吳德佩楊軍

針刺對干眼癥患者淚液黏蛋白5AC表達(dá)的影響

吳德佩1楊軍2

目的觀察針刺治療干眼癥的療效及對淚液黏蛋白（Mucin,MUC）5AC表達(dá)的影響。方法50例（100只眼）干眼癥患者采用針刺局部和遠(yuǎn)端相結(jié)合的方法，取穴睛明、攢竹、太陽、四白等，治療前后觀察患者干眼癥狀，并行淚液分泌試驗(yàn)（Schirmer I test，SIt）、淚膜破裂時(shí)間（tear break-up time,BUT）檢查，免疫組化方法檢測淚液黏蛋白5AC的表達(dá)量。結(jié)果淚液分泌量（mm/5 min）：治療前5.2±2.6，治療后7.3±2.1（t=2.71，P=0.03）。淚膜破裂時(shí)間（s）：治療前3.7±1.4，治療后6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）。淚液黏蛋白5AC表達(dá)量（μg/ml）：治療前0.77±0.13，治療后0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）。臨床療效：顯效43只眼，有效46只眼，無效11只眼，總有效率為89%。結(jié)論針刺治療可以促進(jìn)淚液黏蛋白5AC的表達(dá)，提高淚膜穩(wěn)定性，明顯改善干眼癥狀。

針刺；干眼癥；黏蛋白5AC

干眼癥是由于淚液量或質(zhì)的異常引起淚膜不穩(wěn)定和眼表面損害，從而導(dǎo)致眼部不適癥狀的一類疾病。任何原因?qū)е碌难郾砻鏈I膜異常均可引起干眼〔1-2〕。黏蛋白（mucin，MUC）是淚膜的重要組成部分，具有穩(wěn)定淚膜、保護(hù)眼表等作用，黏蛋白的改變，包括量的減少和糖基化的改變，是干眼癥發(fā)病機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)〔3-4〕。已知針刺能促進(jìn)淚液的分泌，有效提高淚膜的穩(wěn)定性〔5〕，但是否對淚膜黏蛋白表達(dá)產(chǎn)生影響還未見報(bào)道。近年來，筆者采用針刺治療干眼癥取得較好療效，我們在觀察針刺對淚液分泌、淚膜破裂時(shí)間影響的同時(shí)，還對治療前后淚液黏蛋白表達(dá)的變化進(jìn)行了研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)ZY/T001.1-94）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)擬定。（1）癥狀：眼干澀、異物感，視物疲勞，可伴有口鼻干燥等；②淚液分泌量測定（Schirmer I test）＜10 mm/5 min；③淚膜破裂時(shí)間（tear break-up time，BUT）＜10 s。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（2）已簽署知情同意書者。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）結(jié)膜瘢痕化、淚腺開口部閉鎖者。（2）合并有其他結(jié)膜、角膜和虹膜明顯病變者。

1.4 一般資料

觀察病例為2009年1月—2010年12月在我院五官科門診就診的干眼癥患者，共50例（100只眼），男/女=1∶2，年齡（41.6±3.1）歲，病程12個(gè)月～8年。

1.5 治療方法

取穴：頭面部取睛明、攢竹、太陽、四白、百會；遠(yuǎn)端取曲池、外關(guān)、合谷、足三里、三陰交。操作：患者取仰臥位，局部皮膚常規(guī)消毒，睛明采用7 mm無菌毫針淺刺，以患者眼部有酸脹感為度，不行任何手法，其余穴位采用40 mm無菌毫針，平補(bǔ)平瀉。留針20 min。針刺每天1次，10 d為1個(gè)療程。

1.6 觀察指標(biāo)

治療前后進(jìn)行淚液分泌量（Schirmer I test，SIt）、淚膜破裂時(shí)間（tear break-up time，BUT）檢查，并檢測淚液中的黏蛋白（mucin，MUC）5AC的表達(dá)量。

1.7 淚液中MUC5AC表達(dá)量的檢測

1.7.1 樣本的采集：于結(jié)膜囊內(nèi)滴入0.5%丁卡因滴眼液1滴，矚被檢者向鼻測注視，將7 mm×5 mm的長方形硝酸纖維素膜經(jīng)高溫消毒后，將其壓向顳側(cè)角膜緣后2 mm的球結(jié)膜上50 s，然后將硝酸纖維素膜取下于空氣中干燥放入干燥試管中，-20℃保存?zhèn)溆?。每個(gè)樣本重復(fù)3次，取平均值。

1.7.2 MUC5AC表達(dá)量的測定（免疫組織化學(xué)染色）：（1）4℃多聚甲醛固定；（2）3%H2O2室溫孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性；（3）磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗5 min；（4）正常山羊血清37℃封閉45 min；（5）滴加一抗工作液4℃過夜，PBS沖洗3次，每次5 min；（6）滴加二抗工作液，37℃孵育25 min。PBS沖洗5 min；（7）滴加辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）標(biāo)記的鏈霉卵白素，37℃孵育20 min；（8）PBS沖洗3次，每次5 min；（9）DAB顯色，蒸餾水沖洗，終止顯色；（10）顯微照相系統(tǒng)觀察。表達(dá)強(qiáng)度用MPIAS-1000高清晰度彩色圖像分析系統(tǒng)測定五個(gè)視野的光密度，取其平均值，以±s表示。陰性對照用PBS替代一抗，其余步驟同上。

1.8 療效評定

治療1個(gè)療程（10 d）后進(jìn)行療效評定，評定標(biāo)準(zhǔn)參照國家中醫(yī)藥管理局頒布的《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》，以臨床癥狀、淚液分泌量、淚膜破裂時(shí)間為主要觀察指標(biāo)。（1）顯效：癥狀消失，SIt＞10mm/5min，BUT＞10 s。（2）有效：癥狀減輕，SIt值有所增加，BUT較前延長。無效：癥狀無改善，SIt值未增加，BUT無變化。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效

顯效43只眼，有效46只眼，無效11只眼，總有效率為89%。

2.2 治療前后各項(xiàng)指標(biāo)比較

淚液分泌量（mm/5 min）：治療前5.2±2.6，治療后7.3±2.1（t=2.71，P=0.03）。淚膜破裂時(shí)間（s）：治療前3.7±1.4，治療后6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）。淚液黏蛋白5AC表達(dá)量（μg/ml）：治療前0.77±0.13，治療后0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）。

3 討論

目前西醫(yī)對干眼癥的治療主要是應(yīng)用人工淚液或保存患者本身的淚液，這些措施的長期效果均不好〔6〕。本研究中，我們以淚液分泌量、淚膜破裂時(shí)間以及淚液的黏蛋白5AC含量為指標(biāo)，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，對針刺治療干眼癥的效果進(jìn)行了觀察。

干眼癥屬于中醫(yī)“神水將枯”，或“燥證”的范疇，其病機(jī)是由于邪熱留戀，肺陰不足，脾胃濕熱以及肝腎虧損、陰血不足引起邪熱阻絡(luò)、血?dú)獠煌?，或者濕邪阻遏、清氣不升，或者陰血不足，最終導(dǎo)致陰虛津虧、目失濡養(yǎng)?；颊咧饕憩F(xiàn)為眼內(nèi)干澀不舒、瞬目頻頻〔7〕。筆者根據(jù)干眼癥陰虛內(nèi)熱的病理特點(diǎn)，按照局部取穴的原則，篩選出針刺治療干眼癥的常用穴位：睛明、攢竹、太陽、四白、百會。睛明、攢竹同為膀胱經(jīng)之穴，取之以調(diào)養(yǎng)眼部氣血，滋陰清熱；且睛明為五脈之會，為治療眼病的要穴；太陽為眼周穴位，主治目疾。臨床觀察結(jié)果表明，針刺能夠促進(jìn)淚液分泌、延長淚膜破裂時(shí)間，大部分患眼干澀癥狀得以緩解，總有效率為89%（有研究者報(bào)告針刺治療干眼癥的有效率為85%〔8-9〕）。

本研究中我們特別觀察了干眼患者治療前后淚液黏蛋白5AC的變化。黏蛋白是淚膜的主體，由結(jié)膜杯狀細(xì)胞分泌，在維持眼表穩(wěn)定方面有重要作用，如穩(wěn)定淚膜，在瞬目期間潤滑角膜與結(jié)膜上皮，阻止水分蒸發(fā)防止干燥等〔9-10〕。治療前，所有干眼患者的淚液樣本中均檢測到黏蛋白5AC的表達(dá)，經(jīng)過針刺治療1個(gè)療程后，黏蛋白含量較治療前明顯增加，患眼的干澀癥狀也隨之減輕。這說明針刺可以增加淚液中黏蛋白的表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)淚膜的穩(wěn)定性減輕干澀癥狀。目前類似的報(bào)道尚未見到，該結(jié)果為針刺有效治療干眼癥提供了新的理論支持。其作用機(jī)制我們推測可能包括以下3個(gè)方面：（1）直接刺激結(jié)膜杯狀細(xì)胞以及角膜和結(jié)膜上皮細(xì)胞分泌黏蛋白；（2）通過刺激支配分泌黏蛋白的角膜和結(jié)膜上皮的神經(jīng)，間接增加黏蛋白含量；（3）通過刺激水性淚液分泌，減少黏蛋白降解。

總之，本研究表明，針刺治療可以增加干眼癥患者的淚液分泌，延長淚膜破裂時(shí)間，提高淚液中黏蛋白的表達(dá)，促進(jìn)淚膜穩(wěn)定，對治療干眼癥具有較好療效。但針刺對黏蛋白表達(dá)調(diào)控的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

[1]葛堅(jiān).眼科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2005：139-140.

[2]魏立新，楊威，王宏才，等.針灸對干眼癥淚液分泌影響的療效評價(jià)[J].中國針灸，2010，30（9）：709-712.

[3]魏立新，楊威，王宏才，等.針灸治療干眼癥40例臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（5）：65.

[4]龔嵐，孫興懷，馬曉芃，等.針刺治療干眼癥臨床療效和安全性觀察的初步研究[J].中華眼科雜志，2006，42（11）：1026-1028.

[5]高衛(wèi)萍，孫化萍，王育良，等.針刺治療干眼癥的臨床研究[J].中國針灸，2004，24（10）：685-687.

[6]Berry M，EIlingham RB，Corfield AP.Membrance-associated mucins innormolhumanconjunctiuva[J].InvestOphthalmolVisSci，2000，41（2）：398-403.

[7]魏立新，朱兵，楊威.干眼癥的針灸治療思路[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（2）：88.

[8]王中林，何慧琴，黃東，等.整體辨證針刺為主對干眼癥患者淚膜穩(wěn)定性的影響[J].中國針灸，2005，25（7）：460-463.

[9]Gipson IK，Kunert KS，Argneso A.Regulators of mucin gene expression in the ocular surface epithelia[J].Comea，2000，19（6）：89.

[10]蔡蓉蓉，張朝然.粘蛋白與干眼癥[J].眼科研究，2008，26（11）：877-880.

Effect of acupuncture on expression of tear mucins5AC of dry eyes

WU Depei，YANG Jun.Ophthalmology Department，The People's Hospital of Guangnan County，Guangnan 663300，Yunnan Province，China

OBJECTIVETo observe the efficacyof acupuncture treatment on tears mucin5AC expression in patients with dry eyes.METHODSFifty patients（100 eyes）with dry eyes received acupuncture treatment on Jingming（BL1），Cuanzhu（BL2），Taiyang（EX-HN 5）and Quchi（LI 11）.Before and after treatment，tear secretion volume（Schirmer I test），break up time（BUT）were observed.The expression of MUC5AC was detected by immunity histological chemistry.RESULTSThe total effective rate was 89%（89/100）with acupuncture treatment.There was a significant difference in statistics in tear secretion volume（mm/5 min）5.2±2.6 and 7.3±2.1（t=2.71，P=0.03），BUT（s）3.7±1.4 and 6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）and MUC（μg/ml）0.77±0.13 and 0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）in tears before and after treatment.CONCLUSIONSAcupuncture apparently relieved the symptoms of dry eyes.Up regulation of the expression of tear Mucins5AC may be one of the underlying mechanisms.

acupuncture；dry eye syndrome；mucin5AC

R777.34；R245.3

B

1002-4379（2012）04-0267-03

1云南省廣南縣人民醫(yī)院五官科，廣南縣663300

2云南省第一人民醫(yī)院眼科，昆明市

楊軍，E-mail：lai_doc@163.com