李 彬 陳 靜 趙文威 韓梅玲 劉春莉

（鄭州安圖綠科生物工程有限公司，河南 鄭州 450016）

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法具有選擇性好、靈敏度高、分析速度快、設(shè)備簡單等特點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[1]。其檢測結(jié)果的批間重現(xiàn)性是臨床檢測的重要性能指標(biāo)之一。不同試劑對變異系數(shù)的要求不同，通常要求試劑的批間變異系數(shù)不超過15%[2]。我公司在工藝研究中，總結(jié)出四個生產(chǎn)過程變異控制要點(diǎn)，經(jīng)過驗(yàn)證，能夠?qū)⑴g變異降低5%以上，效果明顯?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

包被板原料，見表1。酶結(jié)合物使用蛋白原料，見表2。

表1 包被板使用原料

表2 酶結(jié)合物使用蛋白原料

1.2 試劑盒

未進(jìn)行專項(xiàng)控制前的試劑盒：游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）。批號：20100920、20100925、20101011、20101018。進(jìn)行專項(xiàng)要點(diǎn)控制后的試劑盒，見表3。

表3 控制各要點(diǎn)后試劑盒批號

1.3 質(zhì)控品

BIORAD質(zhì)控品369#，批號54503。

1.4 試驗(yàn)設(shè)備

e-Lisa全自動加樣器加樣；高靈敏LUMO發(fā)光儀檢測。

1.5 方法

引起試劑盒批間變異較大的原因是多方面的。包括試劑盒的原材料、生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)規(guī)模等[3]。驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，在生產(chǎn)過程中，不同的包被板原料[4,5]、包被液量、封閉液量、酶結(jié)合物使用蛋白原料這四個控制點(diǎn)直接影響化學(xué)發(fā)光免疫診斷試劑盒的批間變異。我公司選取具有代表性的產(chǎn)品：游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）進(jìn)行變異研究。我們在產(chǎn)品中試時，分別改變變異控制要點(diǎn)進(jìn)行同步驗(yàn)證，尋求最佳的要點(diǎn)控制方案。

1.6 對比評價

每個控制要點(diǎn)進(jìn)行橫向比較，確定每個要點(diǎn)控制方案的有效性。

表4 使用不同包被板原料生產(chǎn)的成品批間變異對比

表5 采用不同包被量生產(chǎn)的成品批間變異對比

表6 采用不同封閉量生產(chǎn)的成品批間變異對比

表7 使用不同酶蛋白原料生產(chǎn)的成品批間變異對比

表8 全面控制各要點(diǎn)前后生產(chǎn)的成品批間變異對比

以未進(jìn)行專項(xiàng)控制前的產(chǎn)品為對照品。評價全面進(jìn)行要點(diǎn)控制后的產(chǎn)品的批間變異。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 試驗(yàn)均采用復(fù)孔雙次進(jìn)行。數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行批間變異分析。

2 結(jié) 果

包被板原料的對比結(jié)果，見表4。包被液量的對比結(jié)果，見表5。封閉液量的對比結(jié)果，見表6。酶結(jié)合物使用蛋白原料的對比結(jié)果，見表7。全面控制各要點(diǎn)前后對比測試結(jié)果，見表8。

3 討 論

生產(chǎn)用原料，如包被板原料、酶結(jié)合物使用蛋白原料明顯影響產(chǎn)品的批間變異。我國的診斷試劑生產(chǎn)用原輔料質(zhì)量有待進(jìn)一步提高。診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)該經(jīng)過驗(yàn)證選擇性能較好的原輔料進(jìn)行生產(chǎn)，這樣可以大幅度降低批間變異，為臨床提供更為穩(wěn)定的診斷器械。

生產(chǎn)過程工藝，如包被液量、封閉液量等對變異的影響也很大。隨著包被液量增大，變異逐漸變??；隨著封閉液量增大，變異逐漸變小。這些生產(chǎn)工藝要點(diǎn)的優(yōu)化可以明顯改善產(chǎn)品變異。

綜合控制各要點(diǎn)后，我公司自產(chǎn)的游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）的批間變異降低了5%以上，這項(xiàng)性能的提升對化學(xué)發(fā)光免疫診斷試劑盒是非常有意義的。同時，我們將這些控制要點(diǎn)進(jìn)一步推廣到其他二十五項(xiàng)化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品中，效果明顯，近兩年來，各產(chǎn)品變異情況有了很大的改善。建議各生產(chǎn)廠家都能夠從源頭入手，綜合控制生產(chǎn)全過程，為臨床提供更為可靠的診斷試劑[6]。

[1]汪晨,吳潔,宗晨,等.化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與應(yīng)用進(jìn)展[J].分析化學(xué),2012,40(1):3-10.

[2]王曉娟,廖雪雁,郭中平.對體外診斷試劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的幾點(diǎn)建議[J].中國生物制品學(xué)雜志,2009,22(12):1263-1264.

[3]孫玉芬,秦國天.國產(chǎn)ELISA試劑盒批間變異的分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2003,19(7):908-909.

[4]李金明.抗原和抗體的固相化方法研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊,1997,18(5):209-212.

[5]許斌,錢衛(wèi)平,林必華,等.ELISA二種不同包被方法的原子力顯微鏡表征及活力比較[J].臨床檢驗(yàn)雜志,1999,17(2):83-85.

[6]戴捷,蘇磊.體外診斷試劑有效管理與質(zhì)量安全控制的探討[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2011,8(11):80-82.