盧金清等

摘要：通過乳化劑、助溶劑的篩選，且進(jìn)行相關(guān)理化性能的檢測(cè)，研究植物源農(nóng)藥１６％赤菌寧微乳劑的配方制備方法，確定其最佳配方（體積分?jǐn)?shù)）為商陸提取物４％，厚樸提取物４％，蒼耳子提取物８％，烷基磺酸鈣（ＤＢＳ－Ｃａ）１０％，農(nóng)乳Ａ １５％，環(huán)己酮２０％，水３９％。該微乳劑質(zhì)量穩(wěn)定、成本低、安全、環(huán)保，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：植物源農(nóng)藥；煙草赤星??；微乳劑；研制

中圖分類號(hào)：ＴＱ４５５．４；Ｓ４８２．２＋９２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）04－0727-04

煙草赤星病由煙草赤星病菌［Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔｅ（Ｆｒ）Ｋｅｉｓｓｌｅｒ］引起，是煙草的一種重要真菌性病害，主要發(fā)生在煙草大田生長后期［１］，受害煙草植株葉片易破碎，煙葉等級(jí)降低，嚴(yán)重時(shí)煙葉內(nèi)在化學(xué)成分失調(diào)、品質(zhì)下降，甚至喪失其經(jīng)濟(jì)價(jià)值［２］。對(duì)于煙草赤星病目前并無特效的預(yù)防藥劑［３］，防治以化學(xué)防治為主［４］，會(huì)產(chǎn)生農(nóng)藥殘留，影響煙葉品質(zhì)，對(duì)環(huán)境造成污染［５，６］。與傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥相比，植物源農(nóng)藥具有環(huán)境相容性好、生物活性多樣、對(duì)高等動(dòng)物及害蟲天敵安全、不易使有害生物產(chǎn)生抗藥性等諸多優(yōu)點(diǎn)［７－９］。因此，研究與開發(fā)植物源農(nóng)藥成為新型農(nóng)藥研究的主要方向之一。

植物源農(nóng)藥１６％赤菌寧微乳劑采用中藥材商陸、厚樸、蒼耳子為原料，主要有效成分包括商陸皂苷、厚樸酚、和厚樸酚、綠原酸等，是一種符合環(huán)保、健康和持續(xù)發(fā)展理念的水基性農(nóng)藥制劑。前期研究表明，１６％赤菌寧稀釋２００倍、３００倍對(duì)煙草赤星病病菌孢子的形成和菌絲的生長均有明顯的抑制作用；田間防效試驗(yàn)表明，１６％赤菌寧稀釋２００倍后相對(duì)防效為８６．６％，對(duì)煙草赤星病有顯著的抑制效果［１０］。本試驗(yàn)結(jié)合前期研究成果，進(jìn)行１６％赤菌寧微乳劑的研制、性能測(cè)定。

１材料與方法

１．１材料與儀器

材料：商陸提取物、厚樸提取物、蒼耳子提取物（湖北省藥用植物校企共建研發(fā)中心自制，商陸提取物總皂苷含量≥６５％，厚樸提取物厚樸酚與和厚樸酚總含量≥１２％，蒼耳子提取物綠原酸含量≥１．９８％）；１６％赤菌寧微乳劑（３批次，湖北省藥用植物校企共建研發(fā)中心自制，批號(hào)：１００９０３、１００９１４、１００９２１）；烷基磺酸鈣（ＤＢＳ－Ｃａ）、農(nóng)乳Ａ、農(nóng)乳Ｂ、農(nóng)乳Ｃ、ＯＰ－１０（河北邢臺(tái)科王助劑有限公司，化學(xué)純）；Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、乙醇、環(huán)己酮、正丁醇、乙二醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）。

儀器：Ｄｆ－１０１Ｓ集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（天津泰斯特儀器有限公司）；ＨＨ－４型數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；自動(dòng)蒸氣滅菌鍋（寧波天恒儀器廠）；電子天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ，ＡＬＣ－２１０．２）。

１．２方法

１．２．１微乳劑的制備采用可乳化油法，將商陸提取物、厚樸提取物、蒼耳子提取物稱量后置磁力攪拌器中攪拌均勻，加入乳化劑、助溶劑攪拌均勻作為油相。在磁力攪拌、６０ ℃下將水加入到油相中，直至呈均一透明棕色液體。即制成１６％赤菌寧微乳劑。

１．２．２乳化劑的預(yù)選以非離子乳化劑農(nóng)乳Ａ、農(nóng)乳Ｂ、農(nóng)乳Ｃ、ＯＰ－１０、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０與陰離子乳化劑ＤＢＳ－Ｃａ為基礎(chǔ)對(duì)乳化劑進(jìn)行綜合預(yù)選，觀察判斷微乳的形成。以透明度、黏度及油相和水相的比例作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［１１］。將制備好的各樣品在０～６０ ℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行觀察，在某個(gè)溫度溶液出現(xiàn)透明或半透明現(xiàn)象的樣品進(jìn)入下一輪篩選，其余的不再進(jìn)行考察。

１．２．３助溶劑的預(yù)選助溶劑（包括乙醇、環(huán)己酮、正丁醇、乙二醇）初步篩選試驗(yàn)。將１．２．２中確定的乳化劑體系各制備１０ ｇ樣品，取７ ｇ樣品置于具塞試管中，分別向其中滴加備選助溶劑，混勻。在－１０～７０ ℃溫度下觀察體系的透明度變化，記錄透明范圍最寬時(shí)助溶劑加入量。

１．２．４乳液穩(wěn)定性試驗(yàn)按國家標(biāo)準(zhǔn)ＧＢ／Ｔ １６０３—２００１《農(nóng)藥乳液穩(wěn)定性測(cè)定方法》進(jìn)行。分別量取３批次１６％赤菌寧微乳劑各０．５ ｍＬ，滴入１００ ｍＬ ３０ ℃ ３４２ ｍｇ／Ｌ的標(biāo)準(zhǔn)硬水中，上下?lián)u動(dòng)２～３次，于３０ ℃恒溫水浴中靜置１ ｈ。無油狀物懸浮、無固體物沉淀、無濃度梯度且保持透明狀態(tài)則視為乳液穩(wěn)定。

１．２．５冷貯穩(wěn)定性試驗(yàn)按國家標(biāo)準(zhǔn)ＧＢ／Ｔ １９１３７—２００３《農(nóng)藥低溫穩(wěn)定性測(cè)定方法》進(jìn)行。以制劑在低溫時(shí)不產(chǎn)生不可逆的結(jié)塊或混濁為標(biāo)準(zhǔn)。分別量?。撑危保叮コ嗑鷮幬⑷閯└鳎保?ｍＬ，裝在無色磨口玻璃瓶中，密封，置于－１０～０ ℃冰箱中２４ ｈ，取出，在室溫下放置，觀察溶液，若結(jié)塊或混濁現(xiàn)象逐漸消失，能恢復(fù)透明狀態(tài)并經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)多次，重復(fù)性好，即樣品冷貯穩(wěn)定性好，為合格。

１．２．６熱貯穩(wěn)定性試驗(yàn)按國家標(biāo)準(zhǔn)ＧＢ/Ｔ １９１３６—２００３《農(nóng)藥熱貯穩(wěn)定性測(cè)定方法》進(jìn)行測(cè)試。分別量?。撑危保叮コ嗑鷮幬⑷閯└鳎常?ｍＬ，注入潔凈的安瓿瓶中，置各安瓿瓶于冰鹽浴中制冷，用高溫火焰封口，冷卻至室溫稱重。將封好的安瓿瓶置于金屬容器內(nèi)，再將金屬容器（５４±２）℃恒溫水浴１４ ｄ。取出，將各安瓿瓶外面拭凈后稱量，取質(zhì)量未發(fā)生變化的試樣，用ＨＰＬＣ法于２４ ｈ內(nèi)完成對(duì)有效成分厚樸酚與和厚樸酚、綠原酸的含量測(cè)定，計(jì)算其分解率，并觀察制劑的外觀。要求有效成分的分解率不得大于８％，制劑外觀、均相透明。

１．２．７水質(zhì)影響試驗(yàn)分別以蒸餾水、去離子水、自來水、３４２ ｍｇ／Ｌ標(biāo)準(zhǔn)硬水和１ １４０ ｍｇ／Ｌ硬水配制１６％赤菌寧微乳劑，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。

１．２．８ｐＨ對(duì)制劑穩(wěn)定性影響試驗(yàn)分別?。撑危保叮コ嗑鷮幬⑷閯└鳎保?ｍＬ，分別用乙酸和碳酸氫鈉調(diào)ｐＨ至３～９，在（５４±２）℃溫度下貯存１４ ｄ，采用ＨＰＬＣ法測(cè)定有效成分厚樸酚與和厚樸酚、綠原酸的含量，計(jì)算其分解率，比較不同ｐＨ下制劑中有效成分的分解率。

２結(jié)果與分析

２．１乳化劑的預(yù)選

從表１可以看出，ＤＢＳ－Ｃａ用量為２％（體積分?jǐn)?shù)，下同）的體系、非離子乳化劑用量為５％的體系均不合格，說明ＤＢＳ－Ｃａ的用量應(yīng)在２％以上，非離子乳化劑的用量應(yīng)在５％以上；有９個(gè)體系透明，其應(yīng)用的乳化劑組合分別是ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ，ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ｃ，ＤＢＳ－Ｃａ／ＯＰ－１０。據(jù)此，初步確定該體系中能應(yīng)用的乳化劑為ＤＢＳ－Ｃａ、農(nóng)乳Ａ、農(nóng)乳Ｃ、ＯＰ－１０。

２．２助溶劑的預(yù)選

從表２可以看出，乙醇在ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ（５／１５）體系中溫度范圍最寬（０～４０ ℃），用量為２０％；環(huán)己酮在ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ（１０／１５）體系中溫度范圍最寬（－５～６０ ℃），用量為２０％；正丁醇在ＤＢＳ－Ｃａ／ＯＰ－１０（１０／１０）體系中溫度范圍最寬（１０～５０ ℃），用量為２５％；乙二醇在各個(gè)體系不同溫度范圍中表現(xiàn)都不佳。

試驗(yàn)表明，具有較好的溫度適應(yīng)性的助溶劑是乙醇和環(huán)己酮；正丁醇其次，但正丁醇的用量大，成本高，不宜用作后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn)；乙二醇表現(xiàn)最差。故選用的助溶劑初步定為乙醇和環(huán)己酮。

２．３透明溫度范圍

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果（表2），ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ／環(huán)己酮體系和ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ｃ／乙醇體系均具有較好的溫度適應(yīng)性，但ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ｃ／乙醇體系的溫度范圍不能完全符合要求，只有ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ／環(huán)己酮體系（１０／１５／２０）達(dá)到－５～６０ ℃的透明溫度范圍。所以，符合微乳劑溫度范圍技術(shù)要求的配方組成為ＤＢＳ－Ｃａ／農(nóng)乳Ａ／環(huán)己酮體系（１０／１５／２０）。

２．４配方的優(yōu)化

根據(jù)微乳劑產(chǎn)品的質(zhì)量要求，對(duì)乳化劑、助溶劑篩選及配方優(yōu)化，確定的最佳配方為：商陸提取物４％，厚樸提取物４％，蒼耳子提取物８％，ＤＢＳ－Ｃａ １０％，農(nóng)乳Ａ １５％，環(huán)己酮２０％，補(bǔ)水至１００％。

２．５穩(wěn)定性試驗(yàn)

３批次１６％赤菌寧微乳劑均能與水以任意比例混溶，３４２ ｍｇ／Ｌ的標(biāo)準(zhǔn)硬水稀釋液在３０ ℃，２４ ｈ內(nèi)能夠保持透明狀態(tài)，證明乳液穩(wěn)定。

２．６冷貯穩(wěn)定性試驗(yàn)

３批次１６％赤菌寧微乳劑冰凍后，放置在室溫下ｌ ｈ內(nèi)均可恢復(fù)至透明狀態(tài)。重復(fù)試驗(yàn)５次，樣品均能自行恢復(fù)，表明本品具有很好的冷貯穩(wěn)定性。

２．７熱貯穩(wěn)定性試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果（表３）表明，制品在（５４±２）℃的溫度條件下，外觀能保持透明穩(wěn)定狀態(tài)，３批樣品中有效成分厚樸酚與和厚樸酚總含量的平均熱貯分解率為３．５４％，綠原酸的平均熱貯分解率為５．７３％，均小于６％，表明制品熱貯穩(wěn)定性良好。

２．８水質(zhì)影響試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果（表４）表明，水質(zhì)硬度對(duì)制劑穩(wěn)定性有一定影響，但影響不大。因此，從保證產(chǎn)品質(zhì)量和工業(yè)生產(chǎn)節(jié)約成本的角度考慮，選擇用自來水配制１６％赤菌寧微乳劑。

２．９ｐＨ條件試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果（表5）表明，有效成分厚樸酚與和厚樸酚、綠原酸只有在ｐＨ ６～７時(shí)熱貯分解率在８％以下，過酸過堿都使制劑中有效成分分解率增加，不利于貯存。因此本品的ｐＨ范圍控制為６～７。

２．１０１６％赤菌寧微乳劑的技術(shù)指標(biāo)

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)１６％赤菌寧微乳劑制定技術(shù)指標(biāo)如表６。

３小結(jié)與討論

植物源農(nóng)藥的研究、開發(fā)和應(yīng)用，順應(yīng)了社會(huì)和市場(chǎng)的要求，是農(nóng)業(yè)走可持續(xù)發(fā)展的有力保障［７］。根據(jù)微乳劑的形成機(jī)理，選用合適的乳化劑、助溶劑，以中藥材商陸、厚樸、蒼耳子為原料，制備出１６％赤菌寧微乳劑，該微乳劑理化性狀好、質(zhì)量穩(wěn)定可控。相對(duì)于傳統(tǒng)的煙草赤星病防治制劑，１６％赤菌寧微乳劑具有防效顯著、環(huán)境友好的特點(diǎn)，符合健康、環(huán)保、持續(xù)發(fā)展的理念，適合工業(yè)化生產(chǎn)。同時(shí)，該制劑的研究為商陸、厚樸、蒼耳子等中藥材的深入開發(fā)及其制劑的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

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