杜 寧

(江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 南京 210008)

維庫(kù)溴銨是80年代開(kāi)始應(yīng)用，為單季銨類固醇類中效去極化肌松藥，在ICU重癥病人使用呼吸機(jī)時(shí)，用于防止人機(jī)對(duì)抗現(xiàn)象，因該藥代謝快，無(wú)肌顫現(xiàn)象，所以較其他肌松藥的使用更為廣泛［1］。心血管穩(wěn)定性是其突出的優(yōu)點(diǎn)，常用于危重病人的全身麻醉［2］，文獻(xiàn)報(bào)道［3］用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定其含量，但對(duì)儀器要求較高，而且需要內(nèi)標(biāo)，步驟繁瑣。我們建立了高效液相色譜法測(cè)定含量和分離有關(guān)物質(zhì)，為其質(zhì)量研究、穩(wěn)定性考察和有效期預(yù)測(cè)提供了有效的分析手段。

1 儀器和試藥

HP 1100系列高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器。維庫(kù)溴銨對(duì)照品(USP提供，批號(hào)為1711155);維庫(kù)溴銨(某廠提供，批號(hào)分別為091204，091205，091206);甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 AKZO NOBEL Kromasil ODS柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱溫 30 ℃。以 0.3 M 甲酸銨溶液 － 甲醇(40∶60)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。

2.2 分離專屬性 稱取本品 0.1 g，加 0.01 mol·L－1的鹽酸溶液溶解并稀釋至50mL。取5mL溶液，分別加1 mol·L－1鹽酸溶液，1 mol·L－1氫氧化鈉溶液，30%過(guò)氧化氫溶液2mL和100℃水浴加熱1 h，中和后加流動(dòng)相至10mL，進(jìn)樣，考察降解物的分離性能，分離良好，見(jiàn)圖1。

圖1 酸破壞(A)、堿破壞(B)、氧化破壞(C)和高溫破壞(D)色譜圖 1.維庫(kù)溴銨;2.溴離子

Br離子峰定位:稱溴化鉀 0.124 g，加 0.01 mol·L－1鹽酸溶液溶解至10mL，進(jìn)樣，見(jiàn)圖2。

圖2 溴化鉀色譜圖 2.溴離子

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對(duì)照品200.02mg，加 0.01 mol·L－1的鹽酸溶液溶解稀釋至 100mL。分別精密量取 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，25.0mL置50mL量瓶中，加0.01 mol·L－1的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別量取20μL注入色譜儀，記錄色譜圖。以濃度(C，μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:A=15038C+752840，r=0.9995(n=7)。

結(jié)果表明，在 20.0 ～1000.1 μg·mL－1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按照含量測(cè)定方法，另一試驗(yàn)者稱取樣品，進(jìn)樣，分別測(cè)定，含量的RSD均小于2.0%。

2.5 精密度試驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)曲線高、中、低3個(gè)濃度樣品，分別進(jìn)樣5 次，RSD 分別為1.0%、0.8%、0.9%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h，取 20μL 注入色譜儀，記錄峰面積，RSD 為0.9%，表明本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 檢出限和定量限 取濃度為2mg·mL－1的對(duì)照溶液，用0.01 mol·L－1的鹽酸溶液稀釋成一系列由高到低梯度濃度的溶液，維庫(kù)溴銨的檢出限(S/N=3)為0.4 μg，定量限(S/N=10)為 1.3 μg 。

3 樣品的測(cè)定

3.1 有關(guān)物質(zhì)的檢查 取本品，加0.01 mol·L－1鹽酸溶液分別制成每1mL含5.0mg的供試品溶液和每1mL中含0.1mg的對(duì)照溶液。取對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰高為滿量程的10% ～25%，吸取上述兩種溶液20μL分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍，除溶劑和溴離子峰外，其他峰為雜質(zhì)，見(jiàn)圖3。

3.2 含量測(cè)定 稱取本品 0.1 g，加 0.01 mol L－1的鹽酸溶液制成每1mL含2mg的溶液，進(jìn)樣，另稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的維庫(kù)溴銨對(duì)照品，同法制備測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

非水滴定法測(cè)定含量 稱取本品0.25 g，加冰醋酸15mL與醋酐5mL溶解，加醋酸汞試液5mL與萘酚苯甲醇指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1 mol·L－1)滴定至顯黃綠色，滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1mL的高氯酸滴定液(0.1 mol·L－1)相當(dāng)于31.89mg的C34H57BrN2O4，見(jiàn)表1。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果證明，HPLC法測(cè)定含量具有可行性。

圖3 維庫(kù)溴銨樣品有關(guān)物質(zhì)色譜圖

表1 樣品測(cè)定結(jié)果比較(%，n=3)

4 討論

4.1 改變方法的原因 滴定法測(cè)定含量要用到冰醋酸和醋酐，污染重，對(duì)人損傷大，并且黃綠色終點(diǎn)不靈敏，故改為HPLC法測(cè)定。

4.2 流動(dòng)相的選擇 試驗(yàn)中曾采用乙腈作為有機(jī)相，但峰形拖尾嚴(yán)重。甲酸銨溶液的濃度為0.3 M，太大會(huì)損傷色譜柱。

4.3 柱溫的影響 本試驗(yàn)考察了不同的柱溫(25，30，40℃)，發(fā)現(xiàn)組分的保留時(shí)間隨柱溫升高而縮短，在30℃時(shí)可以有效分離，考慮到溫度過(guò)高可能引起樣品分解，故采用30℃。

4.4 試驗(yàn)結(jié)果表明，在本法色譜條件下，主峰和有關(guān)物質(zhì)分離較好，無(wú)干擾，可用于含量測(cè)定和雜質(zhì)檢查。

［1］李愛(ài)萍，周琳，姚亞春，等。注射用維庫(kù)溴銨在靜脈泵注時(shí)的護(hù)理探討［J］.當(dāng)代護(hù)士(學(xué)術(shù)版)，2004，10(10):93－94.

［2］陸志俊，張芝芳，于布為.國(guó)產(chǎn)維庫(kù)溴銨神經(jīng)肌肉阻滯效應(yīng)及對(duì)心血管的影響［J］.上海醫(yī)藥，2000，21(9):35－36.

［3］韓加怡，黃宗玉，陳鈺.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定注射用維庫(kù)溴銨的含量［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，29(6):443－445.