宋春紅

北京市通州區(qū)中心血站，北京 101100

目的應(yīng)用ACP215型血液處理儀制備甘油化紅細(xì)胞、去甘油化紅細(xì)胞，觀察去甘油化紅細(xì)胞的質(zhì)控指標(biāo)，并對操作方法和制備效果進(jìn)行評價(jià)。方法隨機(jī)取10袋紅細(xì)胞懸液（2U/袋），于采血后10d應(yīng)用215型血液儀處理制備甘油化紅細(xì)胞，-70℃冰箱保存30d，37℃融化，再應(yīng)用215型血液處理儀制備去甘油化紅細(xì)胞。

解凍紅細(xì)胞洗滌前后留取樣本檢測冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量。結(jié)果紅細(xì)胞回收率(84±4)%，游離血紅蛋白濃度(0.31±0.12)g/L，體外溶血試驗(yàn)(33±15)%，甘油殘余量(6.3±2.4)g/L。細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)陰性。結(jié)論ACP215型血液處理儀可全程自動(dòng)化無菌制備冰凍紅細(xì)胞，人為操作誤差小，實(shí)現(xiàn)了稀有血型紅細(xì)胞的長期保存及使用（10年）但是臨床使用前必須解凍去甘油，使洗滌后的紅細(xì)胞中甘油殘留量＜10g/L，因此，解凍去甘油的制備過程至關(guān)重要。

1 臨床資料

本站2010年和2011年共制備解凍去甘油紅細(xì)胞476μ。機(jī)器與材料：HaemoneticsACP215型血液處理儀（美國血液技術(shù)公司），-70C三洋專用冰箱 （日本SANYO公司），37℃水浴箱 （國產(chǎn)），無菌接駁機(jī)（泰爾茂），庫爾特血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（美國產(chǎn)品），721型分光光度計(jì)（國產(chǎn)）。REF235一次性血液處理耗材，羥乙基淀粉（130/0.4Nacl）9%的高滲鹽水，0.9%等滲鹽水，電子稱，血液測溫儀。

2 制備過程

將-80℃RH(-)紅細(xì)胞解凍，冰凍紅細(xì)胞取出后迅速溶于37℃水浴內(nèi)4～6min，同時(shí)不斷搖動(dòng)使血袋與水充分接觸加速融化，切記不能用手用力擠壓血袋，以免血袋破裂或造成紅細(xì)胞的機(jī)械性損傷，融化程度以血袋內(nèi)無冰晶內(nèi)為準(zhǔn)，測試血袋表面溫度為20～24℃，并稱重血液。

ACP215全自動(dòng)處理儀的安裝，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程選擇去甘油化程序進(jìn)行正確安裝，同時(shí)對管路感知器校準(zhǔn)離心杯安裝測試，添加管路是否打開，用無菌接駁機(jī)連接紅細(xì)胞袋和耗材的紅色條紋管路，確保融化的紅細(xì)胞懸液在管路中密閉無滲漏。將紅細(xì)胞血袋放置振蕩器上。

將洗滌所需的參數(shù)設(shè)置好，按STRT鍵開始去甘油過程，首先用高滲鹽水預(yù)沖160mL（單份80mL）然后機(jī)器進(jìn)入高滲鹽水平衡靜止時(shí)間為150s。

大稀釋步驟一：首先加入稀釋液羥乙基淀粉（羥乙基淀粉有保護(hù)紅細(xì)胞的作用）340mL（單份170mL），然后機(jī)器進(jìn)入平衡靜止時(shí)段，平衡時(shí)間為60s，平衡完畢等待洗滌的紅細(xì)胞液體回吸到離心杯，此時(shí)機(jī)器進(jìn)行高速離心，將上清液逐漸移出杯體，隨后機(jī)器有一步無菌測試檢測需等待15s，測試完畢然后進(jìn)入小沖洗過程，沖洗離心杯中的小紅細(xì)胞，沖洗結(jié)束后再次進(jìn)入等待時(shí)段(此時(shí)等待5s)5s后離心機(jī)進(jìn)行剎車，此時(shí)管路自動(dòng)進(jìn)入關(guān)閉狀態(tài)，只有廢液管路開放，排除離心杯中的氣體，機(jī)器自動(dòng)將血液移出到血袋，抽空離心杯，此時(shí)需要180s。

大稀釋步驟二：大稀釋步驟1完成后，機(jī)器進(jìn)入2步稀釋過程，首先加入的還是羥乙基淀粉大約160mL，次過程繼續(xù)加入稀釋液不足部分換生理鹽水，滴加完畢后平衡靜置60s，將洗滌的懸浮紅細(xì)胞再次回吸收到離心杯，進(jìn)行第二次離心，再次去除上清液，此時(shí)血液中的甘油已大部去除，少量剩余部分將在小稀釋步驟再次去除。

小稀釋步驟：小稀釋洗滌溶液均為等滲鹽水，洗滌次數(shù)為6次，,過程為將等滲鹽水加入離心杯中，流出液離開離心杯進(jìn)入制品廢液袋。管路感知器監(jiān)測游離血紅蛋白水平。離心機(jī)停止運(yùn)轉(zhuǎn)，離心杯中30mL內(nèi)容物移到紅細(xì)胞袋中，經(jīng)45s延遲時(shí)間，離心機(jī)重新啟動(dòng)，30mL內(nèi)容物從紅細(xì)胞袋返回到離心杯中，再離心60s,如此重復(fù)6次。

第 1 次60mL（流速 50mL）；第 2 次 80mL（流速 50mL）；第 3次100mL（流速 75mL）；第 4 次 130mL（流速 75mL）；第 5 次 160mL（流速 100mL）；第 6 次 300mL（流速 100mL）。

小稀釋步驟進(jìn)入第6次洗滌時(shí)，機(jī)器會有提示，觀察上次廢液的顏色是否澄清，此時(shí)工作人員需觀察廢液管路，如果澄清按YES鍵繼續(xù)，成品全部回收到成品袋。如果覺得不澄清按NO鍵,機(jī)器將在繼續(xù)加鹽水洗滌1次。整個(gè)洗滌去甘油過程共用洗滌溶液約1900mL,時(shí)間為62min。

3 制備結(jié)果

ACP215全自動(dòng)血液處理儀所制備的RH(-)紅細(xì)胞，符合《全血及成分血質(zhì)量要求》GB18469-2001標(biāo)準(zhǔn)。檢測項(xiàng)目結(jié)果如下。

解凍紅細(xì)胞洗滌前后留取樣本檢測紅細(xì)胞質(zhì)量。結(jié)果紅細(xì)胞回收率(84±4)%，游離血紅蛋白濃度(0.31±0.12)g/L，體外溶血試驗(yàn)(33±15)%，甘油殘余量(6.3±2.4)g/L。細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)陰性。ACP215型全自動(dòng)血液處理儀可全程自動(dòng)化無菌制備去甘油化紅細(xì)胞，人為操作誤差小。實(shí)現(xiàn)了稀有血型紅細(xì)胞的長期保存及使用（十年）但是臨床使用前必須解凍去甘油，使洗滌后的紅細(xì)胞中甘油殘留量＜10g/L，因此，解凍去甘油的制備過程至關(guān)重要。

ACP215全自動(dòng)血液處理儀去甘油的紅細(xì)胞質(zhì)量符合國標(biāo)要求，每一步控制過程達(dá)到全程質(zhì)控的目的。制備結(jié)果顯示紅細(xì)胞洗滌機(jī)去甘油紅細(xì)胞回收率高，污染零風(fēng)險(xiǎn)，制品中各項(xiàng)指標(biāo)符合國家成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)論

ACP215全自動(dòng)血液處理儀去甘油洗滌方便快捷并能提高冰凍去甘油化紅細(xì)胞質(zhì)量，基本實(shí)現(xiàn)冰凍紅細(xì)胞的全自動(dòng)制備（除更換液體），程序化可最大程度減少人為差錯(cuò)事故的發(fā)生，保證產(chǎn)品質(zhì)量；自動(dòng)化操作減少了勞動(dòng)強(qiáng)度，可做到一人多機(jī)操作。因?yàn)閷α魉俚木_控制，更好地滿足臨床搶救用血需要。

[1] 邱艷.全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003ISBN7-5066-3285-5.

[2] 《中華人民共和國國標(biāo)準(zhǔn)化法》,1988年12月29日第七屆全國人民代表大會常務(wù)委員會第五次會議通過.

[3] 《中華人民共和國產(chǎn)品質(zhì)量法》,1993年2月22日第七屆全國人民代表大會常務(wù)委員會第三十次會議通過；根據(jù)2000年7月8日第九屆全國人民代表大會常務(wù)委員會第十六次會議通過.