宗萬里

（威海市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，山東 威海 264209）

二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）作為油脂類抗氧化劑而廣泛應(yīng)用于膨化食品中。但是抗氧化劑在減緩油脂酸敗的同時(shí)也給人們帶來了健康風(fēng)險(xiǎn)。研究表明BHT、BHA超量使用均對人體有害[1]。所以其添加必須在規(guī)定范圍內(nèi)按規(guī)定限量使用，而且添加之后必須在食品標(biāo)簽上注明。GB 2760—2011《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中對BHT（二叔丁基羥基甲苯）、BHA（叔丁基羥基茴香醚）用于膨化食品中的最大使用量也有一定要求[2]，因此對膨化食品中的抗氧化劑的快速準(zhǔn)確檢測方法的研究十分必要。測定抗氧化劑的檢測方法有氣相色譜法[3-7]、高效液相色譜法[8-10]、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[11-14]。本文以無水乙醇直接提取試樣中的抗氧化劑，以強(qiáng)極性毛細(xì)管柱FFAP分離檢測膨化食品中抗氧化劑含量，前處理簡單，所使用試劑對實(shí)驗(yàn)人員的健康危害小，靈敏度高，兩種抗氧化劑保留時(shí)間適中，是一種準(zhǔn)確、可靠、快速的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC2010型，帶氫火焰檢測器，日本島津公司；分析天平：FC204型，精度為0.1mg，上海精密科學(xué)儀器有限公司；料理機(jī)，九陽股份有限公司；BHT標(biāo)準(zhǔn)品：99.5%，5g/瓶，CHEM SERVICE；BHA標(biāo)準(zhǔn)品：99.4%，5g/瓶，CHEM SERVICE；毛細(xì)管色譜柱：FFAP（強(qiáng)極性，25m×0.53 mm×1μm），中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所色譜技術(shù)研究開發(fā)中心；無水乙醇:分析純，99.7%，天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司。

1.2 色譜參考條件

色譜柱：毛細(xì)管色譜柱FFAP（強(qiáng)極性，25m×0.53 mm×1μm）；載氣（氮?dú)猓┝魉贋?0mL/min，恒定流速控制；氫氣流速為40mL/min；空氣流速為400mL/min；WBI進(jìn)樣口溫度:230℃；柱溫：150℃保持3min，以30℃/min升至200℃，保持1min，再以10℃/min升至230℃，保持10min； 檢測器溫度：250℃，尾吹30mL/min；進(jìn)樣方式:直接注入；進(jìn)樣量：1μL。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

精密稱取BHT標(biāo)準(zhǔn)品100mg,置于100 mL 容量瓶中,無水乙醇溶解至刻度,搖勻。得1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

精密稱取BHA標(biāo)準(zhǔn)品100mg,置于100 mL 容量瓶中，無水乙醇溶解至刻度,搖勻。得1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別精密量取1、2、5、10、20mL的BHT、BHA標(biāo)準(zhǔn)貯備液至100mL容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,得BHT、BHA濃度為10μg/mL、20μg/mL、50μg /mL、100μg /mL、200μg /mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。每個(gè)濃度取1μL直接注入氣相色譜儀進(jìn)行分析。

1.3.3 供試品溶液的配制(樣品前處理)

用料理機(jī)將膨化食品樣品粉碎,再精確稱取2.5g置于30mL具塞刻度試管中，加入無水乙醇稀釋至25 mL，充分振蕩搖勻、靜置20分鐘后吸取提取液1μL注進(jìn)氣相色譜儀進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜圖

在1.2色譜條件下, 得到BHT、BHA標(biāo)準(zhǔn)樣品、空白樣品、空白加標(biāo)樣品的色譜圖, 如圖1所示,BHT、BHA保留時(shí)間分別為3.9、7.9分鐘左右，峰型尖銳。兩種組分分離良好，最后一種組分BHA在9分鐘之前流出，分析時(shí)間適中。

圖1 各樣品的色譜圖Fig.1 Chromatography of each sample

2.2 樣品前處理

甲醇、乙腈、無水乙醇三種有機(jī)溶劑均能溶解BHT、BHA，并且三種有機(jī)溶劑都不與油脂互溶，由于甲醇、乙腈的毒性較大，考慮到保護(hù)環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)人員的健康，本文采用無水乙醇作為提取溶劑。在樣品經(jīng)行粉碎時(shí)，粉碎粒度不要過小，以防細(xì)小的顆粒堵塞進(jìn)樣針。如果粒度過小，可以考慮吸取5毫升提取液至5毫升刻度管中，然后用離心機(jī)離心，或用0.45μm有機(jī)膜過濾,再注入氣相色譜儀進(jìn)行檢測。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和最低檢出限

在實(shí)驗(yàn)條件下，以峰面積y為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度c/(μg/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程，以基線噪聲3倍峰面積對應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限(RSN=3)[15]，回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表1。

表1 回歸曲線的基本參數(shù)Table 1 Regression equation

2.4 精密度和加標(biāo)回收試驗(yàn)

取不含BHT、BHA的膨化食品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，向2.5g膨化食品中分別添加1000μg/mLBHT、BHA標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05 mL、0.1mL、0.25mL即樣品中BHT、BHA含量為20mg/kg、40mg/kg、100mg/kg。按上述提取步驟進(jìn)行提取，重復(fù)6次。按1.2色譜條件進(jìn)行測定，精密度和回收率計(jì)算結(jié)果列于表2。由表2數(shù)據(jù)可知，采用本方法對BHT的平均回收率分別為94.90%，96.85%，97.81%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.48%，2.66%，1.06%；BHA的平均回收率分別為97.35%，96.35%，94.86%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.66%，2.40%，0.93%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

表2 按照本方法樣品添加回收和精密度實(shí)驗(yàn)（n=6）Table 2 Spiked recovery and precision by this method(n=6)

3 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)采用強(qiáng)極性毛細(xì)管氣相色譜法對膨化食品中BHT、BHA的含量進(jìn)行測定, 并進(jìn)行了方法學(xué)考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法前處理簡單、出峰時(shí)間適中, 所用試劑環(huán)境友好，對操作人員健康危害小，方法可行, 結(jié)果準(zhǔn)確。該方法節(jié)省了檢測時(shí)間，在實(shí)際的檢測工作中具有較高的參考價(jià)值。

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[3] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 23373—2009 食品中抗氧化劑丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯(BHT)與特丁基對苯二酚(TBHQ)的測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2009.

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