左金丸最早收錄于《丹溪心法》，由黃連、吳茱萸按6∶1配比組成，功效：清肝瀉火，降逆止嘔。黃連苦寒，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)，重用黃連清熱燥濕，瀉火解毒為君藥。吳茱萸辛熱，有小毒，歸肝、脾、胃、腎經(jīng)，少佐吳茱萸散寒止痛，疏肝下氣，燥濕為佐使，二藥一主一輔，一寒一熱，相反相成，總方以偏寒性為主，主治肝火犯胃，癥見嘈雜吞酸，脘痞噯氣，胃脘灼痛等癥，是治療消化系統(tǒng)證屬肝氣犯胃的要方之一。反左金丸是后世受左金丸啟發(fā)而創(chuàng)制，由黃連、吳茱萸按1∶6組成，總方以偏熱性為主，用于脘痞嘈雜泛酸，又嘔吐清水，畏寒，舌苔白滑，偏于胃寒甚者[3]。左金丸和反左金均能治療嘔吐吞酸、嘈雜、胃脘痛等脾胃病癥，藥味相同，但由于配伍比例不同而引起的寒熱偏性不同，其臨床相對應(yīng)的證候也不相同，是“方證相應(yīng)”的典型例子。根據(jù)中醫(yī)“寒者熱之，熱者寒之”的理論，只有辨明證候的寒熱之性才能起到好的療效。因此選擇此二方作為驗證寒熱模型的研究藥物。

中藥藥性理論是中藥理論的核心之一，中醫(yī)治病應(yīng)根據(jù)中藥藥性遣藥，若精當(dāng)，用法準(zhǔn)確，對疾病的良好預(yù)后起著至關(guān)重要的作用；反之，所用中藥與疾病證候不符，就不僅達(dá)不到治療目的，而且很有可能出現(xiàn)毒性作用。本實驗采用左金丸與反左金丸分別灌服于胃寒證模型小鼠和胃熱證模型小鼠，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予左金丸后，胃寒證模型與胃熱證模型小鼠死亡率均為100%，推測可能本次使用左金丸的劑量過大，未能顯示出對兩種證候模型動物死亡率不同，這有待進(jìn)一步研究。給予偏熱性的反左金丸后，反左金丸胃寒證組小鼠死亡率僅為10%，與模型組動物情況相近，而反左金丸胃熱證組小鼠死亡死亡率為70%，且對胃熱證模型組小鼠死亡率高于胃寒證模型組（P＜0.01），表明證候模型不同，藥性會對小鼠產(chǎn)生的毒性程度不同，胃熱證模型灌服熱性藥物后毒性增大，提示藥性－證候－毒性之間存在一定的相關(guān)性。

陳艷芬等曾報道，左金丸和反左金丸對于寒、熱胃粘膜損傷模型大鼠的保護(hù)作用有一定的選擇性[4]。但是如果給予大劑量藥物，是會出現(xiàn)保護(hù)作用還是不良反應(yīng)呢？本研究結(jié)果表明，大劑量左金丸對胃熱證模型大鼠的胃組織粘膜有一定的保護(hù)作用，但對胃粘膜損傷的胃寒證模型大鼠無明顯影響；大劑量反左金丸對胃寒證模型大鼠的胃組織粘膜有一定的保護(hù)作用，但對胃粘膜損傷的胃熱證模型大鼠也無明顯影響；提示兩藥在該劑量時對胃寒證或胃熱證胃潰瘍模型并未顯示出明顯的毒性作用，對模型大鼠的胃組織粘膜的保護(hù)作用結(jié)果雖與文獻(xiàn)報道相近，但本實驗研究還發(fā)現(xiàn)反左金丸對胃寒證模型大鼠胃組織粘膜的保護(hù)作用強(qiáng)于左金丸（P＜0.05）。

4 結(jié) 論 本文研究表明復(fù)方中藥的毒性或藥效均可能與藥物的藥性－證候之間存在一定的相關(guān)性，進(jìn)一步證明了中醫(yī)理論中“療寒以熱藥，療熱以寒藥”的科學(xué)性，因此，正確地認(rèn)識中藥的藥性對指導(dǎo)臨床合理用藥，不僅可以加強(qiáng)臨床用藥有效性，對臨床用藥的安全性也具有十分重要的意義。

[1]陳艷芬，陳蔚文，李茹柳.寒、熱型胃黏膜損傷模型的對比和應(yīng)用研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2005，21（3）：290－294.

[2]陳艷芬，陳蔚文，李茹柳.大鼠寒熱型胃粘膜損傷模型的研究[J].中藥藥理與臨床，2002，18（2）：44－46.

[3]丁光迪.中藥的配伍運(yùn)用[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：8.

[4]陳艷芬，陳蔚文，李茹柳，等.左金丸與反左金的藥效學(xué)反應(yīng)比較研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2002，8（10）：67－69.