杜 紅 張洞于 侯躍飛 王晶娟 譚 鵬 李向日 楊 蕾 李 飛

北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029

草烏是蒙、中醫(yī)常用藥，為毛茛科植物北烏頭 (Aconitum kusnezoffii Reichb．)的干燥塊根。味辛，性溫，功能消“粘”燥“協(xié)日烏素”、止痛［1］。草烏有大毒，臨床多經(jīng)過(guò)炮制降低毒性后使用。其減毒作用主要是在加工炮制過(guò)程中，劇毒的雙酯型生物堿 (烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿等)發(fā)生水解，生成毒性較低的單酯型生物堿 (苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等)等水解產(chǎn)物［2］。歷代中、蒙醫(yī)草烏炮制方法記載頗多，筆者發(fā)現(xiàn):在傳統(tǒng)草烏炮制方法中，有許多都是通過(guò)酸性條件來(lái)達(dá)到促進(jìn)水解的目的。如內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)中記載了甘草湯、訶子湯制［3］;《仙授理傷尋短秘方》、《圣濟(jì)總錄》中記載了醋煮等［4－5］;現(xiàn)代研究也表明訶子湯炮制草烏的減毒效果優(yōu)于清水煮［6］。但尚未見(jiàn)以常用酸性炮制輔料醋來(lái)炮制草烏的研究報(bào)道。本文擬采用不同用量的米醋炮制草烏，并通過(guò)檢測(cè)炮制前后烏頭類生物堿的含量變化，探討酸性條件炮制對(duì)草烏成分的影響。

1 材料

草烏購(gòu)自北京華邈中藥工程技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)張貴君教授鑒定為毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezoffii Reichb的塊根。

炮制輔料用醋:龍門米醋，酸度3．95g/100ml。

對(duì)照品:烏頭堿 (批號(hào):10720－200308)、新烏頭堿(批號(hào):110799－200404)、次烏頭堿 (批號(hào):0798－9403)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;苯甲酰烏頭堿 (批號(hào):B010－110316，純度:98．3﹪)、苯甲酰新烏頭堿 (批號(hào):B009－119316，純度:99.1﹪)、苯甲酰次烏頭堿(批號(hào):B016－110316，純度:98.8﹪)均購(gòu)自上?？禈?biāo)化學(xué)品有限公司。乙腈、四氫呋喃、甲醇為色譜純、水為高純水，其余試劑均為分析純。

TCO－250型超聲波清洗器 (北京醫(yī)療設(shè)備二廠);Waters1525高效液相色譜儀，Waters2428紫外檢測(cè)器。安捷倫extend－C18柱。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品的制備

生草烏 取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥，即得。

制草烏 按《中國(guó)藥典》2010版［7］制草烏項(xiàng)下炮制。取草烏，大小分檔，用水浸泡至內(nèi)無(wú)干心，取出，加水煮至取大個(gè)切開(kāi)內(nèi)無(wú)白心，口嘗微有麻舌感時(shí)，取出，干燥，即得。

醋制草烏 參照藥典制草烏的炮制方法制備。其中將浸泡用水用不同用量的米醋替換，其余操作方法同上。米醋用量分別為20%、40%、60%、80%，加水稀釋至相同體積。以上樣品分別粉碎，過(guò)50目篩后備用。

2.2 生物堿的含量測(cè)定

雙酯型生物堿對(duì)照品溶液的制備 精密稱取新烏頭堿對(duì)照品10.04mg、烏頭堿對(duì)照品3.07mg、次烏頭堿對(duì)照品1.88mg混合，加入異丙醇－三氯甲烷 (1∶1)混合溶液定容至10ml，混勻，即得。

單酯型生物堿對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苯甲酰烏頭原堿對(duì)照品0.23mg、苯甲酰次烏頭原堿對(duì)照品1.15mg、苯甲酰新烏頭原堿對(duì)照品1.22mg混合，加入異丙醇－三氯甲烷 (1∶1)混合溶液定容至10ml，混勻，即得。

供試品溶液的制備 分別取生草烏及草烏炮制品粉末2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入氨試液3ml，再精密加入異丙醇－乙酸乙酯 (1∶1)混合液50ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用異丙醇－乙酸乙酯 (1:1)混合液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，40℃減壓回收溶劑至干，殘?jiān)芗尤氘惐迹燃淄?(1∶1)混合液3ml溶解，密塞，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

色譜條件 以乙腈－四氫呋喃 (25∶15)為流動(dòng)相A，以0.1mol/L醋酸銨溶液 (每1000ml加冰醋酸0.5ml)為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm，流速:1ml/min。

表1 色譜條件

樣品測(cè)定 分別精密量取對(duì)照品及各供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。外標(biāo)法計(jì)算各供試品溶液中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的含量。色譜圖見(jiàn)圖1，各成分含量見(jiàn)表2，圖2。

表2 各炮制品中烏頭類生物堿含量 (%)

3 討論

草烏經(jīng)過(guò)醋制以后，雙酯型和單酯型生物堿含量均發(fā)生了明顯的變化。雙酯型生物堿大幅度下降，單酯型生物堿明顯升高，說(shuō)明醋炮制后可以將劇毒的雙酯型生物堿水解為毒性較低的單酯型生物堿，達(dá)到炮制減毒的要求。

醋制草烏酯型生物堿含量比藥典法的炮制品高得多。提示，臨床如果使用醋制法炮制草烏應(yīng)該進(jìn)一步優(yōu)化炮制工藝或者減少草烏用量使之達(dá)到既保持療效又防止中毒的目的。具體的用量還應(yīng)該參考量效、毒效關(guān)系實(shí)驗(yàn)，筆者將進(jìn)一步研究。

草烏炮制過(guò)程中生物堿含量的變化與醋的用量有一定相關(guān)性。單酯型生物堿的含量隨著米醋用量的增加，呈先升高再減少的趨勢(shì);雙酯型生物堿的含量隨著米醋用量的增加，呈先明顯降低，后變化緩慢的趨勢(shì)。從圖2可知，醋的用量在20%～40%之間，單酯型生物堿含量最高，雙酯型生物堿含量較低，可達(dá)到最佳的減毒存效要求。該范圍的醋的用量，與《北京市中藥飲片炮制規(guī)范》中收載的一般醋制法的用量基本相符，可為進(jìn)一步制定醋制工藝提供依據(jù)。

從圖1可知，草烏在醋制過(guò)程中，除了三種單酯型生物堿以外，還有其他類型的化合物生成 (黑圈所示)。草烏中生物堿成分種類多樣，包括雙酯型生物堿、單酯型生物堿、胺醇型生物堿、脂堿等。不同類型的生物堿的毒性和生物活性均不同，在炮制過(guò)程中這些成分的變化都有可能對(duì)最終草烏炮制品的毒性和療效產(chǎn)生影響。因此，僅僅以六種生物堿的含量變化來(lái)衡量草烏的炮制效果是不夠全面的。在對(duì)各種生物堿的毒性和藥理活性尚未研究清楚前，現(xiàn)階段仍需結(jié)合炮制品的毒理、藥理研究結(jié)果來(lái)作為控制草烏炮制品質(zhì)量的指標(biāo)，確保臨床用藥的安全有效。

［1］羅布桑．蒙藥學(xué)［M］．呼和浩特:民族出版社，1989:286～288．

［2］鄒恩濟(jì)，馮國(guó)慶．蒙藥草烏炮制中生物堿含量的變化［J］．中成藥研究，1988，(2):20－21．

［3］內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳．內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)［S］．呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社，1999．

［4］藺道人．仙授理傷尋短秘［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1957．

［5］宋．太醫(yī)院．圣濟(jì)總錄［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1962．

［6］侯敏，石文宏，盛惟等．草烏不同炮制方法與急性毒性的相關(guān)性研究［J］．中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2011，(8):30－31．

［7］國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典 (Ⅰ部) ［S］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:220．