陳婷 莫灼康

中藥材益母草中水蘇堿含量鑒定分析

陳婷 莫灼康

目的研究中藥材益母草的水蘇堿成分的含量鑒定。方法應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定中藥材益母草中水蘇堿成分的含量，以Kromasil KR60-5CN為色譜柱，乙腈-甲醇溶液為流動(dòng)相，以外標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)定柱溫32℃，流速1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。結(jié)果水蘇堿回歸方程為Y=1206.578X-173.562，水蘇堿進(jìn)樣量在1.00～25.00μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，r=0.9954，樣品平均加樣回收率為98.83%(n=9)，RSD為0.95%。結(jié)論用高效液相色譜法測(cè)定中藥材益母草中水蘇堿含量準(zhǔn)確縣可靠，可重復(fù)利用，是控制該制劑質(zhì)量的有效方法。

中藥材;益母草;水蘇堿;含量鑒定

益母草是屬唇型科植物，性味辛、苦，微寒，含有生物堿類(lèi)、二萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、苷類(lèi)、脂肪酸類(lèi)等化學(xué)成分。由于益母草中最為主要活性生物堿是水蘇堿，因此對(duì)益母草藥材及制劑的質(zhì)量控制以水蘇堿為指標(biāo)。因此本研究應(yīng)用高效液相色譜法用于水蘇堿的含量測(cè)定，以提高益母草藥材定量分析準(zhǔn)確度?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 研究?jī)x器與材料

Agilengt 1200高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司);722型可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司);G1376A高效液相泵，G1367B自動(dòng)進(jìn)樣器，G1365B多波長(zhǎng)UV檢測(cè)器，G1316A柱溫箱;Hystar色譜工作站;1810-B型石英自動(dòng)雙重純水蒸餾器(購(gòu)自西安常儀生化儀器有限公司);HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(購(gòu)自上?？德穬x器設(shè)備有限公司)。益母草藥材(生產(chǎn)批號(hào)20100702)購(gòu)自廣東省東莞國(guó)藥集團(tuán)藥材有限公司;鹽酸水蘇堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110712-201008);乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純;水為二次重蒸水。

2 試驗(yàn)方法

2.1 色譜條件的選擇 選擇色譜柱為Kromasil KR60-5CN(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相組成為乙腈:甲醇:水=60∶30:10;以外標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)定柱溫32℃，流速1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 210nm，進(jìn)樣量為 10μl［1］。

2.2 制備對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，105℃干燥至恒重，適量水蘇堿置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得0.5mg/ml的對(duì)照品溶液，搖勻，備用［2］。

2.3 制備供試品溶液 取本品1g，精密稱(chēng)定后，置容量瓶中，精密加甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲(250W，40kHz)處理30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻?yàn)V過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，過(guò)氧化鋁一活性炭柱(堿性氧化鋁5g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2g，甲醇預(yù)洗)，收集甲醇洗脫液100ml，蒸干后殘?jiān)恿鲃?dòng)相適量使之溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得［3］。

2.4 線性關(guān)系的分析 精密稱(chēng)取水蘇堿對(duì)照品23.5mg，置20ml容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻即得貯備液(1.175mg/ml)。取母液配成濃度分別為58.75、117.5、235、352.5、528.75μg/ml的對(duì)照品溶液，各取 50μl進(jìn)樣，進(jìn)樣量分別進(jìn)樣 2.0、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0μl。以峰面積常用對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)，鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量常用對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果水蘇堿回歸方程:Y=1206.578X-173.562，線性范圍:1.00～25.00μg。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h測(cè)定水蘇堿含量，結(jié)果其RSD值為0.95%。說(shuō)明供試品溶液在本實(shí)驗(yàn)條件下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn) 取1份對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果其RSD值為1.01%，表明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液(批號(hào)2008423)5份，分別進(jìn)樣測(cè)定水蘇堿峰含量。結(jié)果其RSD值為1.14%，表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密量取批號(hào)為081208的樣品共9份，每份分別精密加入加入鹽酸水蘇堿對(duì)照液0.5mg/ml，適量，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算鹽酸水蘇堿回收率為98.83%，RSD為0.95%。

2.9 樣品測(cè)定 分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算得5批口服液樣品中水蘇堿的含量分別為 0.66、0.65、0.70、0.69g/ml。

3 討論

中醫(yī)臨床將益母草視為較常用的婦科良藥，具有活血和調(diào)經(jīng)的作用?，F(xiàn)代藥理研究可見(jiàn)，益母草中水蘇堿等多種活性生物堿具有抑制血小板聚集、提高心功能、改善心肌缺血、抗凝、增加冠狀動(dòng)脈血流、抗血栓形成等多種作用，且作用較久。益母草含水蘇堿、益母草堿、益母草啶和益母草寧等多種生物堿。

根據(jù)以上的研究方法顯示，采用基于氰基柱的高效液相色譜檢測(cè)的方法，定量測(cè)定益母草原藥材中水蘇堿的含量是可行的，因此該方法具有潛在的通用性，操作簡(jiǎn)便、可行，重復(fù)性好。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)樣品的研究發(fā)現(xiàn)，由于鹽酸水蘇堿的紫外吸收為末端吸收，且其極性較大，故很難以反相HPLC進(jìn)行測(cè)定，有文獻(xiàn)采用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱獲得了較好的分離。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用高效液相色譜法測(cè)定中藥材益母草中水蘇堿含量準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為控制該制劑質(zhì)量的方法。

［1］張嫻，彭國(guó)平.益母草屬化學(xué)成分研究進(jìn)展.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2003，15(2):162-166.

［2］晁志，馬麗玲，周秀佳.等.反向離子對(duì)色譜法測(cè)定益母草藥材中水蘇堿和益母草堿的含量.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25:1226-1227.

［3］劉新華，辛宏，朱依諄.等.不僅是“益母”草:益母草的心臟保護(hù)作用.生理學(xué)報(bào)，2007，59(5):578-584.

523018廣東省東莞市人民醫(yī)院普濟(jì)分院中藥房(陳婷);東莞市人民醫(yī)院制劑室(莫灼康);