內(nèi)皮祖細胞（endothelial progenitor cells，EPCs）屬于內(nèi)皮的前體細胞，在血管損傷時從骨髓釋放，通過血液循環(huán)定殖于損傷部位，促進血管內(nèi)皮再生與修復，同時促進缺血組織血管新生。本研究通過觀察2011年3月～11月本院神經(jīng)內(nèi)科收治急性缺血性卒中患者62例，按照急性卒中Org 10172治療研究（trial of org 10172 in acute stroke treatment，TOAST）對腦血管病變進行分型，初步探討急性卒中患者外周血EPCs數(shù)量的變化與其TOAST分型的相關(guān)性，為臨床缺血性腦血管病的診療提供理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 病例組：選擇2011年3月～11月在重慶市新橋醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科急性缺血性卒中患者62例，男35例、女27例，年齡38～83歲、平均63歲。平均入院時間為2.5 d。納入標準：①全部符合第四屆全國腦血管病學術(shù)會議所制定的診斷標準［1］。②經(jīng) CT和／或 MRI等證實。排除標準：①腦出血；②肝腎功能不全；③心功能衰竭；④近半年重大外傷史及手術(shù)史；⑤服用炎癥抑制藥、免疫抑制劑、激素等藥物；⑥惡性腫瘤和慢性消耗性疾??；⑦自身免疫性疾??；⑧檢查前4周有發(fā)熱、上呼吸道感染、腹瀉等病史。

將病例組按 TOAST 分型［2－3］分為：①大動脈粥樣硬化性腦卒中（large artery atherosclerosis，LAA）；②心源性腦栓塞（cardioembolism，CE）；③小動脈閉塞性腦卒中或腔隙性腦卒中（small artery occlu sion lacunay，SAO）； ④其他原因所致的缺血性卒 中（acute stroke of other demonstrated etiology，SOE）； ⑤不明原因的缺血性卒中（stroke of other undetermined etiology，SUE）。

對照組：選取同時期在重慶市新橋醫(yī)院同齡健康體檢者17名，男9名，女8名，年齡39～75歲，平均57歲。既往無腦梗死、心肌梗死、外周血管病變等，心電圖大致正常，頸部血管超聲及TCD檢查結(jié)果正常。

1.2 流式細胞儀檢測EPCs 受檢者入院次日空腹取肘靜脈血2 mL于EDTA.K：抗凝管中，搖勻以充分抗凝，加入2 mL PBS緩沖液混勻，然后緩慢加入到6 mL人淋巴細胞分離液中，室溫下2400 r／min離心20 min，離心后吸取中間白膜層，PBS緩沖液反復清洗，吹打混勻，重復室溫離心，取單個核細胞。取分離洗滌好的單個核細胞100 μL用FITC 標記的抗體 CD133（博奧森公司）、CD34（Sigma公司）避光孵育10 min，加入PBS緩沖液混勻，室溫1500 r／min離心后加入PBS緩沖液充分混勻、過濾，流式細胞儀（BD公司）分析200 000個細胞。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（x±s）表示，采用 t’檢驗比較不服從方差齊性的兩組均數(shù)。多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，若各組間差異有統(tǒng)計學意義，則用LSD法進行兩兩比較。計數(shù)資料采用構(gòu)成比表示，采用檢驗對構(gòu)成比進行比較，檢驗水準α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 TOAST分型結(jié)果 按照TOAST分型標準，通過臨床表現(xiàn)及血管影像檢查結(jié)果確定各型分組，頭頸部CT血管成像（CTA）17例，數(shù)字減影血管造影（DSA）17例，頸動脈血管超聲27例，磁共振血管造影（MRA）1例。其中 LAA24例（39％），SAO22 例（35％），CE7 例（11％），SOE3 例（5％），SUE6例（10％）。

2.2 CDl33、CD34 細 胞 所 占 比 例 為 外 周 血 中EPCs 數(shù)量［4］（見圖 1）

圖1 A：實框圈選的散點區(qū)即為單個核細胞區(qū)域；圖B：E2區(qū)為CD133、CD34雙陽性細胞，即 EPCs

2.3 TOAST分型結(jié)果（表1） 分析結(jié)果顯示，不同TOAST分型的內(nèi)皮祖細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（F ＝5.063，P ＝0.001），總的來講各組均數(shù)差異有統(tǒng)計學意義。進一步兩兩比較的結(jié)果顯示，LAA、SAO、CE和SUE組的內(nèi)皮祖細胞數(shù)與對照組相比，內(nèi)皮祖細胞數(shù)降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討論

缺血性卒中的病因復雜，不同病因可對預后有不同的影響，因此有必要對缺血性卒中進行病因分型，為卒中預防和治療方法的選擇提供參考。TOAST分型為較常用的卒中臨床病因分型。近年來，EPCs在動脈粥樣硬化性疾病，尤其是與卒中關(guān)系方面的研究成為一個新的熱點。EPCs是一群出生后機體中存在的干／祖細胞，具有自我增殖、定向歸巢的特性，能夠促進血管的新生及血管內(nèi)皮細胞的分化［5］。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腦創(chuàng)傷后增加的外周血中的EPCs歸巢到創(chuàng)傷區(qū)促使血管新生從早期開始，且逐漸增多［6］。內(nèi)皮功能障礙動脈粥樣硬化的早期病變，損傷的內(nèi)皮細胞動員EPCs從骨髓釋放到外周血，促進血管內(nèi)皮細胞的修復，維持內(nèi)皮的完整與穩(wěn)定。Durand等［7］發(fā)現(xiàn)EPCs減少或凋亡可能是誘導穩(wěn)定斑塊向蝕損斑塊并血栓形成轉(zhuǎn)化的重要因素。EPCs參與血管內(nèi)皮損傷后的修復，提示EPCs可能有助于減輕蝕損斑塊表面內(nèi)皮脫落，從而降低蝕損斑塊及血栓形成所致的急性血管事件，然而，這種修復的過程如果發(fā)生過于廣泛，可能會過渡消耗EPCs，反而使患者外周血中EPCs水平降低。

表1 不同TOAST分型的內(nèi)皮祖細胞數(shù)

本研究采用TOAST分型標準，旨在觀察不同分型患者外周血EPCs水平是否有差異。研究顯示，LAA、SAO、CE和 SUE組的 EPCs數(shù)量明顯低于對照組，與對照組差異有統(tǒng)計學意義?？紤]可能由于以下因素：①缺血性卒中的危險因素可增加氧化應激，通過氧化應激減少EPCs的動員和促進EPCs凋亡［8］。②吸煙、飲酒、高血糖等危險因素可通過減少細胞因子、血管內(nèi)皮生長因子等減少骨髓對EPCs的動員。③持續(xù)的內(nèi)皮損傷和功能障礙促使EPCs在參與內(nèi)皮的修復過程中過量消耗［9］。

SOE（3例）與對照組無統(tǒng)計學差異，考慮由于本實驗樣本量小造成。SOE與SUE（6例）的EPCs絕對值較其他組稍高，考慮可能與感染性、高凝狀態(tài)或合并其他等原因引起的急性缺血引發(fā)的EPCs的動員有關(guān)。在缺血模型動物實驗中顯示，外周血EPCs數(shù)量在缺血后的數(shù)小時內(nèi)即可迅速增高［10－11］。SAO、LAA、CE 各組間 EPCs 水平無統(tǒng)計學意義，但SAO組EPCs水平在這三組中更低，雖然無統(tǒng)計學差異，但這種趨勢我們考慮可能與下列因素有關(guān)：小動脈閉塞卒中主要是由于長期高血壓、糖尿病等損傷導致的深穿支病變［12］或彌漫性腦小動脈病變所致，內(nèi)皮的損害范圍更廣，梗死灶小但常為多發(fā)性，EPCs在修復過程中消耗更多。

綜上所述，EPCs的數(shù)量反映了不同病因的卒中患者在急性期一定時間內(nèi)EPCs的動員與消耗的動態(tài)變化，也反映了在這一時期卒中患者血管內(nèi)皮的損傷與修復的情況。本研究發(fā)現(xiàn)SAO、LAA、CE型卒中急性期EPCs明顯偏低，可能正反映了卒中急性期內(nèi)皮細胞損傷和修復存在的趨勢，也反映了外周血EPCs數(shù)量對卒中進行危險分層可能有積極的指導作用。我們設(shè)想，對于卒中急性期外周血EPCs不高的重癥患者，未來臨床卒中內(nèi)皮干細胞的治療可能是有價值的，也是我們需要進一步探索的領(lǐng)域。

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