晁利剛 臧猛 高倩

（河南新正好生物工程有限公司，河南 鄭州 450011）

雞尿酸鹽沉積癥,是一種由蛋白質(zhì)及嘌呤核苷酸代謝障礙引起的高尿酸血癥、腎功能損害性疾病，是家禽的常見(jiàn)病，不同季節(jié)，不同日齡的各種家禽均可發(fā)生。尿酸鹽沉積的原因有：傳染病因素如腎型傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、包涵體肝炎等；營(yíng)養(yǎng)因素如蛋白含量或鈣含量過(guò)高，鈣磷比例失衡，維生素缺乏等；管理因素如溫度高、飲水不足，雞舍通風(fēng)不良，空氣中氨氣含量過(guò)高等。尿酸鹽沉積癥常引起雞飲水量、采食量下降，血液中尿酸含量升高，關(guān)節(jié)腫大，行動(dòng)遲緩，嚴(yán)重的雞腎臟呈花斑狀，內(nèi)臟、關(guān)節(jié)表面及其它間質(zhì)組織有大量白色尿酸鹽結(jié)晶?；茧u不僅生長(zhǎng)緩慢，生產(chǎn)性能降低，而且死亡率有的高達(dá)30%。

本試驗(yàn)通過(guò)人工試驗(yàn)出雞尿酸鹽沉積模型，觀察腎臟臨床病理變化，旨在探究禽尿酸鹽沉積的機(jī)制，為開(kāi)發(fā)治療尿酸鹽沉積病的新藥提供指導(dǎo)，并為其預(yù)防提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

8日齡AA雞60只，分為健康對(duì)照組（15只）、44%高蛋白組（15只），高鈣組（15只，0.5%鈣飲水）、44%高蛋白高鈣組（15只，0.5%鈣飲水）等4組。

1.1.2 飼料配制

魚(yú)粉（蛋白含量 60%，product of Peru）,飼料（鄭州市紅門(mén)飼料有限責(zé)任公司提供），健康組喂普通肉雞飼料，高蛋白組飼喂總蛋白為44.0%的含魚(yú)粉飼料，高鈣組飲水0.5%的鈣，高蛋白高鈣組飼喂總蛋白為44.0%的魚(yú)粉飼料和鈣含量0.5%的飲水。

1.1.3 試劑

鎢酸鈉（成都市科龍化工試劑廠，20081121）,碳酸鋰（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20090511），檸檬酸鈉 (天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，20090310），濃磷酸（天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，20090612），濃硫酸（天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，20070516）,乙二醇(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司,20081106),碳酸鈣(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，20090925），碳酸鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，20090416），氯化鈣(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，20090628）。

1.1.4 藥物

尿酸對(duì)照品（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司生產(chǎn)）。

1.1.5 儀器

TU-1810紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任有限公司），TL80-1型離心沉淀機(jī)（江蘇姜堰市天力醫(yī)療機(jī)械有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 體重變化計(jì)算

先隨機(jī)取20只小雞，稱取每只雞的體重，取平均值,看雞的體重在什么數(shù)值范圍內(nèi)最多,平均值±5.0 g。每組雞為15只，每組雞體重之間的平均值差異不能超過(guò)0.5 g。

1.2.2 水重、料重的計(jì)算

雞自由飲水和采食，記錄24 h的總飲水量和總采食量，計(jì)算每只雞每天平均的飲水量和采食量。

1.2.3 死亡率的統(tǒng)計(jì)

記錄小雞在造模試驗(yàn)中，每天死亡的只數(shù)，觀察雞死亡的高峰期。

1.2.4 血液中尿酸鹽含量的測(cè)定

每組雞采血1 ml,放入1 ml含有3.8%的草酸鈉液體里面,混合均勻,12 h內(nèi)測(cè)定。4組雞血混合物樣品、尿酸對(duì)照品和空白對(duì)照(蒸餾水)各組取0.5 ml，放入離心管中，加鎢酸試劑4.5 ml，靜止6 min，4000 r/min離心10 min,每離心管取上清液2.5 ml放入試管中,每管加0.5 ml的1 mol/l碳酸鈉溶液,混勻后,放置10 min,加入0.5 ml磷鎢酸應(yīng)用液，混勻后室溫放置20 min，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)660 nm，以空白對(duì)照調(diào)零，記錄各管的吸光度（λ），血清尿酸（μmol/l）=（測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度）×300×2。

1.2.5 雞生理、病理變化

解剖小雞，觀察小雞的消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)（特別是腎臟的變化）有什么病理變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)前后雞體重的變化（見(jiàn)表1）

表1 各組雞試驗(yàn)前后體重變化

從表1可知：試驗(yàn)前每組雞的平均體重在81.1～81.5 g,平均體重最大相差0.4 g；飼養(yǎng)5 d，每組雞的體重在134.6～204.9 g，平均體重最大相差70.3 g，體重差別明顯,高蛋白組每只雞平均增重68.0 g，高鈣組每只雞平均增重58.8 g，高蛋白高鈣組每只雞平均增重53.5 g，健康對(duì)照組每只雞平均體重增重123.7 g，這些數(shù)據(jù)說(shuō)明：高蛋白和高鈣影響雞的正常生長(zhǎng)發(fā)育，0.5%的鈣比44.0%的高蛋白對(duì)雞的生產(chǎn)性能影響更大，兩者聯(lián)用，進(jìn)一步降低生產(chǎn)性能。從增重率上可以看出來(lái)，高蛋白高鈣組增重率最低，不及健康組的一半，其生產(chǎn)性能明顯受到抑制。

2.2 試驗(yàn)前后雞飲水量和采食量的變化(見(jiàn)表2、表3)

表2 試驗(yàn)中雞每天平均的飲水量（g）

從表2可知：給水第1 d，各組每只雞平均飲水量變化不是很大,在56.4～68.3 g；第5 d時(shí),飲水量最少的高鈣組為30.2 g，飲水量最大的高蛋白組為116.8 g,高蛋白組是高鈣組的3.9倍,是高蛋白高鈣組的2.7倍,各組雞平均飲水量差異比較顯著。高蛋白組和健康對(duì)照組的雞平均飲水量從第1 d到第5 d是逐漸增加的,高蛋白組增加了53.7 g,健康對(duì)照組增加了47.6 g；而高鈣組則是逐漸遞減，從第1 d的56.4 g，減到第5 d的30.2 g；高蛋白高鈣組先增加再減少，但總體還是在減少。

表3 試驗(yàn)中雞每天平均的采食量（g）

從表3可知：第1 d各組每只雞的平均采食量在32.5～34.3 g，相差不超過(guò) 2.0 g，第 5 d 時(shí)，高蛋白組每只雞的平均采食量為53.1 g，健康對(duì)照組為46.9 g，而高鈣組為17.3 g，高蛋白高鈣組為16.9 g，高蛋白組的每只雞平均采食量是高蛋白高鈣組的3.1倍多，是高鈣組的近3.1倍。各組每只雞的平均采食量和其飲水量呈同一趨勢(shì)，即高蛋白組和健康對(duì)照組的采食量每天逐漸增加，而高鈣組逐漸減少，高蛋白高鈣組還是先增加后減少。

2.3 雞死亡率的統(tǒng)計(jì)

模型試驗(yàn)中，每組雞共15只，在5 d的試驗(yàn)中，高蛋白組未見(jiàn)死雞，高鈣組在第4 d、第5 d各死一只，高蛋白高鈣組在第3 d、第4 d各死一只，第5 d死兩只。高鈣組的死亡率為13.33%，高蛋白高鈣組的死亡率為26.67%，與有關(guān)報(bào)道相符合。

表4 試驗(yàn)中雞的死亡率

2.4 試驗(yàn)雞血清中尿酸鹽含量的測(cè)定

用磷鎢酸還原法測(cè)定血清尿酸的含量，各組雞取1 ml雞血于含有1 ml草酸鈉試管中，經(jīng)過(guò)處理，用紫外分光光度計(jì)在660 nm處測(cè)定其吸光度，并計(jì)算含量（見(jiàn)表 5），高蛋白尿酸含量為 297.90 μmol/l，較健康對(duì)照組 268.53 μmol/l高 29.37 μmol/l。試驗(yàn)幾組雞中，高蛋白高鈣組血清尿酸含量最高為423.78 μmol/l，是健康對(duì)照組血清尿酸含量的1.6倍。試驗(yàn)各組雞血清尿酸的含量測(cè)定結(jié)果與黎曉敏等雞血清尿酸測(cè)定結(jié)果比較接近，與李榮譽(yù)等雞血清尿酸測(cè)定結(jié)果相比偏低。

2.5 解剖死雞和健康對(duì)照雞比較病理變化

試驗(yàn)結(jié)束后，記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)比各組雞的精神狀態(tài)，從健康組中解剖一只雞，觀察其腎臟變化，腎臟結(jié)果見(jiàn)圖1，腎臟表面光滑，有光澤，顏色鮮潤(rùn)，塊狀結(jié)構(gòu)分布明顯，血液顏色鮮紅；從高蛋白高鈣組中，找一個(gè)精神萎靡的雞，解剖并觀察腎臟變化，其結(jié)果見(jiàn)圖2，腎臟表面無(wú)光澤、發(fā)干，顏色暗淡，腎臟腫大，塊狀結(jié)構(gòu)分布不明顯，腎臟內(nèi)部結(jié)構(gòu)呈不規(guī)則的花紋狀，血液顏色變深。

表5 尿酸含量計(jì)算

圖1 健康雞腎臟

圖2 模型雞腎臟（花斑腎）

3 討論

3.1 尿酸鹽沉積機(jī)理

一方面生物沉積，自身免疫反應(yīng)，體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)沉淀物在腎臟蓄積，如：當(dāng)病原體(如細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等)侵入雞體后，體內(nèi)的防御系統(tǒng)就產(chǎn)生抵抗這些病原體的物質(zhì)，稱之為抗體。在抗體抵抗抗原的過(guò)程中，抗體戰(zhàn)勝了入侵的病原體，使疾病得以痊愈；同時(shí)也破壞自身組織，從而引發(fā)疾病，另外，抗原抗體在競(jìng)爭(zhēng)的過(guò)程中形成抗原抗體復(fù)合物，這些已形成的復(fù)合物可在腎臟內(nèi)沉積；另一方面物理沉積，是由腎功能損傷（腎炎等），導(dǎo)致物質(zhì)不能更好的代謝，在腎臟沉積，如：鈣過(guò)高或鈣磷比例失調(diào)，超出機(jī)體的吸收和排泄能力。大量的鈣鹽就會(huì)從血液中析出，沉積在腎臟，引起腎腫。飼料配制不合理或選擇原料使用不當(dāng)，造成鈣、磷比例增大，就會(huì)促進(jìn)血鈣升高，而增加腎臟排泄的負(fù)擔(dān)，長(zhǎng)時(shí)間下去會(huì)因鈣鹽沉積于輸尿管內(nèi)而引起腎臟發(fā)生病變，如腎結(jié)石和痛風(fēng)病等；再一方面化學(xué)沉積，體內(nèi)代謝的CO2、尿酸等物質(zhì)在腎臟內(nèi)與代謝的鈣、鎂等離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成碳酸鹽或尿酸沉淀，如：飼喂高蛋白飼料造成雞尿酸鹽沉積。由于家禽攝入蛋白質(zhì)的代謝終產(chǎn)物是尿酸 (家畜是尿素)，若血液中尿酸增多，當(dāng)超出腎臟的排泄限度時(shí)，則引起尿酸在體內(nèi)的蓄積；同時(shí)，由于尿酸長(zhǎng)期和過(guò)度地刺激腎小管上皮細(xì)胞，引起黏膜變性，致使腎臟排泄障礙，又加重尿酸鹽在體內(nèi)的沉積。試驗(yàn)選用高蛋白和高鈣飼料進(jìn)行人工試驗(yàn)得出雞尿酸鹽沉積模型，可有上述理論作為依據(jù)。

3.2 尿酸鹽沉積模型

試驗(yàn)采用高蛋白和高鈣的飼料，飼喂小雞，造成尿酸鹽沉積。建立的尿酸鹽沉積模型，主要通過(guò)小雞的增重率、采食量、飲水量、死亡率、血清尿酸鹽含量測(cè)定、腎臟病理變化等指標(biāo)進(jìn)行考察。小雞的增重率是考察尿酸鹽沉積模型的重要指標(biāo)之一，小雞分組前，體重有一定的差異，有的差異甚大，試驗(yàn)去除體重大、小兩端的雞，8日齡的小雞體重平均為81.0 g，以(81.0±5.0)g選雞分組，一方面每組雞整體體重差異不大，另一方面每只雞個(gè)體差異也不大，這樣試驗(yàn)數(shù)據(jù)更科學(xué)。采食量、飲水量主要考察高蛋白、高鈣對(duì)雞生產(chǎn)性能的影響。死亡率和雞臨床病理變化的考察，主要更接近市場(chǎng)上雞發(fā)生的尿酸鹽沉積癥，一方面雞飲水采食量下降，精神萎靡，雞排出糞便尿酸鹽過(guò)多，腎臟腫大，呈花斑狀等，另一方面發(fā)生尿酸鹽沉積癥會(huì)導(dǎo)致一定數(shù)量的雞死亡，有報(bào)道稱尿酸鹽沉積癥死亡率可達(dá)40%以上。

3.3 尿酸鹽沉積模型的建立，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)有重大的指導(dǎo)意義，在養(yǎng)雞飼料配制中，注意蛋白和鈣的比例，高蛋白易引起尿酸鹽沉積癥，影響雞的生產(chǎn)性能；高鈣不僅能引起尿酸鹽沉積癥，嚴(yán)重的還能引起雞成批量死亡，即使鈣磷比例適當(dāng)，鈣的含量也不能超過(guò)1.0%。尿酸鹽沉積模型的建立，為新藥的研究與開(kāi)發(fā)，提供了試驗(yàn)依據(jù)。

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