邢晉祎 戈新 王建華 孫力

摘要：為探討豬遠(yuǎn)端缺失基因５（ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ５，Ｄｌｘ５）的多態(tài)性、群體分布特性及其與體尺和胸椎數(shù)的關(guān)系，采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法檢測了豬Ｄｌｘ５基因ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ位點(diǎn)在６個(gè)中外豬品種中的多態(tài)性分布，并分析了該位點(diǎn)與豬體尺和胸椎數(shù)的關(guān)系。檢測結(jié)果表明，經(jīng)ＨｈａⅠ酶切后在６個(gè)豬品種群體均發(fā)現(xiàn)了ＣＣ、ＣＴ和ＴＴ ３種基因型，其中Ｃ等位基因在萊蕪黑豬中為優(yōu)勢等位基因，而Ｔ等位基因在里岔黑豬、魯萊黑豬、杜洛克豬、大約克豬和長白豬中占優(yōu)勢。在該多態(tài)性位點(diǎn)，萊蕪黑豬、里岔黑豬、魯萊黑豬、杜洛克和長白豬群體均處于哈代—溫伯格平衡（Ｐ＞０．０５），而大約克豬群體偏離平衡狀態(tài)（Ｐ＜０．０５）；基因型在群體間的分布差異極顯著（Ｐ＜０．０１）。群體遺傳特性分析表明，有效等位基因數(shù)在１．２５４～１．９９１之間；杜洛克豬的多態(tài)信息含量為０．１８２，屬于低度多態(tài)，其余品種均在０．２５４～０．３７４之間，屬于中度多態(tài)。關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，該多態(tài)性位點(diǎn)對萊蕪黑豬體長、體高、屠前活重、腹圍、胸圍、腿臀圍和胸椎數(shù)以及里岔黑豬胸椎數(shù)的影響均不顯著（Ｐ＞０．０５）。Ｄｌｘ５基因ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ位點(diǎn)在豬群中存在多態(tài)，基因型分布在萊蕪黑豬與其他豬種間不同，與豬體尺和胸椎數(shù)無顯著關(guān)聯(lián)。

關(guān)鍵詞：豬；遠(yuǎn)端缺失基因５（ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ５，Ｄｌｘ５）；多態(tài)性；體尺；胸椎

中圖分類號：Ｓ８２８．８＋９文獻(xiàn)標(biāo)識碼： Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）03－0552-04

Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ Ｄｉｓｔａｌ－lｅｓｓ Ｈｏｍｅｏｂｏｘ ５ （Ｄlx５） Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｐｉｇｓ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｂｏｄｙ Ｓｉｚｅｓ ａｎｄ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｐｉｎｅ Ｎｕｍｂｅｒｓ

ＸＩＮＧ Ｊｉｎ－ｙｉ１，ＧＥ Ｘｉｎ２，ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｈｕａ２，ＳＵＮ Ｌｉ３

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｌｉｎｙｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌｉｎｙｉ ２７６００５， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ of Qingdao， Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６１００，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ； ３． Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅof Qingdao， Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６０７１，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ， ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ５ ｇｅｎｅ （Ｄlx５） ｉｎ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｂｏｄｙ ｓｉｚｅｓ ａｎｄ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ ｎｕｍｂｅｒｓ． Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ ｌｏｃｉ． ｉｎ Ｄｌｘ５ ｇｅｎｅ ｏｆ ６ ｂｒｅｅｄｓ ｏｆ ｐｉｇｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｄｌｘ５ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｏｄｙ ｓｉｚｅｓ ａｎｄ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ were ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ＣＣ， ＴＣ ａｎｄ ＴＴ ｉｎ ｔｈｅ ６ ｐｉｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ found ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ＨｈａⅠ． Ａｌｌｅｌｅ Ｃ ｗａｓ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｉｎ Ｌａｉｗｕ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ， ａｎｄ ａｌｌｅｌｅ Ｔ ｗａｓ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｉｎ Ｌｉｃｈａ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ， Ｌｕｌａｉ ｐｉｇｓ， Ｄｕｒｏｃ ｐｉｇｓ， Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ ｐｉｇｓ ａｎｄ Ｌａｎｄｒａｃｅ ｐｉｇｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ａ ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｌｏｃｉ． ｉｎ Ｌａｉｗｕ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ， Ｌｉｃｈａ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ， Ｌｕｌａｉ Ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ， Ｄｕｒｏｃ ｐｉｇｓ ａｎｄ Ｌａｎｄｒａｃｅ ｐｉｇｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎ Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ （Ｐ＞０．０５）， ｗｈｅｒｅａｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｉｎ Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ ｐｉｇｓ （Ｐ＜０．０５）． Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＣＣ， ＴＣ ａｎｄ ＴＴ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ （Ｐ＜０．０１） ａｍｏｎｇ ｓｉｘ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ １．２５４ ｔｏ １．９９１． Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ （ＰＩＣ）ｉｎ Ｄｕｒｏｃ ｐｉｇｓ ｗａｓ ０．１８２ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｎ ｌｏｗ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ， ｗｈｉｌｅ ｉｔ ｗａｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０．２５４～０．３７４ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｐｉｇｓ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｎ ｍｏｄｅｒａｔｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ． Ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｄｌｘ５ ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｄｙ ｌｅｎｇｔｈ， ｈｅｉｇｈｔ ａｔ ｗｉｔｈｅｒｓ， ｌｉｖｅ ｗｅｉｇｈｔ， ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ， ｃｈｅｓｔ ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ， ｈｉｐ ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ ｏｆ Ｌａｉｗｕ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ ｏｆ Ｌｉｃｈａ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ（Ｐ＞０．０５）． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｔｈｅ ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ ｌｏｃｉ ｉｎ Ｄｌｘ５ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｓｉｘ ｐｉｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ Ｌａｉｗｕ ｂｌａｃｋ ｐｉｇｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｂｒｅｅｄｓ． Ａｎｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｌｏｃｉ. ａｎｄ ｂｏｄｙ ｓｉｚｅｓ ａｎｄ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎ ｐｉｇｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： pｉｇ； dｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ５ ｇｅｎｅ； pｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ； bｏｄｙ ｓｉｚｅｓ； tｈｏｒａｃｉｃ ｓｐｉｎｅ

遠(yuǎn)端缺失基因（Ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓ ｈｏｍｅｏｂｏｘ，Ｄｌｘ）主要調(diào)控動(dòng)物遠(yuǎn)近軸的發(fā)育。其中，脊椎動(dòng)物Ｄｌｘ基因編碼一種保守性較高的轉(zhuǎn)錄因子，在軟骨和骨骼的形成中可能發(fā)揮一定作用。Ｄｌｘ５在骨骼發(fā)育的早期開始表達(dá)，能直接激活骨骼形成和間接激活骨骼吸收以及促進(jìn)骨折愈合，是骨骼更新的重要調(diào)控子［１，２］。研究發(fā)現(xiàn)，豬Ｄｌｘ５基因外顯子１存在一個(gè)單核苷酸多態(tài)性（ＳＮＰ）（ＥＵ１６８２７２： ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ），豬群中存在ＴＴ、ＴＣ和ＣＣ ３種基因型，與豬的部分胴體性狀有關(guān)［３］。但該多態(tài)位點(diǎn)與胸椎數(shù)及其相關(guān)性狀的關(guān)系未見報(bào)道。因此，本研究分析了該多態(tài)性位點(diǎn)在６個(gè)中外豬種中的多態(tài)性，并分析了其與萊蕪黑豬體尺和胸椎數(shù)以及與里岔黑豬胸椎數(shù)的關(guān)系，以期為闡明Ｄｌｘ５在豬重要經(jīng)濟(jì)性狀形成中的作用奠定基礎(chǔ)，為發(fā)掘地方豬種的基因資源及培育新品系提供理論依據(jù)。

１材料與方法

１．１試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的３個(gè)山東地方／培育豬種，分別為萊蕪黑豬２６頭和魯萊黑豬（大約克♂×萊蕪黑豬 ♀）３０頭（采自山東省萊蕪黑豬原種豬場），里岔黑豬７５頭（采自山東省膠州市里岔黑豬育種中心）。３個(gè)引進(jìn)豬種分別為杜洛克豬７０頭、大約克豬６２頭和長白豬３９頭（采自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所良種豬育種中心）。所有試驗(yàn)豬飼喂同一日糧、自由采食，飼養(yǎng)管理、防疫措施一致。采集豬耳組織放入７０％乙醇中，－２０ ℃保存。

１．２試驗(yàn)方法

１．２．１ＤＮＡ提取豬耳組織中基因組ＤＮＡ提取按常規(guī)苯酚／氯仿方法進(jìn)行，０．８％瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測基因組的濃度和純度，－２０ ℃保存。

１．２．２性能測定對達(dá)到３６５日齡的２６頭萊蕪黑豬測定體長、屠前活體質(zhì)量、腹圍、胸圍、腿臀圍和胸椎數(shù)，測定方法根據(jù)《種豬測定原理與方法》進(jìn)行［４］。對達(dá)到１００ ｋｇ左右的７５頭里岔黑豬屠宰，記錄胸椎數(shù)。

１．２．３ＰＣＲ擴(kuò)增引物參照Ｃｈｅｎｇ等［３］序列，由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成。引物序列為：Ｆ：５′－ＧＣＣＡＣＣＧＣＣＡＧＴＧＡＡＴＧＡ－３′，Ｒ：５′－ＴＡＴＣＴＧＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＣ－３′。ＰＣＲ反應(yīng)體系：１０×ＰＣＲ Bｕｆｆｅｒ ２．５ μＬ，ＭｇＣｌ２（２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）２ μＬ，ｄＮＴＰｓ（各２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）２ μＬ（ＴａＫａＲａ），上下游引物（２５ μｍｏｌ／Ｌ）各０．４ μＬ，ｒＴａｑ ＤＮＡ聚合酶（５ Ｕ／μＬ）０．２ μＬ（ＴａＫａＲａ），基因組ＤＮＡ（５０～１００ ｎｇ／μＬ）１ μＬ，滅菌超純水加至２５ μＬ。ＰＣＲ擴(kuò)增程序：９４ ℃ ４ ｍｉｎ，然后９４ ℃ ３０ ｓ，６０ ℃ ３０ ｓ，７２ ℃ ４０ ｓ，進(jìn)行３５個(gè)循環(huán)，７２ ℃ １０ ｍｉｎ。ＰＣＲ產(chǎn)物用１．５％瓊脂糖凝膠電泳檢測。

１．２．４ＰＣＲ－ＲＦＬＰ在４ μＬ ＰＣＲ產(chǎn)物中加入４ Ｕ的ＨｈａⅠ內(nèi)切酶（ＴａＫａＲａ），１０×M Bｕｆｆｅｒ １ μＬ，滅菌超純水加至１０ μＬ，３７ ℃水浴消化６ ｈ，１．５％瓊脂糖凝膠電泳檢測，觀察和記錄酶切結(jié)果，判斷個(gè)體的基因型。

１．２．５ＰＣＲ產(chǎn)物測序經(jīng)ＨｈａⅠ內(nèi)切酶酶切后，對不同基因型個(gè)體的ＰＣＲ產(chǎn)物用柱式膠回收試劑盒回收純化，回收后的ＰＣＲ產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)公司直接測序。

１．３統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)ＨｈａⅠ酶切后的各種基因型，用ＰｏｐＧｅｎ３２軟件計(jì)算基因頻率、遺傳純合度（Ｈ０）、遺傳雜合度（Ｈｅ）、有效等位基因數(shù)（Ｎｅ），并作χ２適合性和獨(dú)立性檢驗(yàn)；用軟件ＰＩＣ＿Ｃａｌｃ ０．６計(jì)算多態(tài)信息含量（ＰＩＣ）。根據(jù)固定效應(yīng)模型，用ＳＡＳ ８．２軟件ＧＬＭ程序?qū)θR蕪黑豬不同基因型個(gè)體體尺和胸椎數(shù)以及里岔黑豬胸椎數(shù)的最小二乘均值進(jìn)行估計(jì)和顯著性檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)分析模型為：Ｙｉｊ＝μ＋Ｇｉ＋Ｓｊ＋ｅｉｊ，其中Ｙｉｊ為性狀表型值，μ為群體平均值，Ｇｉ為基因型效應(yīng)，Ｓｊ為性別效應(yīng)，ｅｉｊ為殘差效應(yīng)。

２結(jié)果與分析

２．１Ｄｌｘ５基因ＰＣＲ擴(kuò)增和ＨｈａⅠ酶切結(jié)果

以豬耳組織ＤＮＡ為模板，經(jīng)ＰＣＲ擴(kuò)增，得到１條３９９ ｂｐ的特異性條帶（圖１），與根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ登錄序列計(jì)算的片段大小相同。ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)ＨｈａⅠ限制性內(nèi)切酶酶切后，得到３種基因型（圖１），分別為ＴＴ（３９９ ｂｐ），ＴＣ（３９９／２２２／１７７ ｂｐ），ＣＣ（２２２／１７７ ｂｐ）。

２．２不同基因型的序列差別

測序結(jié)果表明，豬Ｄｌｘ５基因３９４位堿基Ｃ→Ｔ，通過與人、小鼠、大鼠和雞Ｄｌｘ５基因比對發(fā)現(xiàn)，這些物種在該位點(diǎn)均為Ｃ，３種基因型測序結(jié)果如圖２所示。

２．３不同豬種Ｄｌｘ５基因的基因型和基因頻率及群體χ２檢驗(yàn)

根據(jù)ＨｈａⅠ內(nèi)切酶酶切結(jié)果，統(tǒng)計(jì)６個(gè)豬群的基因型和基因頻率分布見表１。從表１可知，每個(gè)群體均檢測到３種基因型，在萊蕪黑豬中Ｃ為優(yōu)勢等位基因，而魯萊黑豬Ｔ為優(yōu)勢等位基因，ＴＣ在這兩個(gè)豬種中均為優(yōu)勢基因型；在里岔黑豬、杜洛克豬和大約克豬中Ｔ為優(yōu)勢等位基因，ＴＴ為優(yōu)勢基因型；在長白豬中也是Ｔ為優(yōu)勢等位基因，ＴＴ和ＴＣ均為優(yōu)勢基因型，其基因型頻率均為０．４３６。

經(jīng)χ２適合性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，除了大約克豬外，其余群體基因型分布均達(dá)到了哈代—溫伯格平衡（Ｐ＞０．０５）（表１）。經(jīng)χ２獨(dú)立性檢驗(yàn)，不同基因型在群體間的分布差異極顯著（Ｐ＜０．０１，χ２＝６１．６６＞χ２０．０１（１０）＝２３．２０９）（表２）。由表２可知，萊蕪黑豬與里岔黑豬、杜洛克豬、大約克豬差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；里岔黑豬與魯萊黑豬、杜洛克豬和大約克豬差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；魯萊黑豬與杜洛克豬差異極顯著（Ｐ＜０．０１），與大約克豬差異顯著（Ｐ＜０．０５）；杜洛克豬與大約克豬和長白豬差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；大約克豬與長白豬之間差異極顯著（Ｐ＜０．０１），其余豬種之間差異均不顯著（Ｐ＞０．０５）。

２．４Ｄｌｘ５基因的遺傳特性分析

Ｄｌｘ５基因在６個(gè)豬群的遺傳特性分析見表３。結(jié)果表明，所檢測各群體的雜合度（Ｈｅ）較大，雜合度由低到高依次為杜洛克、里岔黑豬、大約克豬、長白豬、魯萊黑豬、萊蕪黑豬。多態(tài)信息含量（ＰＩＣ）分析結(jié)果表明，除杜洛克豬ＰＩＣ＜０．２５０，處于低度多態(tài)外，其余各群體ＰＩＣ均在０．２５0～０．５０0之間，表明該位點(diǎn)在這５個(gè)豬種中均處于中度多態(tài)。

２．５Ｄｌｘ５基因不同基因型與萊蕪黑豬體尺和胸椎數(shù)的關(guān)聯(lián)分析

在對萊蕪黑豬Ｄｌｘ５基因ｇ．３９４Ｃ＞Ｔ位點(diǎn)多態(tài)性檢測的基礎(chǔ)上，對２６頭萊蕪黑豬體尺和胸椎數(shù)與該位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行了分析（表４）。結(jié)果顯示，３種基因型ＴＴ、ＴＣ和ＣＣ對萊蕪黑豬體尺和胸椎數(shù)影響均不顯著（Ｐ＞０．０５）。

２．６Ｄｌｘ５基因不同基因型與里岔黑豬胸椎數(shù)的關(guān)聯(lián)分析

對７５頭里岔黑豬胸椎數(shù)關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明（表5），ＴＴ、ＴＣ和ＣＣ ３種基因型對里岔黑豬胸椎數(shù)影響同樣未達(dá)到差異顯著的水平（Ｐ＞０．０５）。

３討論

３．１Ｄｌｘ５基因多態(tài)性在不同豬群中的遺傳分析

研究表明Ｄｌｘ５基因的失活可以使小鼠顱面骨、中軸骨和附肢骨骼異常，導(dǎo)致圍產(chǎn)期小鼠死亡［５］，所以Ｄｌｘ５基因?qū)τ谡{(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物肢體的發(fā)育起著非常重要的作用。本研究對同源盒基因Ｄｌｘ５外顯子１的多態(tài)性在不同豬群中的分布進(jìn)行了檢測，在所檢測的６個(gè)豬群中均發(fā)現(xiàn)了３種基因型，但等位基因Ｔ和Ｃ在不同豬群存在一定差異。在萊蕪黑豬中Ｃ等位基因占優(yōu)勢，但在其他豬種中均是Ｔ等位基因占優(yōu)勢，而Ｃｈｅｎｇ等［３］在所檢測的３１０頭大約克豬×梅山豬的雜交Ｆ２代中卻是Ｃ等位基因占優(yōu)勢。經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)在人（ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ：ＮＭ＿００５２２１．５）、小鼠（ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ：ＮＭ＿１９８８５４．１，ＮＭ＿０１００５６．２）、大鼠（ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ：ＮＭ＿０１２９４３．１）和雞（ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ： ＮＭ＿２０４１５９．１）Ｄｌｘ５基因的該位點(diǎn)也是Ｃ等位基因占優(yōu)勢。本研究之所以與上述研究和其他動(dòng)物Ｄｌｘ５基因在該位點(diǎn)存在差異，可能與動(dòng)物品種有關(guān)。

３．２Ｄｌｘ５基因多態(tài)性與萊蕪黑豬體尺和胸椎數(shù)的關(guān)系

研究表明，Ｄｌｘ５基因能直接調(diào)節(jié)谷氨酸脫氫酶的表達(dá)和促進(jìn)ＧＡＢＡｅｒｇｉｃ（ｇ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ｅｒｇｉｃ）神經(jīng)元的分化［６］，并且已經(jīng)證明Ｄｌｘ５在人類淋巴母細(xì)胞核和大腦組織中具有印記效應(yīng)［７］，但Ｋｉｍｕｒａ等［８］認(rèn)為在小鼠腦中不存在印記效應(yīng)。最近的研究表明，Ｄｌｘ５基因在雜交豬的骨骼肌、脂肪、肺、胃和小腸中呈母性表達(dá)，而在心、肝、腎、子宮、卵巢、睪丸或者垂體中不存在印記效應(yīng)［３］。而印記基因在調(diào)控哺乳動(dòng)物胎兒生長、發(fā)育和胎盤的功能以及出生后的行為方面具有重要的功能。Ｄｌｘ５基因外顯子１Ｃ→Ｔ的突變導(dǎo)致丙氨酸變?yōu)槔i氨酸，這可能改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，而蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化可能影響到骨骼的發(fā)育和生長激素的分泌［３］。

豬體長與胸椎和腰椎的數(shù)量有關(guān)，其胸腰椎骨數(shù)一般在２０枚左右，一般每增加１枚椎骨數(shù)，體長可以增加１．８４ ｃｍ。豬椎骨數(shù)的遺傳力為０．７５，胴體長與椎骨數(shù)有強(qiáng)的遺傳相關(guān)［９］。本試驗(yàn)中萊蕪黑豬ＴＣ基因型個(gè)體胸椎數(shù)多于ＴＴ和ＣＣ基因型個(gè)體，而里岔黑豬ＴＴ基因型胸椎數(shù)稍多于ＴＣ基因型，但均未達(dá)到差異顯著水平（Ｐ＞０．０５），是否ＴＴ或者ＴＣ基因型對豬的脊椎發(fā)育起著一定的作用，尚需進(jìn)一步研究。此前，Ｃｈｅｎｇ等［３］發(fā)現(xiàn)雜交豬（大白豬×梅山豬）Ｆ２代資源家系的不同基因型胴體長、骨骼百分比、平均背膘厚等性狀呈極顯著差異，而本研究不同基因型其體尺差異卻不顯著，可能與樣本含量較少有關(guān)。另外，最近研究發(fā)現(xiàn)ＢＭＰ－２蛋白能促進(jìn)Ｄｌｘ５ ｍＲＮＡ表達(dá)水平增高［１０］，而屬于ＢＭＰｓ亞家族的ＧＤＦ１１基因在確立骨骼模式中起著重要作用，ＧＤＦ１１基因缺失的小鼠表現(xiàn)為胸腰脊椎數(shù)增加［１１，１２］。豬ＢＭＰ－２、ＧＤＦ１１與Ｄｌｘ５間的關(guān)系值得進(jìn)一步探討。

致謝：在試驗(yàn)過程中得到２００９屆畢業(yè)生王留強(qiáng)和胡劉巖同學(xué)以及２００８級生物技術(shù)專業(yè)賈坤航同學(xué)的幫助，在此表示感謝！

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（責(zé)任編輯曾德芳）

收稿日期：２０１１－０７－０７

基金項(xiàng)目：山東省青島市基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目（０９－１－３－６４－ｊｃｈ）；臨沂大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目（ＢＳ０８０１９）

作者簡介：邢晉祎（１９６８－），男，山東曹縣人，副教授，博士，主要從事動(dòng)物分子遺傳研究，（電話）１５８６４９９２８０７（電子信箱）ｊｙｘｉｎｇ０２＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ；

通訊作者，戈新（１９５７－），研究員，主要從事畜禽育種與技術(shù)推廣工作，（電話）１５５０５３２１６３９（電子信箱）ｑｄｘｇ１９９３＠１２６．ｃｏｍ。