★ 陶松劉玲劉旭海許錦珍張璐（.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌330004；.江中藥業(yè)股份有限公司 南昌330096）

補(bǔ)腎口服液是由補(bǔ)益名方“五子衍宗方”[1]加淫羊藿，韭菜子，桑葚子而組成的經(jīng)驗(yàn)方，該方由枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子及淫羊藿等八味中藥組成，具有補(bǔ)腎壯陽功效，用于腎虛腰痛，遺精早泄等癥。本品中黃酮類成分為其主要有效成分，其中淫羊藿苷為主要成分，為了提高產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，確保用藥的安全有效，本文建立的高效液相色譜法測(cè)定淫羊藿苷，結(jié)果表明，該方法可靠，準(zhǔn)確度高，可用于檢測(cè)補(bǔ)腎口服液中淫羊藿苷含量，達(dá)到有效控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。

1 儀器與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀(Agilent，USA)、Agilent Chemstation色譜工作站；SK5200H型數(shù)控超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；島津AUW220十萬分之一電子天平；AB104－N型萬分之一天平（梅特勒－托利多）；超純水機(jī)（美國Mill?pore公司）；所用玻璃儀器均為天玻牌A級(jí)。

補(bǔ)腎口服液（江中制藥集團(tuán)有限公司研制，瓶/ 100mL）；淫羊藿苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110737-200312）；甲醇（色譜純，山東禹王實(shí)驗(yàn)有限公司化工分公司）；所用試劑水均為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

ZORBAX SB-C18色譜柱 (250mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水（63:37）；體積流量：1.0mL/ min；檢測(cè)波長：270nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液的制備：取淫羊藿苷對(duì)照品2.24mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，精密吸取1mL，置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液[2,3]。

供試品溶液的制備[4]：精密吸取補(bǔ)腎口服液2mL置于25mL量瓶中，加甲醇超聲處理30分鐘，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

陰性樣品的制備[5]：按處方比例及制備方法，制備不含淫羊藿的陰性樣品，同“2.3”項(xiàng)供試品溶液的制備方法，制成陰性供試品溶液。

2.3 方法專屬性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10mL，在”2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，淫羊藿苷峰形良好，無雜質(zhì)干擾且基線平穩(wěn)，結(jié)果對(duì)照峰與陰性溶液峰沒有重疊，專屬性良好，見圖1。

圖1 對(duì)照品溶液(A)、供試品溶液(B)及陰性樣品溶液(C)

表1 淫羊藿苷含量測(cè)定加樣回收試驗(yàn)

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液1、5、10、15、20μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，以對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)對(duì)峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為：Y=1301X+16.91，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。線性范圍在0.0224~0.448mg，呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，按色譜條件測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果淫羊藿苷面積平均值的RSD值為0.72%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，放置0、2、4、8、12、24h后，按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.37%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析，以淫羊藿苷峰面積平均值計(jì)算含量，結(jié)果含量的RSD值為2.18%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的本品溶液（批號(hào)：20110921）2mL，各6份，分別精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液2mL（0.224mg/mL），搖勻，按樣品的處理方法將其制成供試品溶液，按上述液相色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批不同批號(hào)的補(bǔ)腎口服液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀中，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

檢測(cè)波長的選擇，淫羊藿苷對(duì)照品在200~ 380nm波長進(jìn)行紫外掃描，淫羊藿苷在270nm處有最大吸收，并且供試品色譜中其他組分與淫羊藿苷可以達(dá)到基線分離，且靈敏度高，故確定270nm波長作為淫羊藿苷的測(cè)定波長。

補(bǔ)腎口服液由枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子及淫羊藿等八味中藥組成，經(jīng)試驗(yàn)證明，用甲醇超聲提取淫羊藿苷，可以將淫羊藿苷提取完全，故選擇用甲醇作為提取溶劑；同時(shí)對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行考察，對(duì)樣品超聲15、30、45分鐘對(duì)淫羊藿苷提取的影響，結(jié)果表明，超聲30、45分鐘都能將淫羊藿苷成分提取完全，故初步選定超聲時(shí)間為30分鐘。

本試驗(yàn)建立的高效液相色譜法，能有效分離各組分，且空白試驗(yàn)無干擾，具有靈敏度高、操作簡單、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可作為補(bǔ)腎口服液含量測(cè)定質(zhì)量控制方法。

[1]張?zhí)?，竇桂芳，王學(xué)美，等.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定加味五子衍宗方湯劑3種活性成分的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（1）:22-26.

[2]張柳，何靜文.仙茸壯陽口服液中淫羊藿苷的含量測(cè)定[J].中國藥業(yè)，2004，13（11）:36-37.

[3]李順濃.延年樂口服液中淫羊藿苷的鑒別和含量測(cè)定[J].天津藥學(xué)，2008，20（3）:19-21.

[4]高思英.健腎靈顆粒劑中淫羊藿苷的含量測(cè)定[J].安徽醫(yī)藥，2004，8（6）:463.

[5]王秀英，徐霞，叢江.大力神口服液中淫羊藿苷的含量測(cè)定[J].Chi?na Pharmacist，2003，6(10):638-640.