羅永會(huì)，張翠香，徐春萍

（大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室， 云南大理 671000）

糖原是由許多葡萄糖分子聚合而成的物質(zhì)，是動(dòng)物機(jī)體能迅速動(dòng)用的糖儲(chǔ)形式存之一。肝糖原的含量通常約占肝重的5%。許多因素可影響肝糖原的含量，如飽食后肝糖原增加，饑餓則肝糖原逐漸降低。同樣饑餓和飽食對(duì)血糖也有一定影響,饑餓時(shí)血糖會(huì)短暫降低,通過(guò)神經(jīng)調(diào)節(jié)和體液調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)化來(lái)維持血糖濃度。會(huì)緩慢升高直到平衡，飽食時(shí)血糖會(huì)短暫升高,刺激胰島B細(xì)胞分泌胰島素 胰島素促進(jìn)血糖的分解和肝肌糖原的合成，使血糖濃度下降，以調(diào)節(jié)血糖平衡到正常水平。本文以昆明種小鼠作實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分析饑餓和飽食對(duì)小鼠肝糖原含量及血糖的影響。

1 儀器和材料

1.1 儀器

HH－4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)；722 E可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海分析儀器有限公司）；小架盤天平、手術(shù)剪、鑷子、微量移液器。

1.2 試劑

氫氧化鉀、蒽酮、濃硫酸，標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖，無(wú)水碳酸鈉、灑石酸、酒石酸、結(jié)晶硫酸銅（CuSO4·5H2O）、鉬酸、鎢酸鈉、濃磷酸（85%）、無(wú)水葡萄糖、苯甲酸、生理鹽水、氟化鈉、草酸鉀等，均為國(guó)產(chǎn)分析純；昆明種小鼠（大理學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房提供）。

2 方法

2.1 動(dòng)物準(zhǔn)備

取體重在25g以上的健康小鼠60只，隨機(jī)分成兩組：饑餓組30只：實(shí)驗(yàn)前嚴(yán)格禁食不禁水30h；飽食組30只：正常攝食，飲水。

2.2 樣品的制備

小鼠斷頭取全血于抗凝管中，輕輕混勻即得小鼠抗凝血液備用。立即剖腹取出肝臟，用生理鹽水洗去血污后用濾紙吸干水份。

2.3 肝糖原的測(cè)定[1]

準(zhǔn)確稱取饑餓小鼠肝臟0.6g,飽食小鼠肝臟0.4g。分別于15ml大試劑管中，各加入30%KOH溶液1.5ml，置于沸水浴中煮沸20min，第隔5min振搖試管1次，使充分混勻。待肝組織全部溶解后取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到100ml混勻后,按表1操作：

表1 小鼠肝糖原的測(cè)定

混勻，置沸水中10min，冷卻，經(jīng)以空白管調(diào)零，于620nm波長(zhǎng)處讀取吸光度。計(jì)算肝糖原原含量，計(jì)算公式：

式中：1.11是此法測(cè)得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù)，即111ug糖原用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于100ug葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色。

2.4 血糖的測(cè)定[2]

微量移液器準(zhǔn)確吸取小鼠抗凝血液0.2 ml，慢慢地將血液滴入水中，并用其水洗滌微量移液器吸頭，使血液全部移入錐形瓶?jī)?nèi)，混勻。在加入1/3 mol/L H3SO4 0.4 ml，10%鎢酸鈉溶液0.4 ml，充分混勻。放置5~10 min。待溶液由紅色變?yōu)榭Х壬?，過(guò)濾收集濾液備用。濾液必須透明清亮，即無(wú)蛋白血濾液，按表2操作。

表2 小鼠血糖的測(cè)定

混勻放置3 min，將上述各管用蒸餾水3 ml稀釋。將各管混勻后，用空白管調(diào)零，在波長(zhǎng)620 nm比色，分別讀取各管吸光度值，計(jì)算血糖濃度，計(jì)算公式：

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s )表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析，比較組間顯著性差異。

3 結(jié)果與分析

饑餓與飽食對(duì)小鼠肝糖原及血糖的影響結(jié)果如表3。

表3 饑餓與飽食對(duì)肝糖原及血糖的影響 ( ±s )

飽食和饑餓組小鼠肝糖原含量以及血糖濃度測(cè)定結(jié)果：飽食和饑餓組小鼠肝糖原含量及血糖濃度相差很大，且個(gè)體差別也很大。饑餓與飽食進(jìn)行比較小鼠血糖及肝糖原都表現(xiàn)為明顯的降低或升高趨勢(shì)（即饑餓小鼠血糖及肝糖原降低，而飽食小鼠血糖及肝糖原升高），P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

[1] 吳慧平.飽食與饑餓對(duì)小鼠肝糖原含量影響的實(shí)驗(yàn)方法改良察[J].生物學(xué)雜志,2007,24(5):64-65,74

[2] 張翠香，羅永會(huì)，陳貴元.胰島素及腎上腺素對(duì)家兔血糖含量影響綜合實(shí)驗(yàn)的建立和探討[J].臨床與實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志